Name: intracranial injection of adeno-associated viral vectors
Uploaded: 2010-11-17T18:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Intracranial Injection of Adeno-associated Viral Vectors at JoVE.com

<p class="jove_content"> Questo lavoro è stato reso possibile da finanziamenti del NIH (EY012977), un Premio alla Carriera nel Scienze Biomediche dal Fondo Burroughs Wellcome, la Fondazione Whitehall, e la Fondazione Sloan (AKM). </p>

<p class="jove_title"> 1. Virus Manipolazione e stoccaggio </p><ol><li> Adeguata protezione e le tecniche di manipolazione devono essere scelti in base al livello di biosicurezza del virus da utilizzare. Queste pratiche possono essere trovati in biosicurezza in microbiologiche e Biomedica Laboratori 5 <sup>°</sup> edizione, disponibile sul sito del CDC <br /> ( <a href="http://www.cdc.gov/od/OHS/biosfty/bmbl5/bmbl5toc.htm">http://www.cdc.gov/od/OHS/biosfty/bmbl5/bmbl5toc.htm</a> ). L&#39;uso di vettori AAV è approvato per la Biosicurezza Live...

<ol>
	<li>Kaplitt, M. G., Leone, P., Samulski, R. J., Xiao, X., Pfaff, D. W., O'Malley, K. L., During, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-term+gene+expression+and+phenotypic+correction+using+adeno-associated+virus+vectors+in+the+mammalian+brain.">Long-term gene expression and phenotypic correction using adeno-associated virus vectors in the mammalian brain.</a> <em style='font-style: italic'>Nat Genet</em>. <b>8</b>, 148-154 (1994).</li><li>Harding, T. C., Dickinson, P. J., Roberts, B. N., Yendluri, S., Gonzalez-Edick, M., Lecouteur, R. A., Jooss, K. U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enhanced+gene+transfer+efficiency+in+the+murine+striatum+and+an+orthotopic+glioblastoma+tumor+model,+using+AAV-7-+and+AAV-8-pseudotyped+vectors.">Enhanced gene transfer efficiency in the murine striatum and an orthotopic glioblastoma tumor model, using AAV-7- and AAV-8-pseudotyped vectors.</a> <em style='font-style: italic'>Hum Gene Ther</em>. <b>17</b>, 807-820 (2006).</li><li>Lo, W. D., Qu, G., Sferra, T. J., Clark, R., Chen, R., Johnson, P. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adeno-associated+virus-mediated+gene+transfer+to+the+brain:+duration+and+modulation+of+expression.">Adeno-associated virus-mediated gene transfer to the brain: duration and modulation of expression.</a> <em style='font-style: italic'>Hum Gene Ther</em>. <b>10</b>, 201-213 (1999).</li><li>Lowery, R. L., Zhang, Y., Kelly, E. A., Lamantia, C. E., Harvey, B. K., Majewska, A. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+long-term+labeling+of+cells+in+the+developing+and+adult+rodent+visual+cortex+using+double-stranded+adeno-associated+viral+vectors.">Rapid long-term labeling of cells in the developing and adult rodent visual cortex using double-stranded adeno-associated viral vectors.</a> <em style='font-style: italic'>Dev Neurobiol</em>. <b>69</b>, 674-688 (2009).</li></ol>

<p class="jove_content"> Virale mediata consegna del gene ha un grande potenziale per lo studio di processi neurologici e trattamento dei disturbi cerebrali <sup>1,2,3.</sup> La grande versatilità di questa tecnica può anche essere sfruttato per un&#39;etichetta fluorescente cellule per l&#39;imaging sia <em>in vitro che in vivo</em> <sup>4.</sup> Qui mostriamo una procedura dettagliata per la trasduzione di neuroni e glia nella corteccia visiva del mouse utilizzando un doppio filamento del virus adeno-associazione che esprime maggiore protei...

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		<div>
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		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Stoelting Mouse and Neonatal Rat Adaptor</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Stoelting</td>
<td>51625</td>
<td>Regular stereotax for securing animals for surgery may be substituted</td>
</tr>
<tr>
<td>Extra Fine Bonn Scissors, 8.5cm, straight tip, cutting edge 13mm</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fine Science Tools</td>
<td>14084-08</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Eye Dressing Forceps, 10cm, tip width 0.5mm, curved</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fine Science Tools</td>
<td>11152-10</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Dumont #5/45 Forceps- Dumoxel Standard Tip, 11cm, angled</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fine Science Tools</td>
<td>11251-35</td>
<td>Extra-fine tipped forceps for performing craniotomy</td>
</tr>
<tr>
<td>Standard Pattern Forceps, straight, 2.5mmx1.35mmtip, 12cm</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fine Science Tools</td>
<td>11000-12</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Microtorque Control Box and Tech2000 handpiece</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Ram Products, Inc.</td>
<td>TECH2000ON/OFF</td>
<td>Dental drill</td>
</tr>
<tr>
<td>Micro Drill Stainless Steel Burrs 1.4mm tip diameter</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fine Science Tools</td>
<td>19008-14</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Wiretrol micropipettes, to deliver 1-5 Ul</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR International/ Drummond</td>
<td>5-000-1001 or 53480-287</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Mineral oil</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR International</td>
<td>29447-338</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Manual Micromanipulator and Tilting Base (right-handed)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>World Precision Instruments, Inc.</td>
<td>M3301-M3-R</td>
<td>Used for determining stereotaxic co-ordinates</td>
</tr>
<tr>
<td>UltraMicroPump (UMP3) (one) with SYS-Micro4 Controller</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>World Precision Instruments, Inc.</td>
<td>UMP3-1</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Sutures</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR International</td>
<td>95056-952</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>P-97 Flaming/Brown Micropipette Puller</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sutter Instruments</td>
<td>P-97</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Tobradex</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Available from your institution&#x2019;s veterinary services</td>
</tr>		</tbody>
		</table>
		</div>
	

intracranial injection of adeno-associated viral vectors

<p class="jove_content"> Intracranica iniezione di vettori virali ingegnerizzati per esprimere una proteina fluorescente è una tecnica di etichettatura versatile per la visualizzazione di sottoinsiemi di cellule nelle differenti regioni del cervello sia <em>in vivo che</em> in sezioni cerebrali. A differenza della iniezione di coloranti fluorescenti, etichettatura virale offre targeting di tipi di cellule individuali ed è meno costoso e richiede tempo che stabilire linee di topi transgenici. In questa tecnica, un virale adeno-associato (AAV) vettore viene iniettato intracranially usando le coordinate stereotassica, una micropipetta e una pompa automatica per la consegna precisa AAV alla zona desiderata con minimo danno al tessuto circostante. Parametri di iniezione può essere adattata alle singole sperimentazioni regolando l&#39;età degli animali a velocità di iniezione, la posizione di iniezione, il volume di iniezione, di iniezione, AAV sierotipo e il promotore di guida l&#39;espressione genica. A seconda delle condizioni scelte, virale indotta l&#39;espressione del transgene può permettere la visualizzazione di gruppi di cellule, cellule singole o multa processi cellulari, fino al livello delle spine dendritiche. L&#39;esperimento qui rappresenta una iniezione di AAV a doppio filamento che esprimono la proteina fluorescente verde per l&#39;etichettatura dei neuroni e glia nella corteccia visiva primaria del mouse. </p>

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Intracranial Injection of Adeno-associated Viral Vectors

<p class="jove_content">Qui vi presentiamo l&#39;iniezione intracranica di vettori AAV per la marcatura fluorescente di neuroni e glia nella corteccia visiva.</p>

Iniezione intracranica di adeno-associato vettori virali

Intracranial injection of viral vectors engineered to express a fluorescent protein is a versatile labeling technique for visualization of specific ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

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