Gedeeltelijke ondersteuning van beurzen aan MRS is van Natural Sciences and Engineering Research Council of Canada (NSERC), de Harry Botterell Stichting voor Neuroscience Research, ARC, en de Garfield Kelly Cardiovascular Research and Development Fund. SRA is een ontvanger van de Universiteit van de Queen&#39;s Research Award en de Robert J. Wilson Fellowship. PJ is een ontvanger van Graduate van de Queen&#39;s Award en de Robert J. Wilson Fellowship. AG en SA zijn ontvangers van Graduate de Queen&#39;s Award. SF was de ontvanger van de Ontario Graduate Scholarship in wetenschap en technologie (OGSST). AG is de ontvanger van Franklin van de Koningin Bracken Graduate Scholarship. SA is de ontvanger van RS van de Koningin McLaughlin Graduate Scholarship.

1. Resurrecting Frozen macrofaagcellen <ol><li> Voordat wederopstanding van bevroren cellen van de -80 ° C vriezer, moet men kweekmedium met behulp van steriel gefiltreerd Dulbecco&#39;s Modified Eagle&#39;s Medium (DMEM) aangevuld met 10% foetaal bovine serum (FBS) en 5 ug / ml plasmocin voor te bereiden. Plasmocin is een antibiotica-oplossing wordt gebruikt in het onderzoek te elimineren en te voorkomen mycoplasma besmetting van celculturen. </li><li> Voor een flacon van bevroren cellen, voegt men 4 ml, 1 ml van de...

<ol>
	<li>Amith, S. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neu1+desialylation+of+sialyl+alpha-2,3-linked+beta-galactosyl+residues+of+TOLL-like+receptor+4+is+essential+for+receptor+activation+and+cellular+signaling.">Neu1 desialylation of sialyl alpha-2,3-linked beta-galactosyl residues of TOLL-like receptor 4 is essential for receptor activation and cellular signaling.</a> Cell Signal. 22, 314-324 (2010).</li><li>Amith, S. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dependence+of+pathogen+molecule-induced+Toll-like+receptor+activation+and+cell+function+on+Neu1+sialidase.">Dependence of pathogen molecule-induced Toll-like receptor activation and cell function on Neu1 sialidase.</a> Glycoconjugate Journal. 26, 1197-1212 (2009).</li><li>Woronowicz, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dependence+of+neurotrophic+factor+activation+of+Trk+tyrosine+kinase+receptors+on+cellular+sialidase.">Dependence of neurotrophic factor activation of Trk tyrosine kinase receptors on cellular sialidase.</a> Glycobiology. 17, 10-24 (2007).</li><li>Jayanth, P., Amith, S. R., Gee, K., Szewczuk, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neu1+Sialidase+and+Matrix+Metalloproteinase-9+Cross-talk+is+Essential+for+Neurotrophin+Activation+of+Trk+Receptors+and+Cellular+Signaling.">Neu1 Sialidase and Matrix Metalloproteinase-9 Cross-talk is Essential for Neurotrophin Activation of Trk Receptors and Cellular Signaling.</a> Cell. Signal. 22, 1193-1205 (2010).</li><li>Finlay, T. M., Jayanth, P., Amith, S. R., Glimour, A., Guzzo, C., Gee, K., Beyaert, R., Szewczuk, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Thymoquinone+from+nutraceutical+black+cumin+oil+activates+Neu4+sialidase+in+live+macrophage,+dendritic,+and+normal+and+type+I+sialidosis+human+fibroblast+cells+via+GPCR+G&#945;i+proteins+and+matrix+metalloproteinase-9.">Thymoquinone from nutraceutical black cumin oil activates Neu4 sialidase in live macrophage, dendritic, and normal and type I sialidosis human fibroblast cells via GPCR G&#945;i proteins and matrix metalloproteinase-9.</a> Glycoconj J. 27, 329-348 (2010).</li><li>Seyrantepe, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+Phagocytosis+in+Macrophages+by+Neuraminidase+1.">Regulation of Phagocytosis in Macrophages by Neuraminidase 1.</a> Journal of Biological Chemistry. 285, 206-215 (2010).</li></ol>

Met behulp van de nieuw ontwikkelde test om sialidase te detecteren in levende macrofaagcellen 2, hebben we gebruik gemaakt van deze technologie om sialidase activiteit te detecteren in ligand-geïnduceerde sialidase activiteit in live BMC-2 macrofaag-cellen in een dosisafhankelijke wijze zowel in live-DC-2.4 dendritische cellen , HEK-TLR4/MD2, HEK293, SP1 mammae adenocarcinoom cellen, menselijke WT en 1140F01 en WG0544 type I sialidosis fibroblast cellen. Neuraminidase-remmers zoals Tamiflu (oseltamivir fosf...

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>DMEM</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Gibco, Rockville, MD</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>4-MUNANA</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Biosynth International Inc., Itasca, IL, USA</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Fetal calf serum</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>HyClone, Logan, Utah, USA</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>DakoCytomation, Fluorescent Mounting Media</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>DAKO North America, Inc., Carpintenia, CA</td>
<td>S3023</td>
<td>15 mL</td>
</tr>
<tr>
<td>Tamiflu (Oseltamivir Phosphate)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Hoffman La Roche</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

detection of  neu1 sialidase activity in regulating toll-like receptor activation

Zoogdieren Toll-like receptoren (TLR&#39;s) zijn een familie van receptoren die pathogeen-geassocieerde moleculaire patronen te herkennen. Niet alleen zijn TLRs cruciaal sensoren van micro-organismen (bijvoorbeeld virussen, bacteriën en parasieten) infecties, ze spelen ook een belangrijke rol in de pathofysiologie van infectieziekten, inflammatoire ziekten, en eventueel in auto-immuunziekten. Zo moeten de intensiteit en de duur van TLR responsen tegen infectieziekten goed worden gecontroleerd. Hieruit volgt dat het begrip van de structurele integriteit van sensor receptoren, hun ligand-interacties en signalering componenten essentieel is voor de volgende immunologische bescherming. Het zou ook belangrijke kansen voor de ziekte van wijziging door middel van sensor manipulatie. Hoewel de signaalwegen van TLR sensoren zijn goed gekarakteriseerd, de parameters die de interacties tussen de sensoren en hun liganden nog steeds slecht gedefinieerd. We hebben onlangs een nieuw mechanisme van TLR activering door zijn natuurlijke ligand, die nog niet eerder waargenomen 1,2. Het suggereert dat ligand-geïnduceerde TLR activatie strak wordt gecontroleerd door Neu1 sialidase activering. We hebben ook gemeld dat Neu1 strak neurotrofine receptoren zoals TrkA en TrkB 3, die Neu1 en matrix metalloproteinase-9 (MMP-9) cross-talk in complex met de receptoren 4 te betrekken regelt. De sialidase test is in eerste instantie gebruiken om een nieuw ligand, thymoquinone vinden, in de activering van Neu4 sialidase op het celoppervlak van macrofagen, dendritische cellen en fibroblast cellen via GPCR Gαi eiwitten en MMP-9 5. Voor TLR receptoren, onze gegevens blijkt dat Neu1 sialidase al in complex met TLR-2, -3 en -4 receptoren, en wordt geïnduceerd na ligand binding aan een receptor. Geactiveerde Neu1 sialidase hydrolyseert sialyl α-2 ,3-gekoppelde β-galactosyl residuen afstand van ligand binding aan sterische hinder te verwijderen TLR-4 dimerisatie, MyD88/TLR4 complex werving en selectie, NFkB activering en pro-inflammatoire cel responsen. In een gezamenlijk rapport, is Neu1 sialidase is aangetoond dat fagocytose regelen macrofaagcellen 6. Tezamen genomen, heeft de sialidase test heeft ons met krachtige inzichten om de moleculaire mechanismen van ligand-geïnduceerde receptor activering. Hoewel de precieze relatie tussen Neu1 sialidase en de activering van TLR, Trk receptoren is nog niet volledig opgehelderd, zou het een nieuwe of baanbrekende benadering vertegenwoordigen naar cel regelgeving paden.

Watch this Scientific Journal Video about Detection of  Neu1 Sialidase Activity in Regulating TOLL-like Receptor Activation at JoVE.com

Detection of  Neu1 Sialidase Activity in Regulating TOLL-like Receptor Activation

De sialidase test is een eenvoudige technische aanpak die nieuwe moleculaire mechanisme (s) van TLR sensoren van microbiële infecties en betrokkenheid bij inflammatoire ziekten op de receptor niveau op het celoppervlak van de live macrofagen zullen toelichten.

Detectie van Neu1 Sialidase activiteit in het reguleren van Toll-like receptor activering

Mammalian Toll-like receptors (TLRs) are a family of receptors that recognize pathogen-associated molecular patterns. Not only are TLRs crucial sensors of ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Combination of Adhesive-tape-based Sampling and Fluorescence in situ Hybridization for Rapid Detection of Salmonella on Fresh Produce

Combination of Adhesive-tape-based Sampling and Fluorescence in situ Hybridization for Rapid Detection of Salmonella on Fresh Produce

Combinatie van Adhesive-tape-gebaseerde Sampling en fluorescentie In situ Hybridisatie voor snelle detectie van Salmonella Op Fresh Produce

This protocol describes a simple approach for adhesive-tape-based sampling of tomato and other fresh produce surfaces, followed by on-tape fluorescence in ...

Quantitative Imaging of Lineage-specific Toll-like Receptor-mediated Signaling in Monocytes and Dendritic Cells from Small Samples of Human Blood

Quantitative Imaging van Lineage-specifieke Toll-like receptor-gemedieerde signalisatie in monocyten en dendritische cellen van de kleine monsters van menselijk bloed

Individual variations in immune status determine responses to infection and contribute to disease severity and outcome.  Aging is associated with an ...

Saliva, Salivary Gland, and Hemolymph Collection from Ixodes scapularis Ticks

Saliva, Salivary Gland, and Hemolymph Collection from Ixodes scapularis Ticks

Speeksel, speekselklieren en hemolymfe Collectie van Ixodes scapularis Teken

Ticks are found worldwide and afflict humans with many tick-borne illnesses. Ticks are vectors for pathogens that cause Lyme disease and tick-borne ...

Methods for Quantitative Detection of Antibody-induced Complement Activation on Red Blood Cells

Methoden voor de kwantitatieve detectie van antilichaam-geïnduceerde complement activatie op de rode bloedcellen

Antibodies against red blood cells (RBCs) can lead to complement activation resulting in an accelerated clearance via complement receptors in the liver ...

Activation and Measurement of NLRP3 Inflammasome Activity Using IL-1&#946; in Human Monocyte-derived Dendritic Cells

Activation and Measurement of NLRP3 Inflammasome Activity Using IL-1ÃƒÅ½Ã‚Â² in Human Monocyte-derived Dendritic Cells

Activering en waardering van NLRP3 inflammasome activiteit met behulp van IL-1β in Human Monocyt-afgeleide dendritische cellen

Inflammatory processes resulting from the secretion of Interleukin (IL)-1 family cytokines by immune cells lead to local or systemic inflammation, tissue ...

Isolation of Murine Peritoneal Macrophages to Carry Out Gene Expression Analysis Upon Toll-like Receptors Stimulation

Isolatie van muizen peritoneale macrofagen uit te voeren analyse van genexpressie Bij Toll-like receptoren Stimulatie

During infection and inflammation, circulating monocytes leave the bloodstream and migrate into tissues, where they differentiate into macrophages. ...

Isolation and Activation of Murine Lymphocytes

Isolatie en Activering van Muizen lymfocyten

B and T cells, with their extremely diverse antigen-receptor repertoires, have the ability to mount specific immune responses against almost any invading ...

Flow Cytometric Analysis of Natural Killer Cell Lytic Activity in Human Whole Blood

Flow cytometrische analyse van de NK-cel lytische activiteit in humaan volbloed

NK cell cytotoxicity is a widely used measure to determine the effect of outside intervention on NK cell function. However, the accuracy and ...

Detection of Inflammasome Activation and Pyroptotic Cell Death in Murine Bone Marrow-derived Macrophages

Detectie van Inflammasome-activering en Pyroptotic celdood in lymfkliertest beenmerg-afgeleide macrofagen

Inflammasomes are innate immune signaling platforms that are required for the successful control of many pathogenic organisms, but also promote ...

A High-throughput Platform for the Screening of Salmonella spp./Shigella spp.

A High-throughput Platform for the Screening of Salmonella spp./Shigella spp.

Een High-throughput Platform voor de Screening van Salmonella spp. /Shigella spp.

Fecal-oral transmission of acute gastroenteritis occurs from time to time, especially when people who handled food and water are infected by Salmonella ...