Teilweise Unterstützung durch Zuschüsse zu MRS ist von Natural Sciences and Engineering Research Council of Canada (NSERC), die Harry Botterell Foundation for Neuroscience Research, ARC, und die Garfield Kelly Cardiovascular Research und Development Fund. SRA ist ein Empfänger der Queens University Research Award und dem Robert J. Wilson Fellowship. PJ ist ein Empfänger der Königin Graduate Award und dem Robert J. Wilson Fellowship. AG und SA werden die Empfänger der Königin Graduate Award. SF war der Empfänger der Ontario Graduate Scholarship in Science and Technology (OGSST). AG ist der Empfänger der Königin Franklin Bracken Graduate Scholarship. SA ist der Empfänger der Königin RS McLaughlin Graduate Scholarship.

1. Resurrecting Gefrorene Makrophagen <ol><li> Vor Wiederbelebung eingefrorenen Zellen aus dem -80 ° C Gefrierschrank, muss man Kulturmedium Verwendung sterilfiltriert Dulbecco modifiziertem Eagle-Medium (DMEM) mit 10% fötalem Rinderserum (FBS) und 5 g / ml plasmocin ergänzt vorzubereiten. Plasmocin ist eine Antibiotika-Lösung in unsere Forschung zur Beseitigung und Vermeidung von Mykoplasmen-Kontaminationen von Zellkulturen. </li><li> Für ein Fläschchen von gefrorenen Zellen gibt man 4 mL, 1 mL der kultivierten...

<ol>
	<li>Amith, S. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neu1+desialylation+of+sialyl+alpha-2,3-linked+beta-galactosyl+residues+of+TOLL-like+receptor+4+is+essential+for+receptor+activation+and+cellular+signaling.">Neu1 desialylation of sialyl alpha-2,3-linked beta-galactosyl residues of TOLL-like receptor 4 is essential for receptor activation and cellular signaling.</a> Cell Signal. 22, 314-324 (2010).</li><li>Amith, S. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dependence+of+pathogen+molecule-induced+Toll-like+receptor+activation+and+cell+function+on+Neu1+sialidase.">Dependence of pathogen molecule-induced Toll-like receptor activation and cell function on Neu1 sialidase.</a> Glycoconjugate Journal. 26, 1197-1212 (2009).</li><li>Woronowicz, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dependence+of+neurotrophic+factor+activation+of+Trk+tyrosine+kinase+receptors+on+cellular+sialidase.">Dependence of neurotrophic factor activation of Trk tyrosine kinase receptors on cellular sialidase.</a> Glycobiology. 17, 10-24 (2007).</li><li>Jayanth, P., Amith, S. R., Gee, K., Szewczuk, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neu1+Sialidase+and+Matrix+Metalloproteinase-9+Cross-talk+is+Essential+for+Neurotrophin+Activation+of+Trk+Receptors+and+Cellular+Signaling.">Neu1 Sialidase and Matrix Metalloproteinase-9 Cross-talk is Essential for Neurotrophin Activation of Trk Receptors and Cellular Signaling.</a> Cell. Signal. 22, 1193-1205 (2010).</li><li>Finlay, T. M., Jayanth, P., Amith, S. R., Glimour, A., Guzzo, C., Gee, K., Beyaert, R., Szewczuk, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Thymoquinone+from+nutraceutical+black+cumin+oil+activates+Neu4+sialidase+in+live+macrophage,+dendritic,+and+normal+and+type+I+sialidosis+human+fibroblast+cells+via+GPCR+G&#945;i+proteins+and+matrix+metalloproteinase-9.">Thymoquinone from nutraceutical black cumin oil activates Neu4 sialidase in live macrophage, dendritic, and normal and type I sialidosis human fibroblast cells via GPCR G&#945;i proteins and matrix metalloproteinase-9.</a> Glycoconj J. 27, 329-348 (2010).</li><li>Seyrantepe, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+Phagocytosis+in+Macrophages+by+Neuraminidase+1.">Regulation of Phagocytosis in Macrophages by Neuraminidase 1.</a> Journal of Biological Chemistry. 285, 206-215 (2010).</li></ol>

Mit dem neu entwickelten Assay Sialidase-Aktivität in lebenden Makrophagen 2 zu erfassen, haben wir diese Technologie, um Sialidase-Aktivität in Liganden-induzierter Sialidase-Aktivität zu erkennen in Live-BMC-2 Makrophagen in einer dosisabhängigen Weise sowie in Live-DC-2.4 dendritischen Zellen , HEK-TLR4/MD2, HEK293, SP1 Mamma-Adenokarzinom-Zellen, menschliche WT und 1140F01 und WG0544 Typ I Sialidose Fibroblasten. Neuraminidase-Hemmer wie Tamiflu (Oseltamivir Phosphat) gehemmt thymoquinone-induzierte S...

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		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>DMEM</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Gibco, Rockville, MD</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>4-MUNANA</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Biosynth International Inc., Itasca, IL, USA</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Fetal calf serum</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>HyClone, Logan, Utah, USA</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>DakoCytomation, Fluorescent Mounting Media</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>DAKO North America, Inc., Carpintenia, CA</td>
<td>S3023</td>
<td>15 mL</td>
</tr>
<tr>
<td>Tamiflu (Oseltamivir Phosphate)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Hoffman La Roche</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

detection of  neu1 sialidase activity in regulating toll-like receptor activation

Mammalian Toll-like Rezeptoren (TLRs) sind eine Familie von Rezeptoren, die pathogen-associated molecular patterns zu erkennen. Nicht nur, dass TLRs entscheidende Sensoren mikrobieller (zB Viren, Bakterien und Parasiten) Infektionen, sie spielen auch eine wichtige Rolle in der Pathophysiologie von Infektionskrankheiten, entzündliche Erkrankungen und möglicherweise bei Autoimmunkrankheiten. So muss die Intensität und Dauer der TLR-Reaktionen gegen Infektionskrankheiten streng kontrolliert werden. Daraus folgt, dass das Verständnis der strukturellen Integrität von Sensor-Rezeptoren, deren Liganden-Wechselwirkungen und Signalisierung Komponenten ist für die nachfolgenden immunologischen Schutz unerlässlich. Es wäre auch wichtig, Möglichkeiten für Krankheit Änderung durch den Sensor Manipulation. Obwohl die Signalwege der TLR-Sensoren sind gut charakterisiert, die Steuerung der Parameter Wechselwirkungen zwischen den Sensoren und deren Liganden immer noch schlecht definiert. Wir haben vor kurzem einen neuen Mechanismus der TLR-Aktivierung durch seine natürlichen Liganden, die nicht zuvor 1,2 beobachtet identifiziert. Er schlägt vor, Liganden-induzierte TLR-Aktivierung ist eng mit Neu1 Sialidase Aktivierung gesteuert. Wir haben auch berichtet, dass Neu1 dicht reguliert Neurotrophinrezeptoren wie TrkA und TrkB 3, die Neu1 und Matrix-Metalloproteinase-9 (MMP-9) cross-talk im Komplex mit dem Rezeptor 4 einzubeziehen. Die Sialidase Assay wurde zunächst verwenden, um einen neuen Liganden, thymoquinone zu finden, bei der Aktivierung von Neu4 Sialidase auf der Zelloberfläche von Makrophagen, dendritischen Zellen und Fibroblasten über GPCR Gαi Proteine ​​und MMP-9 5. Für TLR-Rezeptoren zeigen unsere Daten, dass Neu1 Sialidase bereits im Komplex mit TLR-2, -3 und -4 Rezeptoren, und ist bei der Ligandenbindung entweder Rezeptor induziert. Aktiviert Neu1 Sialidase hydrolysiert Sialyl α-2 ,3-verknüpften β-Galactosylresten entfernt von Ligandenbindung an sterische Hinderung an TLR-4 Dimerisierung, MyD88/TLR4 komplexen Rekrutierung, NFkB-Aktivierung und pro-inflammatorischen Zell-Antworten zu entfernen. In einer gemeinsamen Berichts hat Neu1 Sialidase wurde gezeigt, dass die Phagozytose in Makrophagen Zellen 6 zu regeln. Zusammengenommen hat die Sialidase Assay uns mit leistungsfähigen Einblicke in die molekularen Mechanismen von Liganden-induzierte Rezeptor-Aktivierung zur Verfügung gestellt. Obwohl die genaue Beziehung zwischen Neu1 Sialidase und die Aktivierung von TLR hat Trk-Rezeptoren noch nicht vollständig geklärt werden, wäre es eine neue oder bahnbrechende Ansatz Zellregulation Wege darstellen.

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Detection of  Neu1 Sialidase Activity in Regulating TOLL-like Receptor Activation

Die Sialidase-Test ist eine einfache technische Ansatz, der neuartige molekulare Mechanismus (s) der TLR-Sensoren von mikrobiellen Infektionen und die Beteiligung an entzündlichen Erkrankungen an der Rezeptor-Ebene auf der Zelloberfläche von Live-Makrophagen aufzuklären wird.

Erkennung von Neu1 Sialidase-Aktivität bei der Regulierung der Toll-like-Rezeptor-Aktivierung

Mammalian Toll-like receptors (TLRs) are a family of receptors that recognize pathogen-associated molecular patterns. Not only are TLRs crucial sensors of ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Combination of Adhesive-tape-based Sampling and Fluorescence in situ Hybridization for Rapid Detection of Salmonella on Fresh Produce

Combination of Adhesive-tape-based Sampling and Fluorescence in situ Hybridization for Rapid Detection of Salmonella on Fresh Produce

Kombination von Klebstoff-tape-basierten Sampling und Fluoreszenz In situ Hybridisierung zum schnellen Nachweis von Salmonellen On Fresh Produce

This protocol describes a simple approach for adhesive-tape-based sampling of tomato and other fresh produce surfaces, followed by on-tape fluorescence in ...

Forschung

Immunologie und Infektion

Quantitative Imaging of Lineage-specific Toll-like Receptor-mediated Signaling in Monocytes and Dendritic Cells from Small Samples of Human Blood

Quantitative Bildgebung von Lineage-spezifischen Toll-like Rezeptor-vermittelten Signaltransduktion in Monozyten und dendritischen Zellen aus kleinen Proben des menschlichen Blutes

Individual variations in immune status determine responses to infection and contribute to disease severity and outcome.  Aging is associated with an ...

Saliva, Salivary Gland, and Hemolymph Collection from Ixodes scapularis Ticks

Saliva, Salivary Gland, and Hemolymph Collection from Ixodes scapularis Ticks

Speichel, Speicheldrüse, und Hämolymphe Abholung Ixodes scapularis Zecken

Ticks are found worldwide and afflict humans with many tick-borne illnesses. Ticks are vectors for pathogens that cause Lyme disease and tick-borne ...

Methods for Quantitative Detection of Antibody-induced Complement Activation on Red Blood Cells

Methoden für die quantitative Bestimmung von Antikörper-induzierte Komplementaktivierung auf Red Blood Cells

Antibodies against red blood cells (RBCs) can lead to complement activation resulting in an accelerated clearance via complement receptors in the liver ...

Activation and Measurement of NLRP3 Inflammasome Activity Using IL-1&#946; in Human Monocyte-derived Dendritic Cells

Activation and Measurement of NLRP3 Inflammasome Activity Using IL-1ÃƒÅ½Ã‚Â² in Human Monocyte-derived Dendritic Cells

Aktivierung und Messung der NLRP3 Inflammasom Aktivität mit IL-1β in humanen Monozyten-abgeleiteten dendritischen Zellen

Inflammatory processes resulting from the secretion of Interleukin (IL)-1 family cytokines by immune cells lead to local or systemic inflammation, tissue ...

Isolation of Murine Peritoneal Macrophages to Carry Out Gene Expression Analysis Upon Toll-like Receptors Stimulation

Isolierung von Murine Peritonealmakrophagen zur Durchführung Genexpressionsanalyse Nach Toll-like Rezeptoren Stimulation

During infection and inflammation, circulating monocytes leave the bloodstream and migrate into tissues, where they differentiate into macrophages. ...

Isolation and Activation of Murine Lymphocytes

Isolation und Aktivierung von murinen Lymphozyten

B and T cells, with their extremely diverse antigen-receptor repertoires, have the ability to mount specific immune responses against almost any invading ...

Flow Cytometric Analysis of Natural Killer Cell Lytic Activity in Human Whole Blood

Durchflusszytometrische Analyse von natürlichen Killerzellen lytische Aktivität in menschlichem Vollblut

NK cell cytotoxicity is a widely used measure to determine the effect of outside intervention on NK cell function. However, the accuracy and ...

Detection of Inflammasome Activation and Pyroptotic Cell Death in Murine Bone Marrow-derived Macrophages

Erkennung von Inflammasome Aktivierung und Pyroptotic Zelltod in murinen Makrophagen Knochenmark abgeleitet

Inflammasomes are innate immune signaling platforms that are required for the successful control of many pathogenic organisms, but also promote ...

A High-throughput Platform for the Screening of Salmonella spp./Shigella spp.

A High-throughput Platform for the Screening of Salmonella spp./Shigella spp.

Eine High-Throughput-Plattform für das Screening von Salmonella spp. /Shigella spp.

Fecal-oral transmission of acute gastroenteritis occurs from time to time, especially when people who handled food and water are infected by Salmonella ...