תמיכה חלקית על ידי מענקים גברת הוא מן למדעי הטבע וההנדסה מועצת המחקר של קנדה (NSERC), את Botterell הארי קרן Neuroscience Research, ARC, ואת המחקר קלי גארפילד לב וכלי דם הקרן לפיתוח. SRA הוא חתן פרס המלכה מחקר אוניברסיטת רוברט וילסון המלגה. ג&#39;יי הוא חתן פרס בוגר של המלכה ואת רוברט וילסון המלגה. AG ו SA הם מקבלי פרס בוגר של המלכה. המדע הבדיוני היה מקבל מלגת אונטריו בוגר במדע וטכנולוגיה (OGSST). AG הוא מקבל מלגת פרנקלין של המלכה בוגר שרך. SA הוא מקבל מלגת RS של המלכה בוגר מקלפלין.

1. החייאת&#39; תאים macrophage קפוא <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לפני להחיות תאים קפואים מ -80 מעלות צלזיוס הקפאה, צריך להכין מדיום תרבות באמצעות סטרילי בינונית מסוננת השתנה Dulbecco של הנשר (DMEM) בתוספת 10% בסרום שור העובר (FBS) ו - 5 מיקרוגרם / מ&quot;ל ​​של plasmocin. Plasmoc...

<ol>
	<li>Amith, S. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neu1+desialylation+of+sialyl+alpha-2,3-linked+beta-galactosyl+residues+of+TOLL-like+receptor+4+is+essential+for+receptor+activation+and+cellular+signaling.">Neu1 desialylation of sialyl alpha-2,3-linked beta-galactosyl residues of TOLL-like receptor 4 is essential for receptor activation and cellular signaling.</a> Cell Signal. 22, 314-324 (2010).</li><li>Amith, S. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dependence+of+pathogen+molecule-induced+Toll-like+receptor+activation+and+cell+function+on+Neu1+sialidase.">Dependence of pathogen molecule-induced Toll-like receptor activation and cell function on Neu1 sialidase.</a> Glycoconjugate Journal. 26, 1197-1212 (2009).</li><li>Woronowicz, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dependence+of+neurotrophic+factor+activation+of+Trk+tyrosine+kinase+receptors+on+cellular+sialidase.">Dependence of neurotrophic factor activation of Trk tyrosine kinase receptors on cellular sialidase.</a> Glycobiology. 17, 10-24 (2007).</li><li>Jayanth, P., Amith, S. R., Gee, K., Szewczuk, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neu1+Sialidase+and+Matrix+Metalloproteinase-9+Cross-talk+is+Essential+for+Neurotrophin+Activation+of+Trk+Receptors+and+Cellular+Signaling.">Neu1 Sialidase and Matrix Metalloproteinase-9 Cross-talk is Essential for Neurotrophin Activation of Trk Receptors and Cellular Signaling.</a> Cell. Signal. 22, 1193-1205 (2010).</li><li>Finlay, T. M., Jayanth, P., Amith, S. R., Glimour, A., Guzzo, C., Gee, K., Beyaert, R., Szewczuk, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Thymoquinone+from+nutraceutical+black+cumin+oil+activates+Neu4+sialidase+in+live+macrophage,+dendritic,+and+normal+and+type+I+sialidosis+human+fibroblast+cells+via+GPCR+G&#945;i+proteins+and+matrix+metalloproteinase-9.">Thymoquinone from nutraceutical black cumin oil activates Neu4 sialidase in live macrophage, dendritic, and normal and type I sialidosis human fibroblast cells via GPCR G&#945;i proteins and matrix metalloproteinase-9.</a> Glycoconj J. 27, 329-348 (2010).</li><li>Seyrantepe, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+Phagocytosis+in+Macrophages+by+Neuraminidase+1.">Regulation of Phagocytosis in Macrophages by Neuraminidase 1.</a> Journal of Biological Chemistry. 285, 206-215 (2010).</li></ol>

השימוש assay החדש שפותח כדי לזהות פעילות sialidase בתאים macrophage לחיות 2, השתמשנו בטכנולוגיה זו כדי לזהות פעילות sialidase בפעילות ליגנד-Induced sialidase ב לחיות BMC-2 תאים macrophage באופן תלוי מינון, כמו גם ב לחיות DC-2.4 התאים הדנדריטים , HEK-TLR4/MD2, HEK293, SP1 תאים אדנוקרצינומה החלב, WT האדם 1140F01 ו WG...

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>DMEM</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Gibco, Rockville, MD</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>4-MUNANA</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Biosynth International Inc., Itasca, IL, USA</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Fetal calf serum</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>HyClone, Logan, Utah, USA</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>DakoCytomation, Fluorescent Mounting Media</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>DAKO North America, Inc., Carpintenia, CA</td>
<td>S3023</td>
<td>15 mL</td>
</tr>
<tr>
<td>Tamiflu (Oseltamivir Phosphate)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Hoffman La Roche</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

detection of  neu1 sialidase activity in regulating toll-like receptor activation

היונקים קולטני Toll-כמו (TLRs) הם משפחה של קולטנים המזהים פתוגנים הקשורים דפוסי מולקולרית. לא רק TLRs חיישנים מכריע של חיידקים (כגון וירוסים, חיידקים טפיל) זיהומים, הם גם ממלאים תפקיד חשוב בפתופיזיולוגיה של מחלות זיהומיות, מחלות דלקתיות, ואולי גם מחלות אוטואימוניות. לפיכך, עוצמת ומשך תגובות TLR נגד מחלות זיהומיות חייבים להיות מבוקרים היטב. מכאן להבנת השלמות המבנית של קולטנים חיישן, אינטראקציות ליגנד שלהם ורכיבים איתות חיוני להגנה החיסונית שלאחר מכן. זה יהיה גם לספק הזדמנויות חשובות עבור שינוי המחלה באמצעות מניפולציה חיישן. למרות מסלולי איתות של חיישנים TLR מאופיינים היטב, הפרמטרים השליטה אינטראקציות בין חיישנים ligands שלהם נותרו מוגדרות היטב. זיהינו לאחרונה מנגנון חדשני של הפעלת TLR על ידי ליגנד הטבעי, שלא נצפתה בעבר 1,2. זה מצביע על כך ליגנד-Induced ההפעלה TLR נתונה לפיקוח הדוק על ידי הפעלת Neu1 sialidase. יש לנו עוד דווח כי Neu1 בחוזקה מווסת רצפטורים neurotrophin כמו TrkA ו TrkB 3, אשר כרוך Neu1 והמטריקס metalloproteinase-9 (MMP-9) צולבות לדבר מורכב עם קולטנים 4. Assay sialidase כבר בתחילה להשתמש כדי למצוא thymoquinone רומן, ליגנד, בשנת ההפעלה של sialidase Neu4 על פני התא של מקרופאגים, תאים דנדריטים ותאי פיברובלסטים דרך GPCR Gαi חלבונים MMP-9 5. עבור קולטני TLR, הנתונים שלנו מצביעים על כך Neu1 sialidase כבר מורכבים עם קולטני TLR-2, -3 ו -4, והוא המושרה על הכריכה ליגנד לקולטן אחד. הופעל Neu1 hydrolyzes sialidase sialyl α-2 ,3-linked β-galactosyl שאריות רחוקים ליגנד מחייב להסיר hinderance סטרית כדי dimerization TLR-4, MyD88/TLR4 גיוס מורכבים, ההפעלה NFkB ופרו דלקתיים תגובות התא. בדו&quot;ח משותף, sialidase Neu1 הוכח להסדיר phagocytosis בתאים macrophage 6. יחדיו, assay sialidase סיפק לנו תובנות רבות עוצמה המנגנונים המולקולריים של הפעלת ליגנד-Induced הקולטן. למרות הקשר המדויק בין sialidase Neu1 ואת ההפעלה של TLR, TRK קולטנים טרם הובהר באופן מלא, זה היה לייצג גישה חדשה או חלוצית מסלולים תקנה התא.

Watch this Scientific Journal Video about Detection of  Neu1 Sialidase Activity in Regulating TOLL-like Receptor Activation at JoVE.com

Detection of  Neu1 Sialidase Activity in Regulating TOLL-like Receptor Activation

Assay sialidase היא גישה טכני פשוט כי יהיה להבהיר המנגנון המולקולרי רומן (ים) של חיישנים TLR של זיהומים מיקרוביאליים ומעורבות מחלות דלקתיות ברמת הקולטן על פני התא של מקרופאגים לחיות.

איתור פעילות Neu1 Sialidase בוויסות חיוג כמו הפעלת קולטן

Mammalian Toll-like receptors (TLRs) are a family of receptors that recognize pathogen-associated molecular patterns. Not only are TLRs crucial sensors of ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Combination of Adhesive-tape-based Sampling and Fluorescence in situ Hybridization for Rapid Detection of Salmonella on Fresh Produce

Combination of Adhesive-tape-based Sampling and Fluorescence in situ Hybridization for Rapid Detection of Salmonella on Fresh Produce

שילוב של הדגימה דבק קלטת מבוססי פלואורסצנטי באתרו הכלאה עבור איתור מהיר של סלמונלה על תוצרת טרייה

This protocol describes a simple approach for adhesive-tape-based sampling of tomato and other fresh produce surfaces, followed by on-tape fluorescence in ...

Quantitative Imaging of Lineage-specific Toll-like Receptor-mediated Signaling in Monocytes and Dendritic Cells from Small Samples of Human Blood

הדמיה כמותי של שושלת ספציפית חיוג כמו קולטן בתיווך איתות מונוציטים ותאים דנדריטים של דגימות קטנות של דם אנושי

Individual variations in immune status determine responses to infection and contribute to disease severity and outcome.  Aging is associated with an ...

Saliva, Salivary Gland, and Hemolymph Collection from Ixodes scapularis Ticks

Saliva, Salivary Gland, and Hemolymph Collection from Ixodes scapularis Ticks

רוק, בלוטות הרוק, וכן אוסף Hemolymph מ קרציות קרצית Scapularis

Ticks are found worldwide and afflict humans with many tick-borne illnesses. Ticks are vectors for pathogens that cause Lyme disease and tick-borne ...

Methods for Quantitative Detection of Antibody-induced Complement Activation on Red Blood Cells

שיטות כמותיות לאיתור של הפעלת משלים-Induced נוגדן בתאי דם אדומים

Antibodies against red blood cells (RBCs) can lead to complement activation resulting in an accelerated clearance via complement receptors in the liver ...

Activation and Measurement of NLRP3 Inflammasome Activity Using IL-1&#946; in Human Monocyte-derived Dendritic Cells

Activation and Measurement of NLRP3 Inflammasome Activity Using IL-1ÃƒÅ½Ã‚Â² in Human Monocyte-derived Dendritic Cells

הפעלה ומדידה של NLRP3 Inflammasome פעילות באמצעות IL-1β בתאים דנדריטים נגזרות מונוציטים אדם

Inflammatory processes resulting from the secretion of Interleukin (IL)-1 family cytokines by immune cells lead to local or systemic inflammation, tissue ...

Isolation of Murine Peritoneal Macrophages to Carry Out Gene Expression Analysis Upon Toll-like Receptors Stimulation

בידוד של הצפק Murine המקרופאגים לבצע ניתוח ביטוי גנים בעת ביצוע כמו אגרה רצפטורים הגירוי

During infection and inflammation, circulating monocytes leave the bloodstream and migrate into tissues, where they differentiate into macrophages. ...

Isolation and Activation of Murine Lymphocytes

בידוד ההפעלה של Murine לימפוציטים

B and T cells, with their extremely diverse antigen-receptor repertoires, have the ability to mount specific immune responses against almost any invading ...

Flow Cytometric Analysis of Natural Killer Cell Lytic Activity in Human Whole Blood

ניתוח תזרים Cytometric של תא הטבעי Killer ממס פעילות דם מלא אנוש

NK cell cytotoxicity is a widely used measure to determine the effect of outside intervention on NK cell function. However, the accuracy and ...

Detection of Inflammasome Activation and Pyroptotic Cell Death in Murine Bone Marrow-derived Macrophages

זיהוי של Inflammasome ההפעלה ומוות תא Pyroptotic של מקרופאגים הנגזרות מח עצם מאתר

Inflammasomes are innate immune signaling platforms that are required for the successful control of many pathogenic organisms, but also promote ...

A High-throughput Platform for the Screening of Salmonella spp./Shigella spp.

A High-throughput Platform for the Screening of Salmonella spp./Shigella spp.

פלטפורמה תפוקה גבוהה להקרנה של סלמונלה spp /שיגלה spp.

Fecal-oral transmission of acute gastroenteritis occurs from time to time, especially when people who handled food and water are infected by Salmonella ...