Supporto parziale da sovvenzioni a MRS è di scienze naturali e ingegneria Research Council del Canada (NSERC), l&#39;Harry Botterell Foundation for Neuroscience Research, ARC, e la ricerca Garfield Kelly cardiovascolari e Fondo di sviluppo. SRA è un destinatario del Premio Regina di ricerca dell&#39;Università e del Robert J. Wilson Fellowship. PJ è un destinatario del premio di Laurea della Regina e il Robert J. Wilson Fellowship. AG e SA sono i destinatari del premio di Laurea della Regina. SF è stato il destinatario della Borsa di Studio Ontario Laurea in Scienza e Tecnologia (OGSST). AG è il destinatario della Borsa di studio della Regina Franklin Bracken Graduate. SA è il destinatario della Borsa di studio della Regina RS McLaughlin Graduate.

1. Resuscitare i macrofagi congelati <ol><li> Prima di risorgere cellule congelate dal freezer -80 ° C, si ha la necessità di preparare un terreno di coltura sterile filtrata utilizzando Dulbecco Modified Eagle Medium (DMEM) supplementato con 10% siero fetale bovino (FBS) e 5 mg / mL di plasmocin. Plasmocin è una soluzione di antibiotico utilizzato nella nostra ricerca per eliminare e prevenire la contaminazione da micoplasma di colture cellulari. </li><li> Per un flaconcino di cellule congelate, si aggiunge 4 mL, ...

<ol>
	<li>Amith, S. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neu1+desialylation+of+sialyl+alpha-2,3-linked+beta-galactosyl+residues+of+TOLL-like+receptor+4+is+essential+for+receptor+activation+and+cellular+signaling.">Neu1 desialylation of sialyl alpha-2,3-linked beta-galactosyl residues of TOLL-like receptor 4 is essential for receptor activation and cellular signaling.</a> Cell Signal. 22, 314-324 (2010).</li><li>Amith, S. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dependence+of+pathogen+molecule-induced+Toll-like+receptor+activation+and+cell+function+on+Neu1+sialidase.">Dependence of pathogen molecule-induced Toll-like receptor activation and cell function on Neu1 sialidase.</a> Glycoconjugate Journal. 26, 1197-1212 (2009).</li><li>Woronowicz, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dependence+of+neurotrophic+factor+activation+of+Trk+tyrosine+kinase+receptors+on+cellular+sialidase.">Dependence of neurotrophic factor activation of Trk tyrosine kinase receptors on cellular sialidase.</a> Glycobiology. 17, 10-24 (2007).</li><li>Jayanth, P., Amith, S. R., Gee, K., Szewczuk, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neu1+Sialidase+and+Matrix+Metalloproteinase-9+Cross-talk+is+Essential+for+Neurotrophin+Activation+of+Trk+Receptors+and+Cellular+Signaling.">Neu1 Sialidase and Matrix Metalloproteinase-9 Cross-talk is Essential for Neurotrophin Activation of Trk Receptors and Cellular Signaling.</a> Cell. Signal. 22, 1193-1205 (2010).</li><li>Finlay, T. M., Jayanth, P., Amith, S. R., Glimour, A., Guzzo, C., Gee, K., Beyaert, R., Szewczuk, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Thymoquinone+from+nutraceutical+black+cumin+oil+activates+Neu4+sialidase+in+live+macrophage,+dendritic,+and+normal+and+type+I+sialidosis+human+fibroblast+cells+via+GPCR+G&#945;i+proteins+and+matrix+metalloproteinase-9.">Thymoquinone from nutraceutical black cumin oil activates Neu4 sialidase in live macrophage, dendritic, and normal and type I sialidosis human fibroblast cells via GPCR G&#945;i proteins and matrix metalloproteinase-9.</a> Glycoconj J. 27, 329-348 (2010).</li><li>Seyrantepe, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+Phagocytosis+in+Macrophages+by+Neuraminidase+1.">Regulation of Phagocytosis in Macrophages by Neuraminidase 1.</a> Journal of Biological Chemistry. 285, 206-215 (2010).</li></ol>

Utilizzando il test di nuova concezione per rilevare l&#39;attività sialidasi in cellule vive macrofagi 2, abbiamo utilizzato questa tecnologia per rilevare l&#39;attività sialidasi in ligando indotta attività sialidasi in live BMC-2 cellule macrofagi in modo dose-dipendente e in live-2.4 DC cellule dendritiche , HEK-TLR4/MD2, HEK293, le cellule di adenocarcinoma mammario SP1, WT umana e 1140F01 e WG0544 tipo I fibroblasti sialidosi. Gli inibitori della neuraminidasi come il Tamiflu (oseltamivir fosfato) h...

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>DMEM</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Gibco, Rockville, MD</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>4-MUNANA</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Biosynth International Inc., Itasca, IL, USA</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Fetal calf serum</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>HyClone, Logan, Utah, USA</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>DakoCytomation, Fluorescent Mounting Media</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>DAKO North America, Inc., Carpintenia, CA</td>
<td>S3023</td>
<td>15 mL</td>
</tr>
<tr>
<td>Tamiflu (Oseltamivir Phosphate)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Hoffman La Roche</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

detection of  neu1 sialidase activity in regulating toll-like receptor activation

Mammiferi recettori Toll-like (TLR) sono una famiglia di recettori che riconoscono pattern molecolari patogeni associati. Non solo i sensori di TLR cruciale microbica (ad esempio, virus, batteri e parassiti) infezioni, hanno anche un ruolo importante nella fisiopatologia delle malattie infettive, malattie infiammatorie, e forse anche nelle malattie autoimmuni. Così, l&#39;intensità e la durata delle risposte TLR contro le malattie infettive devono essere strettamente controllati. Ne consegue che la comprensione l&#39;integrità strutturale dei recettori del sensore, le loro interazioni ligando e componenti segnalazione è essenziale per la successiva protezione immunologica. Sarebbe inoltre fornire importanti opportunità per la modifica delle malattie attraverso la manipolazione del sensore. Anche se le vie di segnalazione di sensori TLR sono ben caratterizzati, i parametri che controllano le interazioni tra i sensori e loro ligandi sono ancora poco definiti. Abbiamo recentemente identificato un nuovo meccanismo di attivazione TLR dal suo ligando naturale, che non è stato precedentemente osservato 1,2. Suggerisce che ligando indotta attivazione TLR è strettamente controllato dalla NEU1 attivazione sialidasi. Abbiamo anche riferito che NEU1 regola strettamente recettori neurotrofina come TrkA e TrkB 3, che coinvolgono NEU1 e la matrice metalloproteinasi-9 (MMP-9) cross-talk in complesso con i recettori 4. Il dosaggio sialidasi è stato inizialmente utilizzato per trovare un romanzo ligando, Timochinone, l&#39;attivazione di Neu4 sialidasi sulla superficie cellulare di macrofagi, cellule dendritiche e le cellule di fibroblasti via GPCR proteine ​​Gαi e MMP-9 5. Per i recettori TLR, i nostri dati indicano che NEU1 sialidasi è già in complessi con i recettori TLR-2, -3 e -4, ed è indotta su di legame a uno dei recettori. Attivato NEU1 idrolizza sialidasi sialyl α-2 ,3-legati residui distante da ligando β-galattosiltransferasi vincolante per rimuovere impedimento sterico di TLR-4 dimerizzazione, MyD88/TLR4 reclutamento complesso, l&#39;attivazione NFkB e pro-infiammatorie risposte delle cellule. In un rapporto collaborativo, sialidasi NEU1 è stato dimostrato che regolano la fagocitosi in macrofagi 6. Nel loro insieme, il saggio sialidasi ci ha fornito spunti potente per i meccanismi molecolari del ligando indotta da attivazione del recettore. Sebbene l&#39;esatta relazione tra NEU1 sialidasi e l&#39;attivazione di TLR, recettori Trk deve ancora essere completamente chiarito, che rappresenterebbe un nuovo approccio pionieristico o per percorsi di regolazione cellulare.

Watch this Scientific Journal Video about Detection of  Neu1 Sialidase Activity in Regulating TOLL-like Receptor Activation at JoVE.com

Detection of  Neu1 Sialidase Activity in Regulating TOLL-like Receptor Activation

Il test sialidasi è un approccio semplice tecnica che chiarire romanzo meccanismo molecolare (s) di sensori TLR di infezioni microbiche e di coinvolgimento nelle malattie infiammatorie a livello dei recettori sulla superficie cellulare di macrofagi dal vivo.

Rilevazione di attività NEU1 sialidasi nella regolamentazione Toll-like l&#39;attivazione del recettore

Mammalian Toll-like receptors (TLRs) are a family of receptors that recognize pathogen-associated molecular patterns. Not only are TLRs crucial sensors of ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Combination of Adhesive-tape-based Sampling and Fluorescence in situ Hybridization for Rapid Detection of Salmonella on Fresh Produce

Combination of Adhesive-tape-based Sampling and Fluorescence in situ Hybridization for Rapid Detection of Salmonella on Fresh Produce

Combinazione di nastro adesivo a base di campionamento e di fluorescenza In situ</emIbridazione> per il rilevamento rapido di Salmonella Su prodotti freschi

This protocol describes a simple approach for adhesive-tape-based sampling of tomato and other fresh produce surfaces, followed by on-tape fluorescence in ...

Ricerca

Immunologia e infezioni

Quantitative Imaging of Lineage-specific Toll-like Receptor-mediated Signaling in Monocytes and Dendritic Cells from Small Samples of Human Blood

Imaging quantitativa di Lineage specifici Toll-like receptor-mediate Signaling in monociti e cellule dendritiche da piccoli campioni di sangue umano

Individual variations in immune status determine responses to infection and contribute to disease severity and outcome.  Aging is associated with an ...

Saliva, Salivary Gland, and Hemolymph Collection from Ixodes scapularis Ticks

Saliva, Salivary Gland, and Hemolymph Collection from Ixodes scapularis Ticks

Saliva, le ghiandole salivari, e Collection emolinfa dalle zecche Ixodes scapularis

Ticks are found worldwide and afflict humans with many tick-borne illnesses. Ticks are vectors for pathogens that cause Lyme disease and tick-borne ...

Methods for Quantitative Detection of Antibody-induced Complement Activation on Red Blood Cells

Metodi per quantitativa individuazione di anticorpi indotta da attivazione del complemento sui globuli rossi

Antibodies against red blood cells (RBCs) can lead to complement activation resulting in an accelerated clearance via complement receptors in the liver ...

Activation and Measurement of NLRP3 Inflammasome Activity Using IL-1&#946; in Human Monocyte-derived Dendritic Cells

Activation and Measurement of NLRP3 Inflammasome Activity Using IL-1ÃƒÅ½Ã‚Â² in Human Monocyte-derived Dendritic Cells

Attivazione e misurazione dei NLRP3 inflammasome all&#39;attività utilizzando IL-1β in cellule dendritiche umane derivate da monociti

Inflammatory processes resulting from the secretion of Interleukin (IL)-1 family cytokines by immune cells lead to local or systemic inflammation, tissue ...

Isolation of Murine Peritoneal Macrophages to Carry Out Gene Expression Analysis Upon Toll-like Receptors Stimulation

Isolamento di murini peritoneale macrofagi di effettuare analisi di espressione genica Al Toll-like recettori stimolazione

During infection and inflammation, circulating monocytes leave the bloodstream and migrate into tissues, where they differentiate into macrophages. ...

Isolation and Activation of Murine Lymphocytes

L&#39;isolamento e l&#39;attivazione di linfociti murini

B and T cells, with their extremely diverse antigen-receptor repertoires, have the ability to mount specific immune responses against almost any invading ...

Flow Cytometric Analysis of Natural Killer Cell Lytic Activity in Human Whole Blood

Flusso analisi di citometria di Natural Killer cellulare Lytic attività nel Sangue umano intero

NK cell cytotoxicity is a widely used measure to determine the effect of outside intervention on NK cell function. However, the accuracy and ...

Detection of Inflammasome Activation and Pyroptotic Cell Death in Murine Bone Marrow-derived Macrophages

Rilevamento di attivazione Inflammasome e morte delle cellule Pyroptotic in macrofagi murini derivate da midollo osseo

Inflammasomes are innate immune signaling platforms that are required for the successful control of many pathogenic organisms, but also promote ...

A High-throughput Platform for the Screening of Salmonella spp./Shigella spp.

A High-throughput Platform for the Screening of Salmonella spp./Shigella spp.

Una piattaforma di High-throughput per lo Screening della Salmonella spp /Shigella spp.

Fecal-oral transmission of acute gastroenteritis occurs from time to time, especially when people who handled food and water are infected by Salmonella ...