Apoio parcial por doações para MRS é de Ciências Naturais e Pesquisa de Engenharia Council of Canada (NSERC), o Harry Botterell Foundation for Neuroscience Research, ARC, eo Garfield Research Kelly Cardiovascular e Fundo de Desenvolvimento. SRA é um receptor da Rainha do Prêmio de Pesquisa da Universidade e do Robert J. Wilson Fellowship. PJ é um receptor de Prêmio de Pós-Graduação da rainha e do Robert J. Wilson Fellowship. AG e SA são os destinatários do Prêmio de Pós-Graduação da Rainha. SF foi o ganhador da Bolsa de Pós-Graduação em Ontario Ciência e Tecnologia (OGSST). AG é o destinatário da Rainha Franklin Bolsa de Pós-Graduação Bracken. SA é o destinatário da Rainha RS Bolsa de Pós-Graduação McLaughlin.

1. Ressuscitando macrófagos Congelados <ol><li> Antes de ressuscitar células congeladas do freezer -80 ° C, é preciso preparar meio de cultura usando estéril filtrado Médio Modified Dulbecco Águia (DMEM) suplementado com 10% soro fetal bovino (FBS) e 5 mg / mL de plasmocin. Plasmocin é uma solução de antibiótico utilizado em nossa pesquisa para eliminar e evitar a contaminação por micoplasma em culturas de células. </li><li> Para um frasco de células congeladas, acrescenta um 4 mL, 1 mL do meio de cultu...

<ol>
	<li>Amith, S. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neu1+desialylation+of+sialyl+alpha-2,3-linked+beta-galactosyl+residues+of+TOLL-like+receptor+4+is+essential+for+receptor+activation+and+cellular+signaling.">Neu1 desialylation of sialyl alpha-2,3-linked beta-galactosyl residues of TOLL-like receptor 4 is essential for receptor activation and cellular signaling.</a> Cell Signal. 22, 314-324 (2010).</li><li>Amith, S. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dependence+of+pathogen+molecule-induced+Toll-like+receptor+activation+and+cell+function+on+Neu1+sialidase.">Dependence of pathogen molecule-induced Toll-like receptor activation and cell function on Neu1 sialidase.</a> Glycoconjugate Journal. 26, 1197-1212 (2009).</li><li>Woronowicz, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dependence+of+neurotrophic+factor+activation+of+Trk+tyrosine+kinase+receptors+on+cellular+sialidase.">Dependence of neurotrophic factor activation of Trk tyrosine kinase receptors on cellular sialidase.</a> Glycobiology. 17, 10-24 (2007).</li><li>Jayanth, P., Amith, S. R., Gee, K., Szewczuk, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neu1+Sialidase+and+Matrix+Metalloproteinase-9+Cross-talk+is+Essential+for+Neurotrophin+Activation+of+Trk+Receptors+and+Cellular+Signaling.">Neu1 Sialidase and Matrix Metalloproteinase-9 Cross-talk is Essential for Neurotrophin Activation of Trk Receptors and Cellular Signaling.</a> Cell. Signal. 22, 1193-1205 (2010).</li><li>Finlay, T. M., Jayanth, P., Amith, S. R., Glimour, A., Guzzo, C., Gee, K., Beyaert, R., Szewczuk, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Thymoquinone+from+nutraceutical+black+cumin+oil+activates+Neu4+sialidase+in+live+macrophage,+dendritic,+and+normal+and+type+I+sialidosis+human+fibroblast+cells+via+GPCR+G&#945;i+proteins+and+matrix+metalloproteinase-9.">Thymoquinone from nutraceutical black cumin oil activates Neu4 sialidase in live macrophage, dendritic, and normal and type I sialidosis human fibroblast cells via GPCR G&#945;i proteins and matrix metalloproteinase-9.</a> Glycoconj J. 27, 329-348 (2010).</li><li>Seyrantepe, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+Phagocytosis+in+Macrophages+by+Neuraminidase+1.">Regulation of Phagocytosis in Macrophages by Neuraminidase 1.</a> Journal of Biological Chemistry. 285, 206-215 (2010).</li></ol>

Utilizando o teste recentemente desenvolvido para detectar atividade de sialidase em células macrófago vivo 2, usamos essa tecnologia para detectar atividade de sialidase em ligante induzida por atividade sialidase em viver BMC-2 macrófagos de uma forma dependente da dose, bem como em viver DC-2.4 células dendríticas , HEK-TLR4/MD2, HEK293, SP1 nas células mamárias adenocarcinoma, WT humanos e 1140F01 e WG0544 tipo I fibroblastos sialidose. Inibidores da neuraminidase, como o Tamiflu (fosfato de oselta...

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		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>DMEM</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Gibco, Rockville, MD</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>4-MUNANA</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Biosynth International Inc., Itasca, IL, USA</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Fetal calf serum</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>HyClone, Logan, Utah, USA</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>DakoCytomation, Fluorescent Mounting Media</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>DAKO North America, Inc., Carpintenia, CA</td>
<td>S3023</td>
<td>15 mL</td>
</tr>
<tr>
<td>Tamiflu (Oseltamivir Phosphate)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Hoffman La Roche</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

detection of  neu1 sialidase activity in regulating toll-like receptor activation

Mamíferos Toll-like receptors (TLRs) são uma família de receptores que reconhecem patógenos padrões moleculares associados. Não são apenas os TLRs sensores crucial da microbiana (por exemplo, vírus, bactérias e parasitas) infecções, eles também desempenham um papel importante na fisiopatologia de doenças infecciosas, doenças inflamatórias e, possivelmente, em doenças auto-imunes. Assim, a intensidade ea duração das respostas TLR contra as doenças infecciosas devem ser rigorosamente controladas. Segue-se que o entendimento a integridade estrutural dos receptores de sensor, suas interações ligante e componentes de sinalização é essencial para a proteção imunológica subseqüentes. Seria também oferecem oportunidades importantes para a modificação de doenças através da manipulação sensor. Embora as vias de sinalização de sensores de TLR estão bem caracterizadas, os parâmetros de controle de interações entre os sensores e seus ligantes ainda permanecem mal definidos. Recentemente, identificou um novo mecanismo de ativação do TLR por seu ligante natural, que não foi observado anteriormente 1,2. Ele sugere que a ativação induzida por ligante TLR é rigidamente controlado por Neu1 ativação sialidase. Temos também informou que Neu1 regule receptores neurotrofina como TRKA TrkB e 3, que envolvem Neu1 e matriz metaloproteinase-9 (MMP-9) cruzada no complexo com os receptores 4. O ensaio sialidase foi inicialmente usado para encontrar um romance ligante thymoquinone, na ativação de Neu4 sialidase na superfície celular de macrófagos, células dendríticas e células fibroblasto via GPCR Gαi proteínas e MMP-9 5. Para os receptores TLR, nossos dados indicam que Neu1 sialidase já está em complexos com receptores TLR-2, -3 e -4, e é induzida mediante ligação do ligando a qualquer receptor. Ativado Neu1 hidrolisa sialidase sialil α-2 ,3-β-ligados galactosyl resíduos distante ligação do ligando para remover impedimento estérico a TLR-4 dimerização, MyD88/TLR4 recrutamento complexo, NFkB ativação e respostas pró-inflamatórias da célula. Em um relatório de colaboração, sialidase Neu1 foi mostrado para regular a fagocitose em macrófagos 6. Tomados em conjunto, o ensaio sialidase nos forneceu insights poderosos para os mecanismos moleculares do ligante induzida por ativação do receptor. Embora a relação exata entre Neu1 sialidase e ativação de TLR, receptores Trk ainda não foi completamente elucidado, isso representaria uma nova abordagem ou pioneira de vias de regulação celular.

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Detection of  Neu1 Sialidase Activity in Regulating TOLL-like Receptor Activation

O ensaio sialidase é uma abordagem simples técnica que irá elucidar mecanismo molecular romance (s) de sensores de TLR de infecções microbianas e envolvimento em doenças inflamatórias ao nível do receptor na superfície celular de macrófagos ao vivo.

Detecção de Atividade Neu1 sialidase em Regulação Toll-like receptor de ativação

Mammalian Toll-like receptors (TLRs) are a family of receptors that recognize pathogen-associated molecular patterns. Not only are TLRs crucial sensors of ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Combination of Adhesive-tape-based Sampling and Fluorescence in situ Hybridization for Rapid Detection of Salmonella on Fresh Produce

Combination of Adhesive-tape-based Sampling and Fluorescence in situ Hybridization for Rapid Detection of Salmonella on Fresh Produce

Combinação de adesivos de fita baseada em amostragem e de fluorescência In situ Hibridação para detecção rápida de Salmonella On Fresh Produce

This protocol describes a simple approach for adhesive-tape-based sampling of tomato and other fresh produce surfaces, followed by on-tape fluorescence in ...

Imunologia e Infecção

Quantitative Imaging of Lineage-specific Toll-like Receptor-mediated Signaling in Monocytes and Dendritic Cells from Small Samples of Human Blood

Imagem quantitativa da linhagem específica Toll-like receptor-mediados sinalização em monócitos e células dendríticas a partir de pequenas amostras de sangue humano

Individual variations in immune status determine responses to infection and contribute to disease severity and outcome.  Aging is associated with an ...

Saliva, Salivary Gland, and Hemolymph Collection from Ixodes scapularis Ticks

Saliva, Salivary Gland, and Hemolymph Collection from Ixodes scapularis Ticks

A saliva, glândula salivar, e Coleta de hemolinfa de carrapatos Ixodes scapularis

Ticks are found worldwide and afflict humans with many tick-borne illnesses. Ticks are vectors for pathogens that cause Lyme disease and tick-borne ...

Methods for Quantitative Detection of Antibody-induced Complement Activation on Red Blood Cells

Métodos para a detecção quantitativa de anticorpos induzida pela ativação do complemento no Glóbulos Vermelhos

Antibodies against red blood cells (RBCs) can lead to complement activation resulting in an accelerated clearance via complement receptors in the liver ...

Activation and Measurement of NLRP3 Inflammasome Activity Using IL-1&#946; in Human Monocyte-derived Dendritic Cells

Activation and Measurement of NLRP3 Inflammasome Activity Using IL-1ÃƒÅ½Ã‚Â² in Human Monocyte-derived Dendritic Cells

Ativação e Mensuração de NLRP3 inflammasome Atividade Usando IL-1β em células dendríticas humanas Monocyte derivados

Inflammatory processes resulting from the secretion of Interleukin (IL)-1 family cytokines by immune cells lead to local or systemic inflammation, tissue ...

Isolation of Murine Peritoneal Macrophages to Carry Out Gene Expression Analysis Upon Toll-like Receptors Stimulation

Isolamento de Murino macrófagos peritoniais de Cumprir a análise de expressão gênica Após Toll-like receptors Estimulação

During infection and inflammation, circulating monocytes leave the bloodstream and migrate into tissues, where they differentiate into macrophages. ...

Isolation and Activation of Murine Lymphocytes

Isolamento e Activação de Linfócitos murinos

B and T cells, with their extremely diverse antigen-receptor repertoires, have the ability to mount specific immune responses against almost any invading ...

Flow Cytometric Analysis of Natural Killer Cell Lytic Activity in Human Whole Blood

Citometria de fluxo e assassinas naturais celular Lytic Actividade em sangue total humano

NK cell cytotoxicity is a widely used measure to determine the effect of outside intervention on NK cell function. However, the accuracy and ...

Detection of Inflammasome Activation and Pyroptotic Cell Death in Murine Bone Marrow-derived Macrophages

Deteção de ativação de Inflammasome e morte celular de Pyroptotic nos macrófagos da medula óssea-derivado murino

Inflammasomes are innate immune signaling platforms that are required for the successful control of many pathogenic organisms, but also promote ...

A High-throughput Platform for the Screening of Salmonella spp./Shigella spp.

A High-throughput Platform for the Screening of Salmonella spp./Shigella spp.

Uma plataforma de alto rendimento para o rastreio de Salmonella spp. /Shigella spp.

Fecal-oral transmission of acute gastroenteritis occurs from time to time, especially when people who handled food and water are infected by Salmonella ...