Частичная поддержка грантами для MRS от естествознания и техники Научно-исследовательского совета Канады (NSERC), Гарри Botterell Фонда в области нейронаук, ARC, и Гарфилд Келли сердечно-сосудистых исследований и развития Фонда. SRA является получателем университета королевы премию исследований и Роберт Дж. Уилсон стипендий. PJ является получателем высшей премии королевы и Роберт Дж. Уилсон стипендий. А. Г. и С. являются получателями Высшей премии королевы. Ф. был удостоен стипендии Онтарио Высшее в области науки и технологий (OGSST). AG является получателем Франклин королевы стипендии Bracken Высшее. SA является получателем RS королевы стипендии Маклафлин Высшее.

1. Воскрешая замороженных клеток макрофагов <ol><li> Прежде чем воскрешение замороженных клеток от -80 ° C морозильник, необходимо подготовить культуральной среде стерильные фильтруется Средний Дульбеко изменения Орла (DMEM) с добавлением 10% эмбриональной телячьей сыворотки (FBS) и 5 ​​мкг / м...

<ol>
	<li>Amith, S. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neu1+desialylation+of+sialyl+alpha-2,3-linked+beta-galactosyl+residues+of+TOLL-like+receptor+4+is+essential+for+receptor+activation+and+cellular+signaling.">Neu1 desialylation of sialyl alpha-2,3-linked beta-galactosyl residues of TOLL-like receptor 4 is essential for receptor activation and cellular signaling.</a> Cell Signal. 22, 314-324 (2010).</li><li>Amith, S. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dependence+of+pathogen+molecule-induced+Toll-like+receptor+activation+and+cell+function+on+Neu1+sialidase.">Dependence of pathogen molecule-induced Toll-like receptor activation and cell function on Neu1 sialidase.</a> Glycoconjugate Journal. 26, 1197-1212 (2009).</li><li>Woronowicz, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dependence+of+neurotrophic+factor+activation+of+Trk+tyrosine+kinase+receptors+on+cellular+sialidase.">Dependence of neurotrophic factor activation of Trk tyrosine kinase receptors on cellular sialidase.</a> Glycobiology. 17, 10-24 (2007).</li><li>Jayanth, P., Amith, S. R., Gee, K., Szewczuk, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neu1+Sialidase+and+Matrix+Metalloproteinase-9+Cross-talk+is+Essential+for+Neurotrophin+Activation+of+Trk+Receptors+and+Cellular+Signaling.">Neu1 Sialidase and Matrix Metalloproteinase-9 Cross-talk is Essential for Neurotrophin Activation of Trk Receptors and Cellular Signaling.</a> Cell. Signal. 22, 1193-1205 (2010).</li><li>Finlay, T. M., Jayanth, P., Amith, S. R., Glimour, A., Guzzo, C., Gee, K., Beyaert, R., Szewczuk, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Thymoquinone+from+nutraceutical+black+cumin+oil+activates+Neu4+sialidase+in+live+macrophage,+dendritic,+and+normal+and+type+I+sialidosis+human+fibroblast+cells+via+GPCR+G&#945;i+proteins+and+matrix+metalloproteinase-9.">Thymoquinone from nutraceutical black cumin oil activates Neu4 sialidase in live macrophage, dendritic, and normal and type I sialidosis human fibroblast cells via GPCR G&#945;i proteins and matrix metalloproteinase-9.</a> Glycoconj J. 27, 329-348 (2010).</li><li>Seyrantepe, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+Phagocytosis+in+Macrophages+by+Neuraminidase+1.">Regulation of Phagocytosis in Macrophages by Neuraminidase 1.</a> Journal of Biological Chemistry. 285, 206-215 (2010).</li></ol>

Использование недавно разработанной метода обнаруживать сиалидазы активности в живых клетках макрофагов 2, мы использовали эту технологию для выявления сиалидазы деятельности в индуцированной лигандом сиалидазы деятельности в живом BMC-2 макрофагов клеток в зависимости от дозы...

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>DMEM</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Gibco, Rockville, MD</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>4-MUNANA</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Biosynth International Inc., Itasca, IL, USA</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Fetal calf serum</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>HyClone, Logan, Utah, USA</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>DakoCytomation, Fluorescent Mounting Media</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>DAKO North America, Inc., Carpintenia, CA</td>
<td>S3023</td>
<td>15 mL</td>
</tr>
<tr>
<td>Tamiflu (Oseltamivir Phosphate)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Hoffman La Roche</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

detection of  neu1 sialidase activity in regulating toll-like receptor activation

Млекопитающих Toll-подобные рецепторы (TLRs) представляют собой семейство рецепторов, которые распознают патоген-связанные молекулярные паттерны. Мало того, что TLRs важно датчиков микробного (например, вирусов, бактерий и паразитов) инфекции, они также играют важную роль в патофизиологии инфекционных заболеваний, воспалительных заболеваний, и, возможно, при аутоиммунных заболеваниях. Таким образом, интенсивность и продолжительность TLR ответы с инфекционными болезнями должны быть под жестким контролем. Отсюда следует, что понимание структурной целостности датчиков-рецепторов, их взаимодействие лиганд и сигнальных компонентов имеет важное значение для последующего иммунологической защиты. Он также даст широкие возможности для модификации болезни через датчик манипуляции. Хотя сигнальные пути из TLR датчики хорошо охарактеризованы, параметры, управляющие взаимодействиями между датчиками и их лигандами до сих пор остаются плохо определены. Мы недавно выявили новый механизм активации TLR его природный лиганд, который ранее не наблюдалось 1,2. Она предполагает, что лиганд-индуцированной активации TLR жестко контролируется Neu1 сиалидазы активации. Мы также сообщили, что Neu1 жестко регулирует нейротрофинов рецепторов, как TrkA и TrkB 3, которые включают Neu1 и матричные металлопротеиназы-9 (MMP-9) перекрестные помехи в комплексе с рецепторами 4. Сиалидазы анализа была изначально использовать, чтобы найти новых лигандов, тимохинон, в активации Neu4 сиалидазы на поверхности клеток макрофагов, дендритных клеток и клеток фибробластов с помощью GPCR Gαi белков и MMP-9, 5. Для TLR рецепторы, наши данные показывают, что Neu1 сиалидазы уже в комплексе с TLR-2, -3 и -4 рецепторы, и индуцируется на связывание лигандов либо рецептора. Активированный Neu1 гидролизует сиалидазы сиалил α-2 ,3-связанных β-галактозил остатки удаленных от лиганд для удаления стерическое препятствие для TLR-4 димеризации, MyD88/TLR4 сложный набор, NFkB активации и про-воспалительных реакций клетки. В совместный доклад, Neu1 сиалидазы было показано, регулируют фагоцитоз макрофагов клетки 6. Взятые вместе, сиалидазы анализ дает нам мощные идеи для молекулярных механизмов лиганд-индуцированной активации рецептора. Хотя точной взаимосвязи Neu1 сиалидазы и активация TLR, ТРК рецепторов до сих пор не выяснена, она будет представлять новый или новаторский подход к регуляции клеточного пути.

Watch this Scientific Journal Video about Detection of  Neu1 Sialidase Activity in Regulating TOLL-like Receptor Activation at JoVE.com

Detection of  Neu1 Sialidase Activity in Regulating TOLL-like Receptor Activation

Сиалидазы анализа является простой технический подход, который позволит выяснить роман молекулярный механизм (ы) TLR датчиков микробной инфекции и участие в воспалительных заболеваний на уровне рецепторов на поверхности клетки живых макрофагов.

Обнаружение Neu1 сиалидазы активность в регулировании Toll-подобных рецепторов активации

Mammalian Toll-like receptors (TLRs) are a family of receptors that recognize pathogen-associated molecular patterns. Not only are TLRs crucial sensors of ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Combination of Adhesive-tape-based Sampling and Fluorescence in situ Hybridization for Rapid Detection of Salmonella on Fresh Produce

Combination of Adhesive-tape-based Sampling and Fluorescence in situ Hybridization for Rapid Detection of Salmonella on Fresh Produce

Сочетание Клей-ленты на основе выборки и флуоресценции На месте Гибридизация для быстрого обнаружения Сальмонеллы На Fresh Produce

This protocol describes a simple approach for adhesive-tape-based sampling of tomato and other fresh produce surfaces, followed by on-tape fluorescence in ...

Quantitative Imaging of Lineage-specific Toll-like Receptor-mediated Signaling in Monocytes and Dendritic Cells from Small Samples of Human Blood

Количественные Визуализация Lineage конкретных Toll-подобный рецептор-опосредованной сигнализации в моноцитах и ​​дендритных клеток из малых образцов крови человека

Individual variations in immune status determine responses to infection and contribute to disease severity and outcome.  Aging is associated with an ...

Saliva, Salivary Gland, and Hemolymph Collection from Ixodes scapularis Ticks

Saliva, Salivary Gland, and Hemolymph Collection from Ixodes scapularis Ticks

Слюна, слюнные железы, и гемолимфы Коллекция от иксодовых клещей Scapularis

Ticks are found worldwide and afflict humans with many tick-borne illnesses. Ticks are vectors for pathogens that cause Lyme disease and tick-borne ...

Methods for Quantitative Detection of Antibody-induced Complement Activation on Red Blood Cells

Методы количественного определения антител-индуцированной активации комплемента по ЭРИТРОЦИТОВ

Antibodies against red blood cells (RBCs) can lead to complement activation resulting in an accelerated clearance via complement receptors in the liver ...

Activation and Measurement of NLRP3 Inflammasome Activity Using IL-1&#946; in Human Monocyte-derived Dendritic Cells

Activation and Measurement of NLRP3 Inflammasome Activity Using IL-1ÃƒÅ½Ã‚Â² in Human Monocyte-derived Dendritic Cells

Активация и Измерение NLRP3 Inflammasome деятельности Использование IL-1β в человека моноцитов дендритные клетки

Inflammatory processes resulting from the secretion of Interleukin (IL)-1 family cytokines by immune cells lead to local or systemic inflammation, tissue ...

Isolation of Murine Peritoneal Macrophages to Carry Out Gene Expression Analysis Upon Toll-like Receptors Stimulation

Выделение перитонеальных макрофагов Carry Out Gene Expression анализ По Toll-подобные рецепторы стимуляции

During infection and inflammation, circulating monocytes leave the bloodstream and migrate into tissues, where they differentiate into macrophages. ...

Isolation and Activation of Murine Lymphocytes

Выделение и активация мышиных лимфоцитах

B and T cells, with their extremely diverse antigen-receptor repertoires, have the ability to mount specific immune responses against almost any invading ...

Flow Cytometric Analysis of Natural Killer Cell Lytic Activity in Human Whole Blood

Flow Cytometric Анализ естественных клеток-киллеров литической активности в человеческой цельной крови

NK cell cytotoxicity is a widely used measure to determine the effect of outside intervention on NK cell function. However, the accuracy and ...

Detection of Inflammasome Activation and Pyroptotic Cell Death in Murine Bone Marrow-derived Macrophages

Обнаружение Инфламмасома активации и Pyroptotic клеточной гибели в мышиных макрофагов, костного мозга, полученных

Inflammasomes are innate immune signaling platforms that are required for the successful control of many pathogenic organisms, but also promote ...

A High-throughput Platform for the Screening of Salmonella spp./Shigella spp.

A High-throughput Platform for the Screening of Salmonella spp./Shigella spp.

Высок объём платформы для проверки Salmonella spp. /Shigella spp.

Fecal-oral transmission of acute gastroenteritis occurs from time to time, especially when people who handled food and water are infected by Salmonella ...