Apoyo parcial de subvenciones para MRS de Ciencias Naturales e Ingeniería de Investigación de Canadá (NSERC), el Harry Botterell Fundación para Investigación de Neurociencia, ARC, y el de Investigación Cardiovascular Garfield Kelly y el Fondo para el Desarrollo. SRA es un recipiente del Premio de la Reina de Investigación de la Universidad y el Robert J. Wilson Fellowship. PJ es un recipiente de la concesión de Postgrado de la Reina y el Robert J. Wilson Fellowship. AG y SA son beneficiarios de la concesión de Postgrado de la Reina. SF fue el beneficiario de la Beca de Ontario de Posgrado en Ciencia y Tecnología (OGSST). AG es el receptor de Franklin Becas de la Reina Bracken de Posgrado. SA es el receptor de RS de Becas de la Reina McLaughlin Posgrado.

1. La resurrección de las células congeladas del macrófago <ol><li> Antes de la resurrección de las células congeladas del congelador -80 ° C, hay que preparar el medio de cultivo utilizando filtrado estéril Dulbecco modificado de Eagle (DMEM) suplementado con fetal al 10% de suero bovino (FBS) y 5 mg / ml de plasmocin. Plasmocin es una solución de antibiótico que se utiliza en nuestra investigación para eliminar y prevenir la contaminación por micoplasmas en cultivos celulares. </li><li> Para un vial de c?...

<ol>
	<li>Amith, S. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neu1+desialylation+of+sialyl+alpha-2,3-linked+beta-galactosyl+residues+of+TOLL-like+receptor+4+is+essential+for+receptor+activation+and+cellular+signaling.">Neu1 desialylation of sialyl alpha-2,3-linked beta-galactosyl residues of TOLL-like receptor 4 is essential for receptor activation and cellular signaling.</a> Cell Signal. 22, 314-324 (2010).</li><li>Amith, S. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dependence+of+pathogen+molecule-induced+Toll-like+receptor+activation+and+cell+function+on+Neu1+sialidase.">Dependence of pathogen molecule-induced Toll-like receptor activation and cell function on Neu1 sialidase.</a> Glycoconjugate Journal. 26, 1197-1212 (2009).</li><li>Woronowicz, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dependence+of+neurotrophic+factor+activation+of+Trk+tyrosine+kinase+receptors+on+cellular+sialidase.">Dependence of neurotrophic factor activation of Trk tyrosine kinase receptors on cellular sialidase.</a> Glycobiology. 17, 10-24 (2007).</li><li>Jayanth, P., Amith, S. R., Gee, K., Szewczuk, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neu1+Sialidase+and+Matrix+Metalloproteinase-9+Cross-talk+is+Essential+for+Neurotrophin+Activation+of+Trk+Receptors+and+Cellular+Signaling.">Neu1 Sialidase and Matrix Metalloproteinase-9 Cross-talk is Essential for Neurotrophin Activation of Trk Receptors and Cellular Signaling.</a> Cell. Signal. 22, 1193-1205 (2010).</li><li>Finlay, T. M., Jayanth, P., Amith, S. R., Glimour, A., Guzzo, C., Gee, K., Beyaert, R., Szewczuk, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Thymoquinone+from+nutraceutical+black+cumin+oil+activates+Neu4+sialidase+in+live+macrophage,+dendritic,+and+normal+and+type+I+sialidosis+human+fibroblast+cells+via+GPCR+G&#945;i+proteins+and+matrix+metalloproteinase-9.">Thymoquinone from nutraceutical black cumin oil activates Neu4 sialidase in live macrophage, dendritic, and normal and type I sialidosis human fibroblast cells via GPCR G&#945;i proteins and matrix metalloproteinase-9.</a> Glycoconj J. 27, 329-348 (2010).</li><li>Seyrantepe, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+Phagocytosis+in+Macrophages+by+Neuraminidase+1.">Regulation of Phagocytosis in Macrophages by Neuraminidase 1.</a> Journal of Biological Chemistry. 285, 206-215 (2010).</li></ol>

Utilizando el ensayo de nuevo desarrollo para detectar la actividad sialidasa en los macrófagos en vivo 2, se utilizó esta tecnología para detectar la actividad sialidasa en la actividad sialidasa inducida por ligandos en vivo BMC-2 en células de los macrófagos en forma dosis dependiente, así como en vivo DC-2.4 células dendríticas , HEK-TLR4/MD2, HEK293, SP1 células de adenocarcinoma de mama, WT humanos y 1140F01 y WG0544 células de tipo I de fibroblastos sialidosis. Inhibidores de la neuraminidasa...

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		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>DMEM</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Gibco, Rockville, MD</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>4-MUNANA</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Biosynth International Inc., Itasca, IL, USA</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Fetal calf serum</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>HyClone, Logan, Utah, USA</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>DakoCytomation, Fluorescent Mounting Media</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>DAKO North America, Inc., Carpintenia, CA</td>
<td>S3023</td>
<td>15 mL</td>
</tr>
<tr>
<td>Tamiflu (Oseltamivir Phosphate)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Hoffman La Roche</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

detection of  neu1 sialidase activity in regulating toll-like receptor activation

Mamíferos receptores Toll-like (TLR) son una familia de receptores que reconocen patógenos patrones moleculares asociados. No sólo son los TLR sensores crucial de microorganismos (por ejemplo, virus, bacterias y parásitos), las infecciones, sino que también desempeñan un papel importante en la fisiopatología de las enfermedades infecciosas, enfermedades inflamatorias y, posiblemente, en las enfermedades autoinmunes. Por lo tanto, la intensidad y la duración de las respuestas TLR contra las enfermedades infecciosas deben ser estrictamente controlados. De ello se desprende que la comprensión de la integridad estructural de los receptores de sensor, sus interacciones ligando y componentes de señalización es esencial para la protección inmunológica posterior. También se ofrecen importantes oportunidades para la modificación de la enfermedad a través de la manipulación del sensor. Aunque las vías de señalización de TLR sensores están bien caracterizados, los parámetros que controlan las interacciones entre los sensores y sus ligandos todavía siguen estando mal definidas. Recientemente hemos identificado un nuevo mecanismo de activación de TLR con su ligando natural, que no ha sido observado previamente 1,2. Se sugiere que la activación inducida por ligandos TLR está estrechamente controlada por la activación de sialidasa Neu1. También se ha informado de que Neu1 bien regula los receptores de neurotrofinas como TrkA y TrkB 3, que implican Neu1 y metaloproteinasas de matriz-9 (MMP-9) cross-talk en el complejo con los receptores 4. El ensayo ha sido inicialmente sialidasa utilizar para encontrar un nuevo ligando timoquinona, en la activación de Neu4 sialidasa en la superficie celular de los macrófagos, células dendríticas y células de fibroblastos a través de proteínas GPCR Gαi y 5 de MMP-9. Para los receptores TLR, nuestros datos indican que Neu1 sialidasa ya está en el complejo con los receptores TLR-2, -3 y -4, y se induce a ligando vinculante a cualquier receptor. Activado Neu1 hidroliza sialidasa sialil α-2 ,3-β-ligado galactosil residuos lejos de unión del ligando a quitar impedimento estérico de TLR-4 dimerización, MyD88/TLR4 contratación complejos, la activación de NFkB y pro-inflamatorias respuestas de las células. En un informe de colaboración, sialidasa Neu1 se ha demostrado que regulan la fagocitosis de macrófagos 6. En conjunto, el ensayo sialidasa nos ha proporcionado ideas de gran alcance de los mecanismos moleculares de la activación del receptor inducida por ligandos. Aunque la relación precisa entre Neu1 sialidasa y la activación de TLR, los receptores Trk aún no se ha aclarado completamente, ya que implicaría un nuevo enfoque o pionero de las vías de regulación celular.

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Detection of  Neu1 Sialidase Activity in Regulating TOLL-like Receptor Activation

El ensayo sialidasa es un enfoque simple técnica que dilucidar nuevo mecanismo molecular (s) de los sensores de TLR de las infecciones microbianas y la participación en las enfermedades inflamatorias a nivel del receptor en la superficie celular de los macrófagos en vivo.

Detección de actividad sialidasa Neu1 en la regulación de Toll-like receptor de activación

Mammalian Toll-like receptors (TLRs) are a family of receptors that recognize pathogen-associated molecular patterns. Not only are TLRs crucial sensors of ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Combination of Adhesive-tape-based Sampling and Fluorescence in situ Hybridization for Rapid Detection of Salmonella on Fresh Produce

Combination of Adhesive-tape-based Sampling and Fluorescence in situ Hybridization for Rapid Detection of Salmonella on Fresh Produce

Combinación de adhesivo basado en cinta de muestreo y de fluorescencia In situ La hibridación para la detección rápida de Salmonella En los productos frescos

This protocol describes a simple approach for adhesive-tape-based sampling of tomato and other fresh produce surfaces, followed by on-tape fluorescence in ...

Investigación

Inmunología e Infección

Quantitative Imaging of Lineage-specific Toll-like Receptor-mediated Signaling in Monocytes and Dendritic Cells from Small Samples of Human Blood

Imagen cuantitativa de linaje específico Toll-like receptor-mediada por la señalización en los monocitos y células dendríticas de pequeñas muestras de sangre humana

Individual variations in immune status determine responses to infection and contribute to disease severity and outcome.  Aging is associated with an ...

Saliva, Salivary Gland, and Hemolymph Collection from Ixodes scapularis Ticks

Saliva, Salivary Gland, and Hemolymph Collection from Ixodes scapularis Ticks

La saliva, la glándula salival, y la Colección hemolinfa de las garrapatas Ixodes scapularis

Ticks are found worldwide and afflict humans with many tick-borne illnesses. Ticks are vectors for pathogens that cause Lyme disease and tick-borne ...

Methods for Quantitative Detection of Antibody-induced Complement Activation on Red Blood Cells

Los métodos para la detección cuantitativa de anticuerpos inducida por la activación del complemento en los glóbulos rojos

Antibodies against red blood cells (RBCs) can lead to complement activation resulting in an accelerated clearance via complement receptors in the liver ...

Activation and Measurement of NLRP3 Inflammasome Activity Using IL-1&#946; in Human Monocyte-derived Dendritic Cells

Activation and Measurement of NLRP3 Inflammasome Activity Using IL-1ÃƒÅ½Ã‚Â² in Human Monocyte-derived Dendritic Cells

Activación y Medición de NLRP3 inflamasoma Actividad Usando IL-1β en las células dendríticas derivadas de monocitos humanos

Inflammatory processes resulting from the secretion of Interleukin (IL)-1 family cytokines by immune cells lead to local or systemic inflammation, tissue ...

Isolation of Murine Peritoneal Macrophages to Carry Out Gene Expression Analysis Upon Toll-like Receptors Stimulation

Aislamiento de macrófagos peritoneales murinos para llevar a cabo análisis de expresión génica Al Toll-like Receptores Estimulación

During infection and inflammation, circulating monocytes leave the bloodstream and migrate into tissues, where they differentiate into macrophages. ...

Isolation and Activation of Murine Lymphocytes

Aislamiento y activación de los linfocitos murinos

B and T cells, with their extremely diverse antigen-receptor repertoires, have the ability to mount specific immune responses against almost any invading ...

Flow Cytometric Analysis of Natural Killer Cell Lytic Activity in Human Whole Blood

Análisis de citometría de flujo de las células asesinas naturales lítico Actividad en sangre entera humana

NK cell cytotoxicity is a widely used measure to determine the effect of outside intervention on NK cell function. However, the accuracy and ...

Detection of Inflammasome Activation and Pyroptotic Cell Death in Murine Bone Marrow-derived Macrophages

Detección de Inflammasome activación y muerte celular Pyroptotic en macrófagos derivados de médula ósea murinas

Inflammasomes are innate immune signaling platforms that are required for the successful control of many pathogenic organisms, but also promote ...

A High-throughput Platform for the Screening of Salmonella spp./Shigella spp.

A High-throughput Platform for the Screening of Salmonella spp./Shigella spp.

Una plataforma de alto rendimiento para la detección de Salmonella spp. /Shigella spp.

Fecal-oral transmission of acute gastroenteritis occurs from time to time, especially when people who handled food and water are infected by Salmonella ...