Name: direct analysis of single cells by mass spectrometry at atmospheric pressure
Uploaded: 2010-09-04T17:00:00
Duration: 8 min 19 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Direct Analysis of Single Cells by Mass Spectrometry at Atmospheric Pressure at JoVE.com

המחברים מודים תמיכה כספית על ידי המוסדות הבאים: הקרן הלאומית למדע (מענק 0,719,232), מחלקת האנרגיה (גרנט DEFG02-01ER15129), קק WM Foundation (גרנט 041,904), ואת מאוניברסיטת ג&#39;ורג&#39; וושינגטון קרן מחקר שיפור. המחברים מודים עבור GeO2 מבוססי סיבים אופטיים שסופקו בנדיבות לדיון הראשוני על פרוטוקול בדבר תחריט סיבים ידי Mark E. ריבס ג&#39;ואן א הופמן של ג&#39;ורג&#39; וושינגטון על ידי מערכות סיבים אינפרא אדום (Silver Spring, MD), כמו גם האוניברסיטה. המחברים רוצה גם להודות ג&#39;סיקה א Stolee על עזרתה במהלך במצלמת וידיאו את הפרוטוקול.

1. רכיבים אופטיים <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אבלציה לייזר עבור יינון אבלציה electrospray לייזר (LAESI) ספקטרומטריית מסה (MS) מופק על ידי 5 ns הדופק לייזר באורך גל 2.94 מיקרומטר. מתנד אופטי מתכונן פרמטרית מונע על ידי Nd: YAG לייזר (Opolette 100, Opotek Inc, בקרלסבד, קליפורניה) משמש אבלציה במחקר זה. שיעור החזרה נבחר בין 5 ל 100 הרץ. זהו לייזר בכיתה ד &#39;כי בחשיפה ישירה עלולה לגרום לנזק בלתי הפיך חמור בעין או העור. השתקפות מפוזר של קרן לייזר יכולה להיות גם מסוכנת העור או העיניים. לבשי goggle לייזר מתאים להגנה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> סיב אופטי עשוי זכוכית דו מבוססי גרמניום התקבל אינפרא מערכות סיבים, Inc (Silver Spring, MD). אם יש Hytrel ו polyimide ציפויים על הסיב בצע את ההוראות שלהלן כדי להסיר אותם מן הקצוות. מחממים 1-methyl-2-pyrrolidinone ל 130-150 מעלות צלזיוס במנדף קטר. טובלים את קצות הסיבים אתה רוצה להתפשט לתוך הנוזל הזה דקות או עד כ 1 ציפוי מתחיל להתרכך להתקלף. טובלים את ציפוי מרוככת לתוך מתאנול או isopropanol לרגע, ולנגב את כל ציפוי הנותרים עם מפית ונטולת מוך. לאחר הסרת ציפוי, לדבוק בשני הקצוות של סיבים עם להב ספיר (KITCO סיבים אופטיים, וירג&#39;יניה ביץ&#39;, VA) כשקלע בעדינות מצלם אותם. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כדי להשיג את חדות הרצוי כימית סוף לחרוט אחד קצה סיב ב -1% (v / v) חומצה חנקתית (כיתה מגיב) פתרון. אנכית לטבול את קצה נבחרים של סיבים לתוך התמיסה חומצה עד לעומק של 300-500 מיקרומטר לאחר המגע הראשוני. לאחר כ 15 דקות של תחריט, הטיפ יהיה ספונטני להתנתק מפני השטח חומצה. התוצאה היא קצה סיב חידד עם רדיוס 15 ~ מיקרומטר של עקמומיות. לשטוף עם מים deionized כדי להסיר שאריות חומצה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הר סוף חרוט של סיבים על micromanipulator (MN-151, Narishige, טוקיו, יפן) ולהביא אותו אל קרבה (~ 20 מיקרומטר) של תא השטח להפקדה לחיסכון באנרגיה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> החזק את קצה שאינם חרוט של סיב אופטי באמצעות סיב צ&#39;אק חשוף (BFC300, Siskiyou Corporation, Pass מענקים, OR). במשך יישור אופטי, צ&#39;אק הסיבים הוא רכוב על המתרגם חמש ציר (BFT-5, Siskiyou Corporation, Pass מענקים, OR). אנרגיית הלייזר (0.5-1 mJ) הוא בשילוב לתוך סיב על ידי מיקוד אלומת ידי פלואוריד Plano-קמור סידן או ZnSe מצופה antireflection העדשה (מוצרים אופטיים אינפרא אדום, Farmingdale, ניו יורק) על סופו הלא חרוט. מראות זהב מוגן (PF10-03-M01, Thorlabs, ניוטון, NJ) משמשים כדי לכוון את אלומת האור אמצע IR לייזר על גבי העדשה מתמקדת. </li></ol> 2. Electrospray ההתקנה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> המערכת electrospray ניתן לבנות באמצעות הרכיבים הבאים: איגוד מתכת עם טבעת חזוק perfluoroelastomer, אביזרי מוליך, שרוול צינור, מחט הנמל (למשל, U-435, M215, F-331Nx, F-242x, 9013, בהתאמה IDEX בריאות למדעים, Oak Harbor, WA), כמו גם צינורות סיליקה התמזגו (למשל, CT360-100-50-5, ניו המטרה Inc, Woburn, MA). פולט המליצה עשוי נירוסטה בעל קצה קוני עם מזהה 50 מיקרומטר (למשל, MT320-50-5-5, ניו המטרה Inc, Woburn, MA). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן פתרון מתנול 50% עם חומצה אצטית 0.1% (v / v) עבור electrospray. הפתרון נשאבים בקצב של מינימום 200-300 / nl ידי משאבת מזרק (הרווארד Apparatus, Holliston, MA) באמצעות, למשל, מזרק 500 μl (81,222, חברת המילטון, רינו, NV). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> החל מתח גבוה בין 2800 ו - 3000 V לאיגוד מתכת על ידי אספקת חשמל מוסדר (PS350, Stanford Research Systems Inc, Sunnyvale, CA) כדי ליצור electrospray יציב. ודא שכל חיבורי החשמל הם בטוחים מוגן עם סיכוך מוארקים כיאות. מגע ישיר עם מתח גבוה חשופה עלולה לגרום להתחשמלות. </li></ol> 3. לדוגמה טיפול <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השג את רקמת חיים או דגימת תאים ממקור המתאים ולשמור אותם מומלץ כמו לפני ניתוח. נורות Allium cepa להפגנה זו נרכשו בחנות המקומית. גזור נורה longitudinally ידי אזמל מנתחים. קטע סנטימטר כמה בקנה מידה נותח לרצועה. Monolayer שלם של רקמת אפידרמיס הפנימי הוא קילף. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> המשטח הרטוב של האפידרמיס משמש הר רקמה על שקופית מראש לנקות מיקרוסקופ זכוכית. החזק את השקופית על ידי בעל לוחית בכלל מטרה (FP01, Thorlabs בע&quot;מ, ניוטון, NJ) רכוב על הבמה שלוש ציר תרגום מיצוב. רוכשת את הספקטרום המונית מיד לאחר ההרכבה את המדגם כדי למנוע השפלה התא. </li></ol> 4. ויזואליזציה מערכת <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שני מיקרוסקופים למרחקים ארוכים משמשות כדי לבחור את התאים לניתוח כדי לשמור על המרחק בין קצה סיב חידד את שטח פני התא. האחרון הוא רכוב תחת זווית ° 15 ° -30 נמדד מפני השטח. מערכת זו מורכבת אלוידאו אונג מרחק מיקרוסקופ (זום אופטי 7x דיוק, אדמונד אופטיקה, ברינגטון, NJ) עם אינסוף 5x לתקן עדשה אובייקטיבי (Apo M תוכנית 5x, Mitutoyo ושות&#39;, קאנאגאווה, יפן) מצויד במצלמת CCD (מרלין F131, בעלות הברית ויז&#39;ן טכנולוגיות , Stadtroda, גרמניה) לניטור לכידת תמונה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> המיקרוסקופ וידאו השני הוא רכוב בזווית ישרה אל פני השטח מדגם לדמיין את התאים מלמעלה. מערכת זו מספקת משוב חזותי כדי ליישר את קצה סיב על התא הנבחר עבור אבלציה וניתוח. זה מורכב דיוק זום אופטי 7x (אדמונד אופטיקה, ברינגטון, NJ), מצויד באינסוף 10x תיקן עבודה ארוכות אובייקטיבי מרחק העדשה (M תוכנית Apo 10x, Mitutoyo ושות&#39;, קאנאגאווה, יפן) מצלמה CCD. </li></ol> 5. רכישת ספקטרה המוניים <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הפעל את הלייזר, את electrospray ואת ספקטרומטר מסה, למשל, מערכת quadrupole הזמן של הטיסה (Q-TOF פרמייר, ווטרס, Milford, MA). מטב את הגיאומטריה של המקור יון LAESI ידי התאמת המיקום של המקום אבלציה ו פולט electrospray ביחס אחד לשני ואת פתח של ספקטרומטר מסה להשיג בעוצמות יון מקסימלית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בחר את התא עניין לניתוח באמצעות מערכת העליונה להציג ראיה. לאחר הבחירה, להזיז את הבמה מדגם להביא את התא הנבחר ישירות מתחת קצה מחודד של סיב אופטי. באמצעות מיקרוסקופ צד להציג להתקין מחדש את קצה אל תא השטח המרחק ~ 20 מיקרומטר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אש פעימות לייזר בתא הנבחר דרך קצה סיב חרוט. זו התוצאה ניקוב של קיר התא לבין פליטה של ​​בציטופלסמה בצורה של חומר חלקיקי. לאחר postionization ידי electrospray, היונים המיוצרים נאספים על ידי ספקטרומטר מסה ספקטרה מסה נרשמות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר רכישת נתונים, לשים את לייזר, electrospray ואת ספקטרומטר מסה במצב המתנה או לכבות אותם. שמור את א ablated cepa דגימה להסתכלות אופציונלי על ידי מיקרוסקופ אור. </li></ol> 6. נציג תוצאות אבלציה מוצלחת של התוצאות תא בודד בתוך התפוצצות של התא הקיר ואת האוסף של הספקטרום מסה LAESI. ניסוי מוצלח בדרך כלל התוצאות לא אבלציה ו / או לא ספקטרום המונית. למטרות הדגמה, אנו מציגים את התוצאות מניתוח LAESI-MS של תא בודד אפידרמיס מוטבע א cepa הנורה. ציור 2a מראה תמונה נציג מיקרוסקופיה אופטית לאחר דגימה של תא. דופן התא הוא מחורר והיקף ניקוב הוא מוגבל על ידי גבולות עם תאים שכנים. תאים סמוכים נראה שלם. איור 2b מראה ספקטרום המונית נציג LAESI המופק התא. מגוון רחב של יונים מזוהים מ - א &#39; cepa סלולריים המבוססים על מסות מדויק שלהם, דפוסי איזוטופ הפצה, במקרים מסוימים, ספקטרה טנדם המונית, הם מוקצים בהיסוס אל מטבוליטים אנדוגני. יונים מזוהה מתא בודד היו דומים לאלה שנצפו בניתוח של רקמות זהה על ידי קונבנציונאלי LAESI-MS של תאים רבים. 13 <img src="/files/ftp_upload/2144/2144fig1.jpg" alt="איור 1" /> באיור 1. ניתוח סכמטי של תא בודד על ידי LAESI-MS. הדופק אמצע IR לייזר בשילוב לתוך סיב אופטי ונמסרו המדגם להציב בשקופית זכוכית. קצה סיב חידד מתמקד האור לתוך התא היעד ואת האנרגיה שהופקדו התפרצויות התא. פלומת אבלציה המיוצר (נקודות אדומות) היא התמזגה עם פלומת electrospray (נקודות שחורות) הטיפות להתגבש (נקודות ירוקות) וכתוצאה מכך ייצור יון ספציפי המדגם. יונים אלה הם נותחו זוהה על ידי ספקטרומטר מסה (MS). שני ארוכות וידאו מרחק מיקרוסקופים, מיקרוסקופ מיקרוסקופ 1 ו 2, מנוצלים כדי לפקח על המרחק בין קצה סיבים על פני התא כדי לבחור תא לניתוח, בהתאמה. <img src="/files/ftp_upload/2144/2144fig2a.jpg" alt="איור 2a" /> איור 2 א. אבלציה סימן על תא אפידרמיס בודד של א &#39; cepa הנורה. תאים סמוכים אינם מציגים נזק לעין, ולאחר מכן ניתן לנתח בנפרד. <img src="/files/ftp_upload/2144/2144fig2b.jpg" alt="איור 2b" /> איור 2b. המוניים המתאימים אבלציה של א &#39;אחד ספקטרום תא אפידרמיס cepa מראה נוכחות של מטבוליטים ראשוניים ומשניים.

<ol>
	<li>Cooks, R. G., Ouyang, Z., Takats, Z., Wiseman, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ambient+Mass+Spectrometry.">Ambient Mass Spectrometry.</a> Science. 311, 1566-1570 (2006).</li><li>Chen, Z. Y., Vertes, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Early+plume+expansion+in+atmospheric+pressure+midinfrared+laser+ablation+of+water-rich+targets.">Early plume expansion in atmospheric pressure midinfrared laser ablation of water-rich targets.</a> Physical Review E. E77, 036316-036316 (2008).</li><li>Li, Y., Shrestha, B., Vertes, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Atmospheric+Pressure+Molecular+Imaging+by+Infrared+MALDI.">Atmospheric Pressure Molecular Imaging by Infrared MALDI.</a> Mass Spectrometry. Analytical Chemistry. 79, 523-532 (2006).</li><li>Li, Y., Shrestha, B., Vertes, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Atmospheric+Pressure+Infrared+MALDI+Imaging+Mass+Spectrometry+for+Plant+Metabolomics.">Atmospheric Pressure Infrared MALDI Imaging Mass Spectrometry for Plant Metabolomics.</a> Analytical Chemistry. 80, 407-420 (2007).</li><li>Nemes, P., Vertes, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Laser+Ablation+Electrospray+Ionization+for+Atmospheric+Pressure+in+Vivo,+and+Imaging+Mass+Spectrometry.">Laser Ablation Electrospray Ionization for Atmospheric Pressure in Vivo, and Imaging Mass Spectrometry.</a> Analytical Chemistry. 79, 8098-8106 (2007).</li><li>Shrestha, B., Li, Y., Vertes, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+analysis+of+pharmaceuticals+and+excreted+xenobiotic+and+endogenous+metabolites+with+atmospheric+pressure+infrared+MALDI+mass+spectrometry.">Rapid analysis of pharmaceuticals and excreted xenobiotic and endogenous metabolites with atmospheric pressure infrared MALDI mass spectrometry.</a> Metabolomics. 4, 297-311 (2008).</li><li>Nemes, P., Barton, A. A., Li, Y., Vertes, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ambient+Molecular+Imaging+and+Depth+Profiling+of+Live+Tissue+by+Infrared+Laser+Ablation+Electrospray+Ionization+Mass+Spectrometry.">Ambient Molecular Imaging and Depth Profiling of Live Tissue by Infrared Laser Ablation Electrospray Ionization Mass Spectrometry.</a> Analytical Chemistry. 80, 4575-4582 (2008).</li><li>Nemes, P., Barton, A. A., Vertes, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Three-Dimensional+Imaging+of+Metabolites+in+Tissues+under+Ambient+Conditions+by+Laser+Ablation+Electrospray+Ionization+Mass+Spectrometry.">Three-Dimensional Imaging of Metabolites in Tissues under Ambient Conditions by Laser Ablation Electrospray Ionization Mass Spectrometry.</a> Analytical Chemistry. 81, 6668-6675 (2009).</li><li>Nemes, P., Woods, A. S., Vertes, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Simultaneous+Imaging+of+Small+Metabolites+and+Lipids+in+Rat+Brain+Tissues+at+Atmospheric+Pressure+by+Laser+Ablation+Electrospray+Ionization+Mass+Spectrometry.">Simultaneous Imaging of Small Metabolites and Lipids in Rat Brain Tissues at Atmospheric Pressure by Laser Ablation Electrospray Ionization Mass Spectrometry.</a> Analytical Chemistry. 82, 982-988 (2010).</li><li>Shrestha, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Direct+analysis+of+lipids+and+small+metabolites+in+mouse+brain+tissue+by+AP+IR-MALDI+and+reactive+LAESI+mass+spectrometry.">Direct analysis of lipids and small metabolites in mouse brain tissue by AP IR-MALDI and reactive LAESI mass spectrometry.</a> Analyst. , (2010).</li><li>Sripadi, P., Nazarian, J., Hathout, Y., Hoffman, E., Vertes, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+analysis+of+metabolites+from+the+untreated+tissue+of+Torpedo+californica+electric+organ+by+mid-infrared+laser+ablation+electrospray+ionization+mass+spectrometry.">In vitro analysis of metabolites from the untreated tissue of Torpedo californica electric organ by mid-infrared laser ablation electrospray ionization mass spectrometry.</a> Metabolomics. 5, 263-276 (2009).</li><li>Shrestha, B., Vertes, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+Situ+Metabolic+Profiling+of+Single+Cells+by+Laser+Ablation+Electrospray+Ionization+Mass+Spectrometry.">In Situ Metabolic Profiling of Single Cells by Laser Ablation Electrospray Ionization Mass Spectrometry.</a> Analytical Chemistry. 81, 8265-8271 (2009).</li><li>Shrestha, B., Nemes, P., Vertes, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ablation+and+Analysis+of+a+Single+Cell+by+Consecutive+Laser+Pulses.">Ablation and Analysis of a Single Cell by Consecutive Laser Pulses.</a> Applied Physics A. , (2010).</li></ol>

אין ניגודי אינטרסים הכריז.

תכולת המים של הציטופלסמה של התא ואת חוזק מתיחה של קיר התא או הממברנה הם גורמים קריטיים הקובעים את אבלציה של תאים בודדים במהלך ניתוח LAESI-MS. השטף הלייזר חייב להיות מותאם כדי להגיע אל סף אבלציה של סוגי תאים שונים. השטף לייזר נמסר תלוי באנרגיה של הדופק לייזר על המרחק בין קצה סיבים על פני התא. צמצום ההפרעות של תאים שכנים במהלך הניתוח תא בודד הוא קריטי. שמירה על אנרגיית הלייזר על סף אבלציה מגביל את ההשפעה של הניתוח על תאים סמוכים. אחד היישומים האפשריים הוא באמצעות תאים בודדים כמו פיקסלים נפח טבעי (voxels) עבור דימות כימי על ידי MS. לעומת איסוף נתונים על רשת מלבני לעתים קרובות מלאכותי, דימות כימי של תא רקמת אחד בכל פעם, סביר יותר כדי לשמר את הארגון המרחבי של יחסי הגומלין הביוכימיים בין תאים.

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Acetic acid</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fluka</td>
<td>45727</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Methanol</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fluka</td>
<td>65548</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>1-methyl-2-pyrrolidinon</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma Aldrich</td>
<td>M79603</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Water</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fluka</td>
<td>39259</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

direct analysis of single cells by mass spectrometry at atmospheric pressure

ניתוח ביוכימיים בתאים אחד חשוב להבנת מטבוליזם התא, מחזור התא, הסתגלות, מצבי מחלה, וכו &#39;גם סוגי תאים באותה תערוכה איפור ביוכימיים הטרוגניות בהתאם לתנאי פיזיולוגיים שלהם ואת האינטראקציות עם הסביבה. בשיטות המקובלות של ספקטרומטריית מסה (MS) המשמשים לניתוח של ביומולקולות בתא בודד להסתמך על הכנה מדגם נרחב. הסרת תאים בסביבתם הטבעית ועיבוד מדגם נרחב יכול להוביל שינויים בהרכב הסלולר. שיטות יינון אמביינט לאפשר ניתוח של דגימות בסביבה המקורית שלהם, ללא הכנה מדגם נרחב. 1 הטכניקות המבוסס על אבלציה אמצע לייזר אינפרא אדום (אמצע IR) של חומרים ביולוגיים באורך גל 2.94 מיקרומטר לנצל את עירור פתאומית של מים כי תוצאות שלב הפיצוץ. 2 שיטות יינון אמביינט מבוסס על קרינה אמצע IR לייזר, כגון יינון אבלציה electrospray לייזר (LAESI) ובלחץ אטמוספרי אינפרא אדום מטריצה ​​בעזרת לייזר יינון desorption (AP IR-MALDI), הוכיחו בהצלחה את היכולת לנתח ישירות מים רקמות עשירות biofluids בלחץ אטמוספרי. 3-11 ב LAESI אמצע IR אבלציה לייזר פלומת כי בעיקר מורכב של חומר חלקיקי ניטרלי מן המדגם מתמזגת עם טיפות electrospray טעון לייצר יונים. לאחרונה, אמצע IR אבלציה של תאים בודדים בוצעה על ידי מתן קרינה אמצע IR באמצעות סיב חרוט. פלומת שנוצר אבלציה זה היה postionized ידי electrospray המאפשר ניתוח של מטבוליטים שונים בתאי יחיד על ידי LAESI-MS. 12 מאמר זה מתאר את פרוטוקול מפורט לניתוח תא בודד באמצעות LAESI-MS. הסרטון הציג מדגים את הניתוח של תא אפידרמיס בודד מן העור של הנורה Allium cepa. סכמטי של המערכת מוצג באיור 1. למשל נציג אבלציה תא יחיד קשת מסה LAESI מהתא ניתנים באיור 2.

Watch this Scientific Journal Video about Direct Analysis of Single Cells by Mass Spectrometry at Atmospheric Pressure at JoVE.com

Direct Analysis of Single Cells by Mass Spectrometry at Atmospheric Pressure

ניתוח תא יחיד מבוצע על ידי ספקטרומטריית מסה בתאי צמחים ובעלי חיים בלחץ אטמוספרי באמצעות סיב אופטי מחודד המדגם תאים יינון אבלציה electrospray לייזר (LAESI) ספקטרומטריית מסה.

ניתוח ישיר של תאים בודדים באמצעות ספקטרומטריית מסה בלחץ אטמוספרי

Analysis of biochemicals in single cells is important for understanding cell metabolism, cell cycle, adaptation, disease states, etc. Even the same cell ...

Research

JoVE Journal

Biology

MALDI Sample Preparation: the Ultra Thin Layer Method

MALDI הכנה לדוגמא: שיטת אולטרה שכבה דקה

This video demonstrates the preparation of an ultra-thin matrix/analyte layer for analyzing peptides and proteins by Matrix-Assisted Laser Desorption ...

Analyzing Large Protein Complexes by Structural Mass Spectrometry

ניתוח מערכות חלבון גדול על ידי ספקטרומטריית מסה מבנית

Living cells control and regulate their biological processes through the coordinated action of a large number of proteins that assemble themselves into an ...

T-wave Ion Mobility-mass Spectrometry: Basic Experimental Procedures for Protein Complex Analysis

גל T-Ion Mobility-ספקטרומטריית מסה: הפרוצדורות בסיסי לניתוח חלבונים מורכבים

Ion mobility (IM) is a method that measures the time taken for an ion to travel through a pressurized cell under the influence of a weak electric field. ...

Atmospheric-pressure Molecular Imaging of Biological Tissues and Biofilms by LAESI Mass Spectrometry

בלחץ אטמוספרי מולקולרית והדמיה של רקמות ביולוגיות באמצעות Biofilms LAESI המוניים ספקטרומטריית

Ambient ionization methods in mass spectrometry allow analytical investigations to be performed directly on a tissue or biofilm under native-like ...

Amide Hydrogen/Deuterium Exchange &amp; MALDI-TOF Mass Spectrometry Analysis of Pak2 Activation

Amide Hydrogen/Deuterium Exchange & MALDI-TOF Mass Spectrometry Analysis of Pak2 Activation

אמיד מימן / דאוטריום Exchange &amp; MALDI-TOF המוני ספקטרומטריית ניתוח של הפעלת Pak2

Amide hydrogen/deuterium exchange (H/D exchange) coupled with mass spectrometry has been widely used to analyze the interface of protein-protein ...

Analysis of Global RNA Synthesis at the Single Cell Level following Hypoxia

ניתוח של גלובל RNA סינתזה ברמת התא בודד הבאות היפוקסיה

Hypoxia or lowering of the oxygen availability is involved in many physiological and pathological processes. At the molecular level, cells initiate a ...

Enrichment of Extracellular Matrix Proteins from Tissues and Digestion into Peptides for Mass Spectrometry Analysis

העשרה תאית מטריקס חלבונים מרקמות ועיכול לפפטידים לניתוח ספקטרומטריית המסה

The extracellular matrix (ECM) is a complex meshwork of cross-linked proteins that provides biophysical and biochemical cues that are major regulators of ...

Analysis of LINE-1 Retrotransposition at the Single Nucleus Level

ניתוח של ורטרו-טרנספוזיציה LINE-1 ברמת יחיד Nucleus

Long interspersed nuclear element-1 (Line-1 or L1) accounts for approximately 17% of the DNA present in the human genome. While the majority of L1s are ...

Applications of the Single-probe: Mass Spectrometry Imaging and Single Cell Analysis under Ambient Conditions

יישומים של-הבדיקה הבודדה: הדמיה ספקטרומטריית מסה וניתוח תא יחיד בתנאי הסביבה

Mass spectrometry imaging (MSI) and in-situ single cell mass spectrometry (SCMS) analysis under ambient conditions are two emerging fields with great ...

Sample Preparation for Mass-spectrometry-based Proteomics Analysis of Ocular Microvessels

הכנת הדוגמא מסה ספקטרומטר מבוססת על ניתוח פרוטאומיקס של עינית Microvessels

The use of isolated ocular blood vessels in vitro to decipher the pathophysiological state of the eye using advanced technological approaches has greatly ...