Name: an orthotopic model of serous ovarian cancer in immunocompetent mice for in vivo tumor imaging and monitoring of tumor immune responses
Uploaded: 2010-11-28T17:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about An Orthotopic Model of Serous Ovarian Cancer in Immunocompetent Mice for in vivo Tumor Imaging and Monitoring of Tumor Immune Responses at JoVE.com

Dit werk werd ondersteund door de NIH subsidie ​​P01 AI 068.730 (SNC, NS), het NIH subsidie ​​CA016520 / TAPITMAT (NS), de private financiering van de Claneil Foundation (NS), en de ovariële SPORE verlenen aan FCCC en de University of Pennsylvania ( P50 CA83638) en het Fox Chase Cancer Center Core Grant (P30 CA06927) (DCC). De auteurs danken de uitstekende technische bijstand van de Optische / Bioluminescentie Core Facility onder leiding van dr. EJ Delikatny aan de Universiteit van Pennsylvania, Anthony Secreto uit de Stem Cell en xenograft Core onder leiding van dr. G. Danet-Desnoyers aan de Universiteit van Pennsylvania Kanker centrum voor de opleiding van SNC tot orthotope injectietechniek en Denada Dangaj aan de Universiteit van Pennsylvania / OCRC voor de ondersteuning van de operatie.

1. Cel Cultuur <ol><li> Voor orthotope injectie, cultuur MOV1 Kat cellen, afgeleid van DR26 tumoren, in een T175 fles totdat ze 90% confluent. Van plan om 1 tot 5 miljoen cellen per injectie, die nodig 1 of 2 T175 flessen te gebruiken. </li><li> Op de dag van de injectie, oogst de cellen en bepaalt het aantal cellen met behulp van een hemocytometer. </li><li> Zodra de cel concentratie is vastgesteld, pellet van de cellen door centrifugatie gedurende 5 minuten bij 300 xg bij kamertemperatuur. </li><li> Naar ...

<ol>
	<li>Etzioni, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+case+for+early+detection.">The case for early detection.</a> Nat Rev Cancer. 3, 243-252 (2003).</li><li>Sasaroli, D., Coukos, G., Scholler, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Beyond+CA125:+the+coming+of+age+of+ovarian+cancer+biomarkers.+Are+we+there+yet.">Beyond CA125: the coming of age of ovarian cancer biomarkers. Are we there yet.</a> Future Medicine. 3, 275-288 (2009).</li><li>Anderson, G. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessing+Lead+Time+of+Selected+Ovarian+Cancer+Biomarkers:+A+Nested+Case+Control+Study.">Assessing Lead Time of Selected Ovarian Cancer Biomarkers: A Nested Case Control Study.</a> J Natl Cancer Inst. 102, 26-38 (2010).</li><li>Auersperg, N., Wong, A. S., Choi, K. C., Kang, S. K., Leung, P. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ovarian+surface+epithelium:+biology,+endocrinology,+and+pathology.">Ovarian surface epithelium: biology, endocrinology, and pathology.</a> Endocr Rev 22. , 255-288 (2001).</li><li>Dubeau, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+cell+of+origin+of+ovarian+epithelial+tumours.">The cell of origin of ovarian epithelial tumours.</a> Lancet Oncol. 9, 1191-1197 (2008).</li><li>Connolly, D. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Female+mice+chimeric+for+expression+of+the+simian+virus+40+TAg+under+control+of+the+MISIIR+promoter+develop+epithelial+ovarian+cancer.">Female mice chimeric for expression of the simian virus 40 TAg under control of the MISIIR promoter develop epithelial ovarian cancer.</a> Cancer Res. 63, 1389-1397 (2003).</li><li>Hensley, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Magnetic+resonance+imaging+for+detection+and+determination+of+tumor+volume+in+a+genetically+engineered+mouse+model+of+ovarian+cancer.">Magnetic resonance imaging for detection and determination of tumor volume in a genetically engineered mouse model of ovarian cancer.</a> Cancer Biol Ther. 6, (2007).</li><li>Deliolanis, N. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Performance+of+the+red-shifted+fluorescent+proteins+in+deep-tissue+molecular+imaging+applications.">Performance of the red-shifted fluorescent proteins in deep-tissue molecular imaging applications.</a> J Biomed Opt. 13, (2008).</li><li>Hoffman, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+better+fluorescent+protein+for+whole-body+imaging.">A better fluorescent protein for whole-body imaging.</a> Trends Biotechnol. 26, (2008).</li><li>Shcherbo, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=far-red+fluorescent+protein+for+whole-body+imaging.">far-red fluorescent protein for whole-body imaging.</a> Nat Methods. 4, 741-746 (2007).</li><li>Fu, X., Hoffman, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+ovarian+carcinoma+metastatic+models+constructed+in+nude+mice+by+orthotopic+transplantation+of+histologically-intact+patient+specimens.">Human ovarian carcinoma metastatic models constructed in nude mice by orthotopic transplantation of histologically-intact patient specimens.</a> Anticancer Res. 13, 283-286 (1993).</li><li>Kiguchi, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+patient-like+orthotopic+implantation+nude+mouse+model+of+highly+metastatic+human+ovarian+cancer.">A patient-like orthotopic implantation nude mouse model of highly metastatic human ovarian cancer.</a> Clinical &amp; experimental metastasis 16. , 751-756 (1998).</li><li>Bao, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activation+of+cancer-specific+gene+expression+by+the+survivin+promoter.">Activation of cancer-specific gene expression by the survivin promoter.</a> J Natl Cancer Inst. 94, 522-528 (2002).</li><li>Connolly, D. C., Hensley, H. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Xenograft+and+Transgenic+Mouse+Models+of+Epithelial+Ovarian+Cancer+and+Non+Invasive+Imaging+Modalities+to+Monitor+Ovarian+Tumor+Growth+In+situ+-Applications+in+Evaluating+Novel+Therapeutic+Agents.+Current+Protocols+in+Pharmacology+45.">Xenograft and Transgenic Mouse Models of Epithelial Ovarian Cancer and Non Invasive Imaging Modalities to Monitor Ovarian Tumor Growth In situ -Applications in Evaluating Novel Therapeutic Agents. Current Protocols in Pharmacology 45.</a> , 1-36 .</li><li>Milne, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Systematic+analysis+of+immune+infiltrates+in+high-grade+serous+ovarian+cancer+reveals+CD20,+FoxP3+and+TIA-1+as+positive+prognostic+factors.">Systematic analysis of immune infiltrates in high-grade serous ovarian cancer reveals CD20, FoxP3 and TIA-1 as positive prognostic factors.</a> , (2009).</li></ol>

Chirurgie en orthotope injecties Orthotope injectie in de eierstokken bursa vraagt ​​training en precisie. Dus <ol><li> In het geval van een slechte chirurgische ervaring, oefenen met kadavers eerste. </li><li> Gebruik bij voorkeur multipara vrouwen (een of twee nestjes) zoals ze zich ontwikkelen groter eierstokken loop van de tijd die injectie en verhoging van overleving faciliteert om te vergelijken met nullipara vrouwen. </li><li> Vanwege de kleine omvang van de muis ovariële slijm...

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>DMEM-GLUTAMAX</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>10564-011</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>PBS</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Gibco</td>
<td>14040</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Versene</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Lonza</td>
<td>17-711E</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Heating pad</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Deltaphase</td>
<td>39 DP</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Povidone pads</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Dynarex</td>
<td>1108</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Alcohol pads</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fisher</td>
<td>06-669-62</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Artificial tears ointment </td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Phoenix Pharma., Inc.</td>
<td>17845-153</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Ketoprofen</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fort Dodge laboratories</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>3cc/insulin syringe</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>BD</td>
<td>309301</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Polyg Polyglycolic Acid suture/needle (3/8 19mm)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Syneture</td>
<td>9612-31</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Tissue adhesive</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Vetbond</td>
<td>3M</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Vet Bactrim/ oral suspension</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Hi-tech Pharmacal</td>
<td>840823</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>IVIS-Lumina</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Caliper lifesciences</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Isofluorane</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Phoenix Pharma., Inc.</td>
<td>J108013</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Fetal Bovine Serum, Qualified</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>10437036</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Penicillin/streptomycin</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Gibco</td>
<td>15140</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>TurboFP635 mammalian vector</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Evrogen</td>
<td>FP721</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>T175 flasks</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>cellstar</td>
<td>660-190</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

an orthotopic model of serous ovarian cancer in immunocompetent mice for in vivo tumor imaging and monitoring of tumor immune responses

Achtergrond: Eierstokkanker is over het algemeen gediagnosticeerd in een vergevorderd stadium waar de zaak / sterfte-verhouding hoog is en dus blijft de meest dodelijke van alle gynaecologische maligniteiten onder Amerikaanse vrouwen 1,2,3. Sereuze tumoren zijn de meest voorkomende vormen van kanker van de eierstokken en 4,5 van de Tg-MISIIR-Tag transgene is de enige muis model dat zich spontaan ontwikkelt dit type tumoren. Tg-MISIIR-Tag muizen express SV40 transformeren gebied onder controle van de Müller groeiremmende stof type II Receptor (MISIIR) gen promoter 6. Extra transgene lijnen geïdentificeerd die uitdrukken van de SV40 TAg transgen, maar ontwikkelen geen ovariële tumoren. Niet-tumor gevoelig muizen vertonen typische levensduur voor C57Bl / 6 muizen, en zijn vruchtbaar. Deze muizen kunnen worden gebruikt als syngene transplantaat ontvangers voor tumor cellen geïsoleerd uit Tg-MISIIR-tag-DR26 muizen. Doelstelling: Hoewel tumor beeldvorming mogelijk is zeven, de vroege opsporing van diepe tumoren is een uitdaging in kleine levende dieren. Om de pre-klinische studies in een immunologisch intact diermodel voor sereuze eierstokkanker, beschrijven we een syngene muismodel voor deze vorm van eierstokkanker, dat vergunningen in vivo beeldvorming, studies van de tumor micro-omgeving en de tumor immuunrespons. Methoden: We hebben eerst afgeleid een TAG + muis kanker cellijn (MOV1) van een spontane ovariële tumor geoogst in een 26 weken oude DR26 Tg-MISIIR-Tag vrouw. Dan hebben we stabiel MOV1 cellen getransduceerd met TurboFP635 lentivirus zoogdieren vector die codeert voor Katushka, een ver-rood mutant van de rode fluorescerende eiwit uit zee-anemoon Entacmaea quadricolor met excitatie / emissie maxima bij 588/635 nm 8,9,10. We orthotopically geïmplanteerd MOV1 Kat in de eierstok 11,12,13,14 van niet-tumor gevoelig Tg-MISIIR-Tag vrouwelijke muizen. Tumorprogressie werd gevolgd door in vivo optische beeldvorming en de tumor micro-omgeving werd geanalyseerd door immunohistochemie. Resultaten: Orthotopically geïmplanteerde MOV1 Kat cellen ontwikkeld sereuze ovariële tumoren. MOV1 Kat tumoren zouden kunnen worden gevisualiseerd door in vivo beeldvorming tot drie weken na de implantatie (fig. 1) en werden geïnfiltreerd met leukocyten, zoals waargenomen in de menselijke eierstokkanker 15 (fig. 2). Conclusies: We beschrijven een orthotope model van eierstokkanker die geschikt zijn voor in vivo beeldvorming van vroege tumoren als gevolg van de hoge pH-stabiliteit en fotostabiliteit van Katushka in diepe weefsels. Wij stellen het gebruik van deze roman syngene model van sereuze eierstokkanker voor in vivo beeldvormend onderzoek en monitoring van de tumor immuunrespons en immuuntherapie.

Watch this Scientific Journal Video about An Orthotopic Model of Serous Ovarian Cancer in Immunocompetent Mice for in vivo Tumor Imaging and Monitoring of Tumor Immune Responses at JoVE.com

An Orthotopic Model of Serous Ovarian Cancer in Immunocompetent Mice for in vivo Tumor Imaging and Monitoring of Tumor Immune Responses

Om te studeren<em&gt; In vivo</em&gt; Tumorgroei en tumor micro-omgeving, hebben we gebruik gemaakt van een syngene en orthotope muismodel van eierstokkanker bij immunocompetente dieren. We getransduceerde een muis tumor cellijn (MOV1) met Katushka fluorescerend eiwit (MOV1<sup&gt; KAT</sup&gt;) En hier tonen we de orthotope implantatie in eierstok-en<em&gt; In vivo</em&gt; Beeldvorming.

Een orthotope Model van sereuze eierstokkanker in immunocompetente muizen voor In vivo Tumor Imaging en Bewaking van de Tumor Immuunrespons

Background: Ovarian cancer is generally diagnosed at an advanced stage where the case/fatality ratio is high and thus remains the most lethal of all ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

An Orthotopic Model of Serous Ovarian Cancer in Immunocompetent Mice for in vivo Tumor Imaging and Monitoring of Tumor Immune Responses

Murine Model of CD40-activation of B cells

Muizenmodel van CD40-activatie van B-cellen

Research on B cells has shown that CD40 activation improves their antigen presentation capacity. When stimulated with interleukin-4 and CD40 ligand ...

An In Vitro Model for Measuring Immune Responses to Malaria in the Context of HIV Co-infection

An In Vitro Model for Measuring Immune Responses to Malaria in the Context of HIV Co-infection

Een<em&gt; In Vitro</em&gt; Model voor het meten van immuunrespons op Malaria in de context van HIV Co-infectie

Malaria and HIV co-infection is a growing health priority. However, most research on malaria or HIV currently focuses on each infection individually. ...

Molecular Diffusion in Plasma Membranes of Primary Lymphocytes Measured by Fluorescence Correlation Spectroscopy

Moleculaire Diffusion in de plasmamembraan van Primary lymfocyten gemeten met behulp van fluorescentie Correlatie Spectroscopie

Fluorescence correlation spectroscopy (FCS) is a powerful technique for studying the diffusion of molecules within biological membranes with high spatial ...

An IL-8 Transiently Transgenized Mouse Model for the In Vivo Long-term Monitoring of Inflammatory Responses

An IL-8 Transiently Transgenized Mouse Model for the In Vivo Long-term Monitoring of Inflammatory Responses

Een IL-8 Transiently Transgenized Mouse Model voor de<em&gt; In Vivo</em&gt; Lange termijn monitoring van inflammatoire reacties

Airway inflammation is often associated with bacterial infections and represents a major determinant of lung disease. The in vivo determination of the ...

Isolation of Salmonella typhimurium-containing Phagosomes from Macrophages

Isolation of Salmonella typhimurium-containing Phagosomes from Macrophages

Isolatie van Salmonella typhimurium-met Phagosomes van Macrophages

Salmonella typhimurium is a facultative intracellular bacterium that causes gastroenteritis in humans. After invasion of the lamina propria, S. ...

Visualizing Intracellular SNARE Trafficking by Fluorescence Lifetime Imaging Microscopy

Visualiseren van intracellulaire SNARE mensenhandel door fluorescentie levensduur microscopie Imaging

Soluble N-ethylmaleimide sensitive fusion protein (NSF) attachment protein receptor (SNARE) proteins are key for membrane trafficking, as they catalyze ...

Characterization of Thymus-dependent and Thymus-independent Immunoglobulin Isotype Responses in Mice Using Enzyme-linked Immunosorbent Assay

Karakterisering van zwezerik-afhankelijke en Thymus-onafhankelijke Immunoglobulin Isotype reacties in muizen met behulp van Enzyme-linked Immunosorbent Assay

Antibodies, also termed as immunoglobulins (Ig), secreted by differentiated B lymphocytes, plasmablasts/plasma cells, in humoral immunity provide a ...

Tailoring In Vivo Cytotoxicity Assays to Study Immunodominance in Tumor-specific CD8+ T Cell Responses

Tailoring In Vivo Cytotoxicity Assays to Study Immunodominance in Tumor-specific CD8+ T Cell Responses

Maatwerk in vivo chemo tests om Immunodominance in tumor-specifieke CD8+ T Cell responsen te bestuderen

Carboxyfluorescein succinimidyl ester (CFSE)-based in vivo cytotoxicity assays enable sensitive and accurate quantitation of CD8+ cytolytic T lymphocyte ...

Implantation and Monitoring by PET/CT of an Orthotopic Model of Human Pleural Mesothelioma in Athymic Mice

Implantatie en monitoring door PET/CT van een Orthothematisch model van menselijk pleura mesothelioom in Athymic muizen

Malignant pleural mesothelioma (MPM) is a rare and aggressive tumor arising in the mesothelium that covers the lungs, the heart, and the thoracic cavity. ...

Visualization, Quantification, and Mapping of Immune Cell Populations in the Tumor Microenvironment

Visualisatie, kwantificering en mapping van immuuncelpopulaties in de tumormicro-omgeving

The immune landscape of the tumor microenvironment (TME) is a determining factor in cancer progression and response to therapy. Specifically, the density ...