Name: an orthotopic model of serous ovarian cancer in immunocompetent mice for in vivo tumor imaging and monitoring of tumor immune responses
Uploaded: 2010-11-28T17:00:00
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Ce travail a été soutenu par le NIH AI P01 068 730 (SNC, N.-É.), le NIH CA016520 / TAPITMAT (N.-É.), le financement privé de la Fondation Claneil (N.-É.), et l&#39;ovaire SPORE accorder à la CCCC et la University of Pennsylvania ( P50 CA83638) et le Fox Chase Cancer Center de base de subvention (P30 CA06927) (CDC). Les auteurs remercient l&#39;assistance technique de l&#39;excellente Core Facility / bioluminescence optique dirigée par le Dr EJ Delikatny à l&#39;Université de Pennsylvanie Secreto, Anthony de la cellule souche et Core xénogreffe dirigé par le Dr. G. Danet-Desnoyers à l&#39;Université de Pennsylvanie cancer Centre de formation pour SNC technique d&#39;injection orthotopique et Denada Dangaj à l&#39;Université de Pennsylvanie / OCRC pour aider la chirurgie.

1. Culture de cellules <ol><li> Avant l&#39;injection orthotopique, la culture des cellules MOV1 Kat, dérivées de tumeurs DR26, dans un flacon T175 jusqu&#39;à ce qu&#39;elles soient confluentes à 90%. Régime d&#39;utiliser 1 à 5 millions de cellules par injection, ce qui nécessitera 1 ou 2 flacons T175. </li><li> Le jour de l&#39;injection, la récolte des cellules et de déterminer le nombre de cellules en utilisant un hématimètre. </li><li> Une fois la concentration cellulaire a été détermin?...

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	<li>Etzioni, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+case+for+early+detection.">The case for early detection.</a> Nat Rev Cancer. 3, 243-252 (2003).</li><li>Sasaroli, D., Coukos, G., Scholler, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Beyond+CA125:+the+coming+of+age+of+ovarian+cancer+biomarkers.+Are+we+there+yet.">Beyond CA125: the coming of age of ovarian cancer biomarkers. Are we there yet.</a> Future Medicine. 3, 275-288 (2009).</li><li>Anderson, G. 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C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Performance+of+the+red-shifted+fluorescent+proteins+in+deep-tissue+molecular+imaging+applications.">Performance of the red-shifted fluorescent proteins in deep-tissue molecular imaging applications.</a> J Biomed Opt. 13, (2008).</li><li>Hoffman, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+better+fluorescent+protein+for+whole-body+imaging.">A better fluorescent protein for whole-body imaging.</a> Trends Biotechnol. 26, (2008).</li><li>Shcherbo, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=far-red+fluorescent+protein+for+whole-body+imaging.">far-red fluorescent protein for whole-body imaging.</a> Nat Methods. 4, 741-746 (2007).</li><li>Fu, X., Hoffman, R. 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Current Protocols in Pharmacology 45.</a> , 1-36 .</li><li>Milne, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Systematic+analysis+of+immune+infiltrates+in+high-grade+serous+ovarian+cancer+reveals+CD20,+FoxP3+and+TIA-1+as+positive+prognostic+factors.">Systematic analysis of immune infiltrates in high-grade serous ovarian cancer reveals CD20, FoxP3 and TIA-1 as positive prognostic factors.</a> , (2009).</li></ol>

La chirurgie et les injections orthotopique D&#39;injection orthotopique à Bursa ovaire exigences de formation et de précision. Ainsi <ol><li> En cas de mauvaise expérience, la pratique chirurgicale avec des cadavres d&#39;abord. </li><li> Utilisez de préférence des femelles multipares (une ou deux portées) car ils développent plus ovaires au cours du temps ce qui facilite l&#39;injection et d&#39;augmenter la survie à comparer avec des femelles nullipares. </li><li> En raison de l...

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		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
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		<tbody>
		
<tr>
<td>DMEM-GLUTAMAX</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>10564-011</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>PBS</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Gibco</td>
<td>14040</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Versene</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Lonza</td>
<td>17-711E</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Heating pad</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Deltaphase</td>
<td>39 DP</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Povidone pads</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Dynarex</td>
<td>1108</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Alcohol pads</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fisher</td>
<td>06-669-62</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Artificial tears ointment </td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Phoenix Pharma., Inc.</td>
<td>17845-153</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Ketoprofen</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fort Dodge laboratories</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>3cc/insulin syringe</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>BD</td>
<td>309301</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Polyg Polyglycolic Acid suture/needle (3/8 19mm)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Syneture</td>
<td>9612-31</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Tissue adhesive</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Vetbond</td>
<td>3M</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Vet Bactrim/ oral suspension</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Hi-tech Pharmacal</td>
<td>840823</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>IVIS-Lumina</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Caliper lifesciences</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Isofluorane</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Phoenix Pharma., Inc.</td>
<td>J108013</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Fetal Bovine Serum, Qualified</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>10437036</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Penicillin/streptomycin</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Gibco</td>
<td>15140</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>TurboFP635 mammalian vector</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Evrogen</td>
<td>FP721</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>T175 flasks</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>cellstar</td>
<td>660-190</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
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an orthotopic model of serous ovarian cancer in immunocompetent mice for in vivo tumor imaging and monitoring of tumor immune responses

Contexte: Le cancer de l&#39;ovaire est généralement diagnostiqué à un stade avancé où le ratio cas / décès est élevé et reste donc le plus meurtrier de tous les cancers gynécologiques parmi les femmes américaines 1,2,3. Tumeurs séreuses sont les formes les plus répandues de cancer des ovaires et de l&#39;4,5 transgéniques Tg-MISIIR-TAG représente le modèle de souris seulement que se développe spontanément ce type de tumeurs. Tg-MISIIR-Tag souris expriment SV40 région transformer sous le contrôle des substances inhibitrices de Müller récepteur de type II (MISIIR) 6 promoteur du gène. D&#39;autres lignées transgéniques ont été identifiés qui expriment le transgène TAg SV40, mais ne développent pas de tumeurs de l&#39;ovaire. Non-tumorale souris sujettes présentent durée de vie typique des souris C57Bl / 6 et sont fertiles. Ces souris peuvent être utilisés comme receveurs d&#39;une allogreffe de cellules tumorales syngéniques isolée de Tg-MISIIR-Tag-DR26 souris. Objectif: Bien que l&#39;imagerie des tumeurs est possible 7, la détection précoce des tumeurs profondes est difficile chez les animaux vivants de petite taille. Afin de permettre des études précliniques dans un modèle animal immunologiquement intacte pour le cancer ovarien séreux, nous décrivons un modèle de souris syngéniques pour ce type de cancer de l&#39;ovaire qui permet l&#39;imagerie in vivo, les études sur le microenvironnement de la tumeur et une tumeur des réponses immunitaires. Méthodes: Nous avons d&#39;abord tiré une TAG + lignée cellulaire de souris cancéreuses (MOV1) à partir d&#39;une tumeur ovarienne spontanée récoltées dans un 26 semaines, âgé DR26-Tg MISIIR-Tag femelle. Ensuite, nous stablement transduites MOV1 cellules avec TurboFP635 vecteur lentiviral mammifères qui encode Katushka, un mutant rouge lointain de la protéine fluorescente rouge de l&#39;anémone de mer quadricolor Entacmaea avec excitation / émission maxima à 588/635 nm 8,9,10. Nous orthotopique implanté MOV1 Kat dans l&#39;ovaire 11,12,13,14 de non-tumorale sujettes Tg-MISIIR-Tag souris femelles. Progression de la tumeur a été suivie par l&#39;imagerie optique in vivo et microenvironnement de la tumeur a été analysée par immunohistochimie. Résultats: orthotopique implanté MOV1 cellules Kat ont développé des tumeurs de l&#39;ovaire séreux. MOV1 tumeurs Kat pourrait être visualisé par l&#39;imagerie in vivo jusqu&#39;à trois semaines après l&#39;implantation (fig. 1) et ont été infiltrées par les leucocytes, comme observé dans les cancers de l&#39;ovaire humain 15 (fig. 2). Conclusion: Nous décrivons un modèle orthotopique de cancer ovarien adapté à l&#39;imagerie in vivo de tumeurs au début en raison de la haute pH-stabilité et photostabilité de Katushka dans les tissus profonds. Nous proposons l&#39;utilisation de ce nouveau modèle syngénique de cancer ovarien séreux dans les études d&#39;imagerie in vivo et le suivi des réponses immunitaires des tumeurs et d&#39;immunothérapies.

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An Orthotopic Model of Serous Ovarian Cancer in Immunocompetent Mice for in vivo Tumor Imaging and Monitoring of Tumor Immune Responses

Pour étudier<em&gt; In vivo</emLa croissance tumorale&gt; et microenvironnement de la tumeur, nous avons utilisé un modèle de souris syngéniques et orthotopique de cancer ovarien chez les animaux immunocompétents. Nous transduites une lignée de cellules de souris de tumeurs (MOV1) avec Katushka protéine fluorescente (MOV1<sup&gt; KAT</sup&gt;) Et ici nous montrent son implantation orthotopique dans l&#39;ovaire et de<em&gt; In vivo</em&gt; Imagerie.

Un modèle orthotopique de cancer ovarien séreux dans des souris immunocompétentes In vivo L&#39;imagerie des tumeurs et le suivi des tumeurs réponses immunitaires

Background: Ovarian cancer is generally diagnosed at an advanced stage where the case/fatality ratio is high and thus remains the most lethal of all ...

Research

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Immunology and Infection

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Malaria and HIV co-infection is a growing health priority. However, most research on malaria or HIV currently focuses on each infection individually. ...

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Caractérisation des Thymus-dépendants et indépendants de Thymus immunoglobuline Isotype réponses chez la souris à l’aide d’Enzyme-linked Immunosorbent Assay

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