Name: an orthotopic model of serous ovarian cancer in immunocompetent mice for in vivo tumor imaging and monitoring of tumor immune responses
Uploaded: 2010-11-28T17:00:00
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Questo lavoro è stato finanziato dalla sovvenzione NIH P01 AI 068730 (SNC, NS), il NIH concedere CA016520 / TAPITMAT (NS), il finanziamento privato da parte della Fondazione Claneil (NS), e il ovarico SPORE concedere FCCC e la University of Pennsylvania ( P50 CA83638) e il Fox Chase Cancer Center core Grant (P30 CA06927) (DCC). Gli autori ringraziano l&#39;ottima assistenza tecnica dello strumento ottico Core / bioluminescenza diretto dal Dr. EJ Delikatny presso la University of Pennsylvania, Anthony Secreto dalle cellule staminali e Core dello xenotrapianto diretto dal Dott. G. Danet-Desnoyers presso la University of Pennsylvania Cancer Centro per la SNC formazione tecnica di iniezione ortotopica e Denada Dangaj presso l&#39;Università della Pennsylvania / OCRC per assistere sulla chirurgia.

1. Colture Cellulari <ol><li> Prima dell&#39;iniezione ortotopico, cultura MOV1 cellule Kat, derivate da tumori DR26, in un pallone T175 fino a quando non sono al 90% confluenti. Prevede di utilizzare 1-5.000.000 cellule per iniezione, che richiede 1 o 2 T175 fiaschi. </li><li> Il giorno della iniezione, raccogliere le cellule e determinare il numero delle cellule utilizzando un emocitometro. </li><li> Una volta che la concentrazione cellulare è stata determinata, agglomerare le cellule per centrifugazione...

<ol>
	<li>Etzioni, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+case+for+early+detection.">The case for early detection.</a> Nat Rev Cancer. 3, 243-252 (2003).</li><li>Sasaroli, D., Coukos, G., Scholler, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Beyond+CA125:+the+coming+of+age+of+ovarian+cancer+biomarkers.+Are+we+there+yet.">Beyond CA125: the coming of age of ovarian cancer biomarkers. Are we there yet.</a> Future Medicine. 3, 275-288 (2009).</li><li>Anderson, G. 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Current Protocols in Pharmacology 45.</a> , 1-36 .</li><li>Milne, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Systematic+analysis+of+immune+infiltrates+in+high-grade+serous+ovarian+cancer+reveals+CD20,+FoxP3+and+TIA-1+as+positive+prognostic+factors.">Systematic analysis of immune infiltrates in high-grade serous ovarian cancer reveals CD20, FoxP3 and TIA-1 as positive prognostic factors.</a> , (2009).</li></ol>

Chirurgia e iniezioni ortotopico Iniezione ortotopico in borsa ovarica esigenze di formazione e di precisione. Così <ol><li> In caso di scarsa esperienza chirurgica, la pratica di cadaveri per primo. </li><li> Usare preferibilmente donne multipare (uno o due cucciolate), come si sviluppano più grandi ovaie nel tempo che facilita l&#39;iniezione e la sopravvivenza aumentano confrontare con le femmine nullipare. </li><li> A causa delle piccole dimensioni della borsa ovarica del mouse, l&#3...

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		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
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		<tbody>
		
<tr>
<td>DMEM-GLUTAMAX</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>10564-011</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>PBS</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Gibco</td>
<td>14040</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Versene</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Lonza</td>
<td>17-711E</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Heating pad</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Deltaphase</td>
<td>39 DP</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Povidone pads</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Dynarex</td>
<td>1108</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Alcohol pads</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fisher</td>
<td>06-669-62</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Artificial tears ointment </td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Phoenix Pharma., Inc.</td>
<td>17845-153</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Ketoprofen</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fort Dodge laboratories</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>3cc/insulin syringe</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>BD</td>
<td>309301</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Polyg Polyglycolic Acid suture/needle (3/8 19mm)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Syneture</td>
<td>9612-31</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Tissue adhesive</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Vetbond</td>
<td>3M</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Vet Bactrim/ oral suspension</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Hi-tech Pharmacal</td>
<td>840823</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>IVIS-Lumina</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Caliper lifesciences</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Isofluorane</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Phoenix Pharma., Inc.</td>
<td>J108013</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Fetal Bovine Serum, Qualified</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>10437036</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Penicillin/streptomycin</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Gibco</td>
<td>15140</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>TurboFP635 mammalian vector</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Evrogen</td>
<td>FP721</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>T175 flasks</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>cellstar</td>
<td>660-190</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

an orthotopic model of serous ovarian cancer in immunocompetent mice for in vivo tumor imaging and monitoring of tumor immune responses

Background: Il cancro ovarico è generalmente diagnosticato in fase avanzata in cui il caso / rapporto di mortalità è alta e rimane quindi il più letale di tutte le neoplasie ginecologiche tra Stati Uniti le donne 1,2,3. Tumori sierosi sono le forme più diffuse di cancro ovarico e 4,5 il Tg-MISIIR-Tag transgenici rappresenta l&#39;unico modello del mouse che si sviluppa spontaneamente questo tipo di tumori. Tg-MISIIR-Tag topi esprimere SV40 regione trasformando sotto il controllo del Mulleriani inibitori della sostanza di tipo II Receptor (MISIIR) del gene promotore 6. Ulteriori linee transgeniche sono state identificate che esprimono il transgene TAG SV40, ma non sviluppano tumori ovarici. Topi inclini non tumorali mostrano tipica vita per C57BL / 6 topi e sono fertili. Questi topi possono essere utilizzate come riceventi trapianto allogenico di singenici per le cellule tumorali isolate dai Tg-MISIIR-Tag-DR26 topi. Obiettivo: Sebbene l&#39;imaging del tumore è possibile 7, la diagnosi precoce dei tumori in profondità è una sfida in animali che vivono di piccole dimensioni. Per abilitare studi preclinici in un modello animale immunologicamente intatta per il cancro ovarico sieroso, si descrive un modello di topo singenici per questo tipo di tumore ovarico che permette di imaging in vivo, gli studi del microambiente tumorale e tumore risposte immunitarie. Metodi: Per prima cosa deriva a + TAG cancro linea di topi cellule (MOV1) da un tumore ovarico spontanee raccolte in un 26 settimane di età DR26-Tg MISIIR-Tag femminile. Poi, abbiamo MOV1 cellule trasdotte stabilmente con TurboFP635 vettore Lentivirus mammiferi che codifica Katushka, un far-rosso mutante della proteina fluorescente rossa dal mare anemone Entacmaea quadricolor con eccitazione / emissione di massimi a 588/635 nm 8,9,10. Noi ortotopicamente impiantato MOV1 Kat nell&#39;ovaio 11,12,13,14 della non-tumorale inclini Tg-MISIIR-Tag topi femmina. Progressione del tumore è stata seguita da in vivo imaging ottico e microambiente tumorale è stata analizzata mediante immunoistochimica. Risultati: ortotopicamente MOV1 impiantato cellule Kat sviluppato tumori ovarici sierosi. MOV1 Kat tumori possono essere visualizzate da imaging in vivo fino a tre settimane dopo l&#39;impianto (fig. 1) e sono stati infiltrati con leucociti, come osservato nei tumori ovarici umani 15 (fig. 2). Conclusioni: descrivere un modello ortotopico di carcinoma ovarico adatto per imaging in vivo di tumori presto a causa della elevata pH stabilità e fotostabilità di Katushka nei tessuti profondi. Proponiamo l&#39;utilizzo di questo modello romanzo singenici del carcinoma ovarico sieroso per gli studi di imaging in vivo e il monitoraggio dei tumori risposte immunitarie e le immunoterapie.

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An Orthotopic Model of Serous Ovarian Cancer in Immunocompetent Mice for in vivo Tumor Imaging and Monitoring of Tumor Immune Responses

Per studiare<em&gt; In vivo</em&gt; La crescita tumorale e microambiente tumorale, abbiamo utilizzato un modello murino singenici e ortotopico di carcinoma ovarico negli animali immunocompetenti. Noi trasdotte un tumore linea di topi cellule (MOV1) con una proteina fluorescente Katushka (MOV1<sup&gt; KAT</sup&gt;) E qui vi mostriamo il suo impianto ortotopico in ovaio e<em&gt; In vivo</em&gt; Immagini.

Un modello ortotopico di carcinoma ovarico sieroso in topi immunocompetenti per In vivo Tumore Imaging e monitoraggio del tumore Risposte immunitarie

Background: Ovarian cancer is generally diagnosed at an advanced stage where the case/fatality ratio is high and thus remains the most lethal of all ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

An Orthotopic Model of Serous Ovarian Cancer in Immunocompetent Mice for in vivo Tumor Imaging and Monitoring of Tumor Immune Responses

Murine Model of CD40-activation of B cells

Modello murino di CD40-attivazione delle cellule B

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Un<em&gt; In Vitro</em&gt; Modello per la misurazione Risposte immunitarie Malaria nel contesto della coinfezione da HIV

Malaria and HIV co-infection is a growing health priority. However, most research on malaria or HIV currently focuses on each infection individually. ...

Molecular Diffusion in Plasma Membranes of Primary Lymphocytes Measured by Fluorescence Correlation Spectroscopy

Diffusione molecolare nel plasma membrane dei linfociti primari misurati da Fluorescence Correlation Spectroscopy

Fluorescence correlation spectroscopy (FCS) is a powerful technique for studying the diffusion of molecules within biological membranes with high spatial ...

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Un modello di topo transgenizzato IL-8 per il<em&gt; In Vivo</em&gt; Monitoraggio a lungo termine delle risposte infiammatorie

Airway inflammation is often associated with bacterial infections and represents a major determinant of lung disease. The in vivo determination of the ...

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Visualizing intracellulare rullante traffico da fluorescenza Lifetime Imaging microscopia

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Caratterizzazione delle risposte di isotipo dell'immunoglobulina timo-dipendenti e indipendenti del timo in topi usando l'analisi enzima-collegata dell'immunosorbente

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Sartoria in vivo saggi di citotossicità per studiare l'Immunodominanza nelle risposte delle cellule CD8+ T specifiche del tumore

Carboxyfluorescein succinimidyl ester (CFSE)-based in vivo cytotoxicity assays enable sensitive and accurate quantitation of CD8+ cytolytic T lymphocyte ...

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Impianto e monitoraggio da PET/CT di un modello ortotopico di mesotelioma pliologico umano in topi atimici

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