Name: an orthotopic model of serous ovarian cancer in immunocompetent mice for in vivo tumor imaging and monitoring of tumor immune responses
Uploaded: 2010-11-28T17:00:00
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이 작품은 NIH 부여 P01 AI 068,730 (SNC, NS), NIH 부여 CA016520 / TAPITMAT (NS), Claneil 재단 (NS)에서 민간 자금 및 FCCC 및 펜실베니아 대학에 난소 포자 부여 (지원했습니다 P50 CA83638)와 폭스 체이스 암 센터 코어 그랜트 (P30 CA06927) (DCC). 저자는 펜실베니아 암 대학에서 박사 G. Danet - 데스노여스 감독 줄기 세포 및 이종 이식 코어에서 펜실베니아, 안토니 Secreto 대학에서 박사 EJ Delikatny 감독 광 / Bioluminescence 핵심 시설의 우수 기술 지원을 감사합니다 수술에 도움을 위해 펜실베니아 / OCRC 대학에서 orthotopic 분사 기술과 Denada Dangaj에 훈련 SNC 센터.

1. 세포 배양 <ol><li> orthotopic 사출, 문화 T175 플라스크에 DR26 종양에서 파생된 MOV1 캣 세포는, 그들의 90 %까지 합류하기 전에. 1 또는 2 T175 flasks 필요합니다 주입 당 1-5000000 세포를 이용할 계획입니다. </li><li> 주사 당일, 세포를 수확하고 hemocytometer를 사용하여 휴대폰 번호를 확인합니다. </li><li> 일단 세포 농도는 실온에서 300 X g에서 5 분간 원심 분리하여 세포 펠릿, 결정되었습니다. </li><li>...

<ol>
	<li>Etzioni, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+case+for+early+detection.">The case for early detection.</a> Nat Rev Cancer. 3, 243-252 (2003).</li><li>Sasaroli, D., Coukos, G., Scholler, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Beyond+CA125:+the+coming+of+age+of+ovarian+cancer+biomarkers.+Are+we+there+yet.">Beyond CA125: the coming of age of ovarian cancer biomarkers. Are we there yet.</a> Future Medicine. 3, 275-288 (2009).</li><li>Anderson, G. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessing+Lead+Time+of+Selected+Ovarian+Cancer+Biomarkers:+A+Nested+Case+Control+Study.">Assessing Lead Time of Selected Ovarian Cancer Biomarkers: A Nested Case Control Study.</a> J Natl Cancer Inst. 102, 26-38 (2010).</li><li>Auersperg, N., Wong, A. S., Choi, K. C., Kang, S. K., Leung, P. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ovarian+surface+epithelium:+biology,+endocrinology,+and+pathology.">Ovarian surface epithelium: biology, endocrinology, and pathology.</a> Endocr Rev 22. , 255-288 (2001).</li><li>Dubeau, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+cell+of+origin+of+ovarian+epithelial+tumours.">The cell of origin of ovarian epithelial tumours.</a> Lancet Oncol. 9, 1191-1197 (2008).</li><li>Connolly, D. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Female+mice+chimeric+for+expression+of+the+simian+virus+40+TAg+under+control+of+the+MISIIR+promoter+develop+epithelial+ovarian+cancer.">Female mice chimeric for expression of the simian virus 40 TAg under control of the MISIIR promoter develop epithelial ovarian cancer.</a> Cancer Res. 63, 1389-1397 (2003).</li><li>Hensley, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Magnetic+resonance+imaging+for+detection+and+determination+of+tumor+volume+in+a+genetically+engineered+mouse+model+of+ovarian+cancer.">Magnetic resonance imaging for detection and determination of tumor volume in a genetically engineered mouse model of ovarian cancer.</a> Cancer Biol Ther. 6, (2007).</li><li>Deliolanis, N. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Performance+of+the+red-shifted+fluorescent+proteins+in+deep-tissue+molecular+imaging+applications.">Performance of the red-shifted fluorescent proteins in deep-tissue molecular imaging applications.</a> J Biomed Opt. 13, (2008).</li><li>Hoffman, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+better+fluorescent+protein+for+whole-body+imaging.">A better fluorescent protein for whole-body imaging.</a> Trends Biotechnol. 26, (2008).</li><li>Shcherbo, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=far-red+fluorescent+protein+for+whole-body+imaging.">far-red fluorescent protein for whole-body imaging.</a> Nat Methods. 4, 741-746 (2007).</li><li>Fu, X., Hoffman, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+ovarian+carcinoma+metastatic+models+constructed+in+nude+mice+by+orthotopic+transplantation+of+histologically-intact+patient+specimens.">Human ovarian carcinoma metastatic models constructed in nude mice by orthotopic transplantation of histologically-intact patient specimens.</a> Anticancer Res. 13, 283-286 (1993).</li><li>Kiguchi, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+patient-like+orthotopic+implantation+nude+mouse+model+of+highly+metastatic+human+ovarian+cancer.">A patient-like orthotopic implantation nude mouse model of highly metastatic human ovarian cancer.</a> Clinical &amp; experimental metastasis 16. , 751-756 (1998).</li><li>Bao, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activation+of+cancer-specific+gene+expression+by+the+survivin+promoter.">Activation of cancer-specific gene expression by the survivin promoter.</a> J Natl Cancer Inst. 94, 522-528 (2002).</li><li>Connolly, D. C., Hensley, H. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Xenograft+and+Transgenic+Mouse+Models+of+Epithelial+Ovarian+Cancer+and+Non+Invasive+Imaging+Modalities+to+Monitor+Ovarian+Tumor+Growth+In+situ+-Applications+in+Evaluating+Novel+Therapeutic+Agents.+Current+Protocols+in+Pharmacology+45.">Xenograft and Transgenic Mouse Models of Epithelial Ovarian Cancer and Non Invasive Imaging Modalities to Monitor Ovarian Tumor Growth In situ -Applications in Evaluating Novel Therapeutic Agents. Current Protocols in Pharmacology 45.</a> , 1-36 .</li><li>Milne, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Systematic+analysis+of+immune+infiltrates+in+high-grade+serous+ovarian+cancer+reveals+CD20,+FoxP3+and+TIA-1+as+positive+prognostic+factors.">Systematic analysis of immune infiltrates in high-grade serous ovarian cancer reveals CD20, FoxP3 and TIA-1 as positive prognostic factors.</a> , (2009).</li></ol>

수술과 주사 Orthotopic 난소 부르사에서 Orthotopic 주입은 교육 및 정밀도를 요구합니다. 그러므로 <ol><li> 첫번째 시신과 함께 가난한 수술 경험, 연습의 경우. </li><li> 그들이 nulliparous 여성과 비교 주입 및 증가 생존을 용이하게 시간이 지남에 따라 더 큰 난소 개발에 우선적으로 multiparous 암컷을 (하나 또는 두 개의 새끼)를 사용합니다. </li><li> 마우스 난소 부르사의 작은 크기?...

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		<div>
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		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>DMEM-GLUTAMAX</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>10564-011</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>PBS</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Gibco</td>
<td>14040</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Versene</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Lonza</td>
<td>17-711E</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Heating pad</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Deltaphase</td>
<td>39 DP</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Povidone pads</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Dynarex</td>
<td>1108</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Alcohol pads</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fisher</td>
<td>06-669-62</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Artificial tears ointment </td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Phoenix Pharma., Inc.</td>
<td>17845-153</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Ketoprofen</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fort Dodge laboratories</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>3cc/insulin syringe</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>BD</td>
<td>309301</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Polyg Polyglycolic Acid suture/needle (3/8 19mm)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Syneture</td>
<td>9612-31</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Tissue adhesive</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Vetbond</td>
<td>3M</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Vet Bactrim/ oral suspension</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Hi-tech Pharmacal</td>
<td>840823</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>IVIS-Lumina</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Caliper lifesciences</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Isofluorane</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Phoenix Pharma., Inc.</td>
<td>J108013</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Fetal Bovine Serum, Qualified</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>10437036</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Penicillin/streptomycin</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Gibco</td>
<td>15140</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>TurboFP635 mammalian vector</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Evrogen</td>
<td>FP721</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>T175 flasks</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>cellstar</td>
<td>660-190</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

an orthotopic model of serous ovarian cancer in immunocompetent mice for in vivo tumor imaging and monitoring of tumor immune responses

배경 : 난소암은 일반적으로 케이스 / 사망자 비율이 높은 고급 단계에서 진단하기 때문에 미국 여성들 사이 1,2,3 모든 gynecologic malignancies의 가장 치명적인 유적이다. 장액의 종양은 난소암의 가장 광범위한 형태이며, 4,5 TG - MISIIR 태그 유전자 변형은 저절로 종양의 유형을 개발하는 유일한 마우스 모델을 나타냅니다. Mullerian 억제 물질 유형 II 수용체 (MISIIR) 유전자 프로 모터 6 제어하에 TG - MISIIR 태그 마우스 표현 SV40 변환 영역. 추가 형질 라인은 그 표현 SV40 태그 transgene을 확인하고 있지만, 난소 종양을 개발하지 않습니다. 비 - 종양 발생하기 쉬운 쥐들이 C57Bl / 6 마​​우스에 대한 일반적인 수명을 전시하고 비옥한 있습니다. 이 생쥐는 TG - MISIIR 태그 - DR26 생쥐에서 분리된 종양 세포에 대한 syngeneic allograft받는 사람으로 사용할 수 있습니다. 목표 : 종양 이미징 7 가능하지만, 깊은 종양의 조기 발견은 작은 생활 동물에 도전합니다. 장액의 난소암에 대한 immunologically 손상 동물 모델의 잠복기 연구를 활성화하기 위해, 우리는 생체내 이미징, 종양 microenvironment 및 종양 면역 반응의 연구에 허가 난소암의 유형에 대한 syngeneic 마우스 모델을 설명합니다. 방법 : 우리는 먼저 26주 된 DR26 TG - MISIIR 태그의 여성에 수확 자연 난소 종양에서 태그 + 마우스 암 세포주 (MOV1)을 파생. 그렇다면, 우리는 안정 Katushka을 인코딩 TurboFP635 Lentivirus 포유 동물 벡터, 여기 / 635분의 588 nm의 8,9,10에서 방출 맥시멈와 말미잘 Entacmaea quadricolor에서 적색 형광 단백질의 멀리 붉은 돌연변와 MOV1 세포 transduced. 우리는 orthotopically 아닌 종양이 발생하기 쉬운 TG - MISIIR 태그 여성 생쥐의 난소 11,12,13,14에서 MOV1 언니를 심었을 거예요. 종양 진행은 생체내 광학 이미징 및 종양의 microenvironment에 immunohistochemistry에 의해 분석되었다 다음되었다. 결과 : Orthotopically MOV1 캣 세포를 이식은 묽은 난소 종양을 개발했습니다. MOV1 캣 종양은 인간의 난소 암 15 (그림 2)에서 관찰, 최대 주입 후 3 주 (그림 1) 생체내 이미징에 의해 시각 될 수 있으며, leukocytes로 가득 차 있었다. 결론 : 우리는 깊은 조직의 산도 안정 높이 Katushka의 photostability에 의한 초기 종양의 생체내 이미징에 적합한 난소암의 orthotopic 모델을 설명합니다. 우리는 종양 면역 반응과 immunotherapies의 생체내 이미징 연구 및 모니터링을위한 장액의 난소암이 소설 syngeneic 모델의 사용을 제안합니다.

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An Orthotopic Model of Serous Ovarian Cancer in Immunocompetent Mice for in vivo Tumor Imaging and Monitoring of Tumor Immune Responses

공부하기<em&gt; 생체내에</em&gt; 종양의 성장과 종양의 microenvironment, 우리는 면역 적격 동물 난소암의 syngeneic 및 orthotopic 마우스 모델을 사용합니다. 우리는 Katushka 형광 단백질 (MOV1와 마우스 종양 세포 라인 (MOV1)를 transduced<sup&gt; KAT</sup&gt;)와 우리가 난소 년에 orthotopic 주입을 표시하고<em&gt; 생체내에</em&gt; 이미지.

에 대한 면역 적격 마우스에 묽은 난소암의 Orthotopic 모델 생체내에</em종양 면역 응답> 종양 이미징 및 모니터링

Background: Ovarian cancer is generally diagnosed at an advanced stage where the case/fatality ratio is high and thus remains the most lethal of all ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

An Orthotopic Model of Serous Ovarian Cancer in Immunocompetent Mice for in vivo Tumor Imaging and Monitoring of Tumor Immune Responses

Murine Model of CD40-activation of B cells

B 세포의 CD40 - 정품 인증 Murine 모델

Research on B cells has shown that CD40 activation improves their antigen presentation capacity. When stimulated with interleukin-4 and CD40 ligand ...

연구

면역학 및 감염병학

An In Vitro Model for Measuring Immune Responses to Malaria in the Context of HIV Co-infection

An In Vitro Model for Measuring Immune Responses to Malaria in the Context of HIV Co-infection

<em&gt; 체외</em&gt; HIV 공동 감염의 맥락에서 말라리아에 면역 반응을 측정하기위한 모델

Malaria and HIV co-infection is a growing health priority. However, most research on malaria or HIV currently focuses on each infection individually. ...

Molecular Diffusion in Plasma Membranes of Primary Lymphocytes Measured by Fluorescence Correlation Spectroscopy

형광 상관 분광학에 의해 측정 된 차 림프구의 플라즈마 막 분자 확산

Fluorescence correlation spectroscopy (FCS) is a powerful technique for studying the diffusion of molecules within biological membranes with high spatial ...

An IL-8 Transiently Transgenized Mouse Model for the In Vivo Long-term Monitoring of Inflammatory Responses

An IL-8 Transiently Transgenized Mouse Model for the In Vivo Long-term Monitoring of Inflammatory Responses

IL-8 transiently Transgenized 마우스 모델<em&gt; In Vivo</em&gt; 염증 반응의 장기 모니터링

Airway inflammation is often associated with bacterial infections and represents a major determinant of lung disease. The in vivo determination of the ...

Isolation of Salmonella typhimurium-containing Phagosomes from Macrophages

Isolation of Salmonella typhimurium-containing Phagosomes from Macrophages

살 모 넬 라 typhimurium의 절연-대 식 세포에서 Phagosomes를 포함 하

Salmonella typhimurium is a facultative intracellular bacterium that causes gastroenteritis in humans. After invasion of the lamina propria, S. ...

Visualizing Intracellular SNARE Trafficking by Fluorescence Lifetime Imaging Microscopy

Soluble N-ethylmaleimide sensitive fusion protein (NSF) attachment protein receptor (SNARE) proteins are key for membrane trafficking, as they catalyze ...

Characterization of Thymus-dependent and Thymus-independent Immunoglobulin Isotype Responses in Mice Using Enzyme-linked Immunosorbent Assay

Thymus 종속 및 독립 Thymus 면역 글로불린 Isotype 반응 효소 연결 된 Immunosorbent 분석 결과 사용 하 여 마우스의 특성

Antibodies, also termed as immunoglobulins (Ig), secreted by differentiated B lymphocytes, plasmablasts/plasma cells, in humoral immunity provide a ...

Tailoring In Vivo Cytotoxicity Assays to Study Immunodominance in Tumor-specific CD8+ T Cell Responses

Tailoring In Vivo Cytotoxicity Assays to Study Immunodominance in Tumor-specific CD8+ T Cell Responses

종양 특이 CD8+ T 세포 반응에서 면역 우세를 연구 하기 위한 생체 내 세포 독성 분석 법

Carboxyfluorescein succinimidyl ester (CFSE)-based in vivo cytotoxicity assays enable sensitive and accurate quantitation of CD8+ cytolytic T lymphocyte ...

Implantation and Monitoring by PET/CT of an Orthotopic Model of Human Pleural Mesothelioma in Athymic Mice

심질 마우스에 있는 인간 흉막 중피종의 정형외 모형의 PET/CT에 의한 이식 및 모니터링

Malignant pleural mesothelioma (MPM) is a rare and aggressive tumor arising in the mesothelium that covers the lungs, the heart, and the thoracic cavity. ...

Visualization, Quantification, and Mapping of Immune Cell Populations in the Tumor Microenvironment

종양 미세 환경에서 면역 세포 집단의 시각화, 정량화 및 매핑

The immune landscape of the tumor microenvironment (TME) is a determining factor in cancer progression and response to therapy. Specifically, the density ...

에 대한 면역 적격 마우스에 묽은 난소암의 Orthotopic 모델 생체내에 종양 이미징 및 모니터링