Name: transnuclear mice with pre-defined t cell receptor specificities against toxoplasma gondii obtained via scnt
Uploaded: 2010-09-30T17:00:00
Duration: 13 min 36 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Transnuclear Mice with Pre-defined T Cell Receptor Specificities Against Toxoplasma gondii Obtained Via SCNT at JoVE.com

लेखकों, एम. एच. Eisen Gubbels, लालकृष्ण वैन Grinsven, ई. गुइल्लें, ए ड्रेक, वी. महाजन, अतारांकित गाओ, और उपयोगी विचार - विमर्श और अभिकर्मकों के लिए जी याप आभारी हैं. हम जे Dausman, आर Flannery, और जे जैक्सन के लिए माउस कॉलोनी के प्रबंधन के साथ सहायता के लिए आभारी हैं. हम पी. Wisniewski FACSorting के लिए आभारी हैं. EMF मानव सीमाओं विज्ञान कार्यक्रम के द्वारा समर्थित किया गया. आरजे स्वास्थ्य RO1 HD045022 और R37-CA084198 अनुदान के राष्ट्रीय संस्थान द्वारा समर्थित किया गया. नि: स्वास्थ्य के राष्ट्रीय संस्थान से अनुदान द्वारा समर्थित किया गया.

<ol>
	<li>Schatz, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=V(D)J+recombination.">V(D)J recombination.</a> Immunol. Rev. 200, 5-5 (2004).</li><li>Barnden, M. J., Allison, J., Heath, W. R., Carbone, F. R., R, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Defective+TCR+expression+in+transgenic+mice+constructed+using+cDNA-based+alpha-+and+beta-chain+genes+under+the+control+of+heterologous+regulatory+elements.">Defective TCR expression in transgenic mice constructed using cDNA-based alpha- and beta-chain genes under the control of heterologous regulatory elements.</a> Immunol. Cell Biol. 76, 34-34 (1998).</li><li>Eggan, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hybrid+vigor,+fetal+overgrowth,+and+viability+of+mice+derived+by+nuclear+cloning+and+tetraploid+embryo+complementation.">Hybrid vigor, fetal overgrowth, and viability of mice derived by nuclear cloning and tetraploid embryo complementation.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 98, 6209-6209 (2001).</li><li>Kishigami, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Significant+improvement+of+mouse+cloning+technique+by+treatment+with+trichostatin+A+after+somatic+nuclear+transfer.">Significant improvement of mouse cloning technique by treatment with trichostatin A after somatic nuclear transfer.</a> Biochem Biophys Res Commun. 340, 183-183 (2006).</li><li>Wakayama, T., Yanagimachi, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+cloning+with+nucleus+donor+cells+of+different+age+and+type.">Mouse cloning with nucleus donor cells of different age and type.</a> Mol Reprod Dev. 58, 376-376 (2001).</li></ol>

एक पेटेंट दायर किया गया है.

हम यहाँ से पता चला है कि SCNT पूर्व निर्धारित विशिष्टता के साथ टी कोशिकाओं से transnuclear चूहों उत्पन्न करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है. हालांकि यहाँ दिखाया नहीं, तकनीक भी पूर्व निर्धारित विशिष्टता के साथ बी कोशिकाओं से transnuclear चूहों को उत्पन्न करने के लिए प्रयोग करने योग्य होना चाहिए. एक महत्वपूर्ण बात पर विचार तनाव और माउस के लिंग, जो संक्रमित है या प्रतिरक्षित और टी या ब्याज की बी कोशिकाओं को अलग किया जाता है. चूंकि टी और बी कोशिकाओं सामान्य में एक बहुत ही कम reprogramming दक्षता है, हम वांछित haplotype F1 संकर का उपयोग करने की सलाह देते हैं. क्योंकि दाता सेल भी सेक्स निर्धारित करता है, हम टी या नर चूहों से बी कोशिकाओं का उपयोग करने की सलाह देते हैं. इसका मतलब यह है कि केवल पुरुष chimeric चूहों पुरुष प्रजनन के लिए आसान और तेजी से किया जा रहा है चूहों के साथ germline के माध्यम से TCR या BCR संचारित होता है. साथ में ले ली है, हमें लगता है कि SCNT के माध्यम से कि epigenetic reprogramming एक उपन्यास माउस मॉडल के प्रकार, जो प्रतिरक्षाविज्ञानी क्षेत्र के लिए महान लाभ में से एक होगा उत्पन्न करने के लिए एक शक्तिशाली उपकरण का प्रतिनिधित्व करता है.

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		<div>
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		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Red Blood Cell lysis Buffer</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>R7757</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Cell strainer</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>BD Falcon</td>
<td>REF 352340</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Pregnant Mare Serum (PMS)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Calbiochem</td>
<td>367222</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Human Chorionic Gonadotropin (HCG)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Calbiochem</td>
<td>230734</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Hyaluronidase</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>H4272</td>
<td>Type IV-S</td>
</tr>
<tr>
<td>KSOM-AA</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Millipore</td>
<td>MR-106-D</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>HCZB</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Millipore</td>
<td>MR-173-D</td>
<td>Customized medium</td>
</tr>
<tr>
<td>Ca-free medium for activation</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Millipore</td>
<td>MR-174-D</td>
<td>Customized medium</td>
</tr>
<tr>
<td>SrCl2</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>255521</td>
<td>100mM = 10x</td>
</tr>
<tr>
<td>AlbuMAX I</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Gibco</td>
<td>11020-021</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>PVP</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>MP Biotech</td>
<td>102787</td>
<td>Make 10% solution using HCZB, and add 0.1% AlbuMAX I</td>
</tr>
<tr>
<td>Cytochalasin B</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>C6762</td>
<td>500&mu;g/ml = 100x</td>
</tr>
<tr>
<td>Trichostatin A</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>T8552</td>
<td>5mM = 1000x</td>
</tr>
<tr>
<td>Mineral Oil</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>M5310</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Holding needle</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Humagen</td>
<td>MPH-SM-30</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Injection and transfer needles</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Humagen</td>
<td>4-15, 7-15, 15-15</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Mouth pipette</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>A5177</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Scissors</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fine Science Instruments</td>
<td>14088-10</td>
<td>or something similar</td>
</tr>
<tr>
<td>Forceps</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fine Science Instruments</td>
<td>11251-10</td>
<td>or something similar</td>
</tr>
<tr>
<td>Wound Clip Applicator</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>BD</td>
<td>427630</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Wound Clips</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>BD</td>
<td>427630</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Suture</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Ethicon</td>
<td>K871H</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>DMEM</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>D6429</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>FBS</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Hyclone</td>
<td>SH30071.03</td>
<td>15%</td>
</tr>
<tr>
<td>Penicillin/Streptomycin</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Lonza</td>
<td>17-602E</td>
<td>100x</td>
</tr>
<tr>
<td>Glutamin</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>MP Biomedicals</td>
<td>101806</td>
<td>200mM = 100x</td>
</tr>
<tr>
<td>Non-essential Aminoacids</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Gibco</td>
<td>11140050</td>
<td>100x</td>
</tr>
<tr>
<td>&beta;-Mercaptoethanol</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Gibco</td>
<td>21985-023</td>
<td>5&mu;l in 500ml</td>
</tr>
<tr>
<td>LIF</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Millipore</td>
<td>ESG1106</td>
<td>1000x</td>
</tr>
<tr>
<td>MEK inhibitor</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Cell Signaling</td>
<td>9900L</td>
<td>For ES derivation only, add to ES medium (final concentration 50&mu;M)</td>
</tr>		</tbody>
		</table>
		</div>

transnuclear mice with pre-defined t cell receptor specificities against toxoplasma gondii obtained via scnt

टी कोशिकाओं जैसे लिम्फोसाइटों, आनुवंशिक वी (डी) जम्मू पुनर्संयोजन गुजरना है, एक निश्चित एक विशिष्टता के साथ एक रिसेप्टर उत्पन्न. के लिए ट्रांसजेनिक चूहों एक पुनर्व्यवस्थित प्रतिजन विशेष टी सेल रिसेप्टर (TCR) टी सेल विकास और समारोह का अध्ययन करने के लिए एक अनिवार्य उपकरण हो गया है. हालांकि, ऐसे TCRs आमतौर पर अक्सर दोहराया प्रतिजन उत्तेजना, जो unavoidably उच्च आत्मीयता के साथ टी कोशिकाओं के लिए चयन के बाद लंबी अवधि संस्कृति के बाद प्रासंगिक टी कोशिकाओं से अलग हैं. यादृच्छिक TCR के जीनोमिक एकीकरण α और β श्रृंखला और गैर - अंतर्जात प्रमोटरों से अभिव्यक्ति अभिव्यक्ति के स्तर और कैनेटीक्स में बदलाव के लिए नेतृत्व कर सकते हैं. दैहिक सेल परमाणु हस्तांतरण के माध्यम से epigenetic reprogramming के लिए ब्याज की किसी भी कोशिका से भ्रूणीय स्टेम कोशिकाओं और चूहों उत्पन्न उपकरण प्रदान करता है. नतीजतन, जब SCNT ज्ञात विशिष्टता की टी कोशिकाओं को लागू किया जाता है, इन आनुवंशिक वी (डी) जम्मू rearrangements SCNT भ्रूण स्टेम कोशिकाओं (ESCs) और उन लोगों से प्राप्त चूहों के लिए स्थानांतरित कर रहे हैं, जबकि epigenetic निशान रीसेट कर रहे हैं. हमने दिखा दिया है कि Toxoplasma gondii के खिलाफ पूर्व निर्धारित specificities के साथ टी कोशिकाओं के लिए माउस मॉडल है कि प्रयोगात्मक शुरू आनुवंशिक संशोधन के बिना उनके अंतर्जात loci से विशिष्ट TCR व्यक्त उत्पन्न करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है. रिश्तेदार आसानी और गति, जो के साथ इस तरह transnuclear मॉडल प्राप्त किया जा सकता है अन्य रोग मॉडल के निर्माण के लिए वादा धारण.

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Transnuclear Mice with Pre-defined T Cell Receptor Specificities Against Toxoplasma gondii Obtained Via SCNT

हम यहाँ दिखाना है कि दैहिक सेल न्यूक्लियर ट्रांसफर (SCNT) के माध्यम से epigenetic reprogramming करने के लिए एक पूर्व निर्धारित टी सेल (TCR) रिसेप्टर specificities के साथ माउस मॉडल उत्पन्न उपकरण के रूप में इस्तेमाल किया जा सकता है. ये transnuclear चूहों अंतर्जात प्रमोटर के नियंत्रण के अधीन उनके अंतर्जात बिन्दुपथ से इसी TCR व्यक्त करते हैं.

Transnuclear चूहे के खिलाफ पूर्व परिभाषित टी सेल रिसेप्टर specificities के साथ Toxoplasma gondii SCNT के माध्यम से प्राप्त

Lymphocytes, such as T cells, undergo genetic V(D)J recombination, to generate a receptor with a certain specificity1. Mice transgenic for a rearranged ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Transnuclear Mice with Pre-defined T Cell Receptor Specificities Against Toxoplasma gondii Obtained Via SCNT

Obtaining Highly Purified Toxoplasma gondii Oocysts by a Discontinuous Cesium Chloride Gradient

Obtaining Highly Purified Toxoplasma gondii Oocysts by a Discontinuous Cesium Chloride Gradient

उच्च शुद्ध प्राप्त Toxoplasma gondii एक असंतत सीज़ियम क्लोराइड ढाल द्वारा Oocysts

Toxoplasma gondii is an obligate intracellular protozoan pathogen that commonly infects humans. It is a well characterized apicomplexan associated with ...

Toxoplasma gondii Cyst Wall Formation in Activated Bone Marrow-derived Macrophages and Bradyzoite Conditions

Toxoplasma gondii Cyst Wall Formation in Activated Bone Marrow-derived Macrophages and Bradyzoite Conditions

सक्रिय अस्थि मज्जा व्युत्पन्न मैक्रोफेज और Bradyzoite स्थितियां में Toxoplasma gondii पुटी दीवार संरचना

Toxoplasma gondii is an obligate intracellular parasite that can invade any nucleated cell of warm-blooded animals. During infection, T. gondii ...

Derivation of Thymic Lymphoma T-cell Lines from Atm-/- and p53-/- Mice

Derivation of Thymic Lymphoma T-cell Lines from Atm-/- and p53-/- Mice

Thymic लिंफोमा से टी सेल लाइन्स की व्युत्पत्ति एटीएम<sup-> / -</sup और P53<sup-> / -</sup चूहे

Established cell lines are a critical research tool that can reduce the use of laboratory animals in research. Certain strains of genetically modified ...

A Genetic Screen to Isolate Toxoplasma gondii Host-cell Egress Mutants

A Genetic Screen to Isolate Toxoplasma gondii Host-cell Egress Mutants

एक जेनेटिक पृथक करने के लिए स्क्रीन Toxoplasma gondii मेजबान सेल निकास म्यूटेंट

The widespread, obligate intracellular, protozoan parasite Toxoplasma gondii causes opportunistic disease in immuno-compromised patients and causes birth ...

Genetic Manipulation in &Delta;ku80 Strains for Functional Genomic Analysis of Toxoplasma gondii

Genetic Manipulation in ÃƒÅ½Ã¢â‚¬Âku80 Strains for Functional Genomic Analysis of Toxoplasma gondii

में आनुवंशिक हेरफेर<em&gt; Δku80</emके कार्यात्मक जीनोमिक विश्लेषण के लिए&gt; खींच<em&gt; Toxoplasma gondii</em

Targeted genetic manipulation using homologous recombination is the method of choice for functional genomic analysis to obtain a detailed view of gene ...

Forward Genetics Screens Using Macrophages to Identify Toxoplasma gondii Genes Important for Resistance to IFN-&#947;-Dependent Cell Autonomous Immunity

Forward Genetics Screens Using Macrophages to Identify Toxoplasma gondii Genes Important for Resistance to IFN-ÃƒÅ½Ã‚Â³-Dependent Cell Autonomous Immunity

फॉरवर्ड जेनेटिक्स पहचानें मैक्रोफेज का प्रयोग स्क्रीन<em&gt; Toxoplasma gondii</em&gt; जीन महत्वपूर्ण प्रतिरोध करने के लिए IFN-γ-निर्भर सेल स्वायत्त प्रतिरक्षण

Toxoplasma gondii, the causative agent of toxoplasmosis, is an obligate intracellular protozoan pathogen. The parasite invades and replicates within ...

Retroviral Transduction of Bone Marrow Progenitor Cells to Generate T-cell Receptor Retrogenic Mice

अस्थि मज्जा पूर्वपुस्र्ष कोशिकाओं का रेट्रोवायरल transduction टी सेल रिसेप्टर Retrogenic चूहे उत्पन्न करने के लिए

T cell receptor (TCR) signaling is essential in the development and differentiation of T cells in the thymus and periphery, respectively.  The vast array ...

Development of Stem Cell-derived Antigen-specific Regulatory T Cells Against Autoimmunity

स्व-प्रतिरक्षात्मकता खिलाफ स्टेम सेल व्युत्पन्न विशिष्ट प्रतिजन विनियामक टी कोशिकाओं के विकास

Autoimmune diseases arise due to the loss of immunological self-tolerance. Regulatory T cells (Tregs) are important mediators of immunologic ...

Identification of Mediators of T-cell Receptor Signaling via the Screening of Chemical Inhibitor Libraries

Identification of Mediators of T-cell Receptor Signaling via the Screening of Chemical Inhibitor Libraries

रासायनिक अवरोधक पुस्तकालयों की स्क्रीनिंग के माध्यम से टी सेल रिसेप्टर संकेतन के मध्यस्थों की पहचान

The T-cell receptor (TCR) signaling pathway comprises a multitude of mediators that transmit signals upon the activation of the TCR. Different strategies ...

Single-cell Screening Method for the Selection and Recovery of Antibodies with Desired Specificities from Enriched Human Memory B Cell Populations

समृद्ध मानव स्मृति बी सेल आबादी से वांछित विशिष्टताओं के साथ एंटीबॉडी के चयन और वसूली के लिए एकल सेल स्क्रीनिंग विधि

The human antibody repertoire represents a largely untapped source of potential therapeutic antibodies and useful biomarkers. While current computational ...