Name: isolation of stem cells from human pancreatic cancer xenografts
Uploaded: 2010-09-26T17:00:00
Duration: 11 min 44 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Isolation of Stem Cells from Human Pancreatic Cancer Xenografts at JoVE.com

Dit werk werd ondersteund door subsidies van de National Institutes of Health (CA127574, CA107040 en CA09071) op WM

1. Oogst xenotransplantaten van Muizen <ol><li> Bereid de cel dissociatie buffer: Dulbecco&#39;s gemodificeerd Eagle medium (DMEM) aangevuld met 10% foetaal kalf serum (FCS), penicilline-streptomycine, 200 U / mL Collagenase type IV, en 0,6 U / mL dispase. </li><li> Een athymische (nu + / nu +) muis drager zijn van een subcutane humane alvleesklierkanker xenotransplantaatmodellen dat is minder dan 1 cm in grootste diameter is geëuthanaseerd door de kooldioxide stikken en cervicale dislocatie. </li><li> De subcutane tumor wordt geoogst uit de flank van de muis door stompe dissectie behulp van pincet en een schaar en plaatste meteen in de cel dissociatie buffer. </li><li> Tumoren zijn gewogen en terug geplaatst in 10 mL cel dissociatie buffer per 1 gram van de tumor weefsel. </li></ol> 2. Het genereren van een Single-celsuspensie van de xenotransplantaten <ol><li> Werken in een steriele bioveiligheid kabinet, is de tumor overgebracht naar een 100 x 20 mm cultuur schotel met 1 ml cel dissociatie buffer. Tumoren zijn mechanisch gehakt met steriele scheermesjes en tang. De tumor celsuspensie wordt aangewreven door middel van een 5-mL serologische pipet 10 keer. De tumor stukken moet klein genoeg zijn om niet verstoppen de 5-mL serologische pipet. </li><li> De tumor celsuspensie is overgebracht naar een 50-mL conische buis met het resterende volume van de cel dissociatie buffer (gevuld minder dan 50%) en vortex op maximale snelheid gedurende 1 minuut. </li><li> De tumor celsuspensie wordt vervolgens geïncubeerd bij 37 ° C gedurende 2 uur met intermitterende vortexen gedurende 1 minuut om de 20 minuten. </li></ol> 3. Afbrekende celsuspensie van weefselstukjes en dode cellen <ol><li> Na de 2-uur incubatie de celsuspensie is gevortexed op maximale snelheid gedurende 1 minuut. </li><li> De celsuspensie wordt vervolgens door een 70-um filter en opgevangen in een verse 50-mL conische buis en aangepast tot een uiteindelijk volume van 15 ml per buis. </li><li> Verder te scheiden levensvatbare cellen van dode cellen en weefsels puin, is de tumor celsuspensie van elkaar gescheiden door de dichtheid centrifugeren behulp van Ficoll-Paque Plus. Een onderlaag van Ficoll-Paque Plus wordt gemaakt door pipetteren 15 ml Ficoll-Paque Plus langzaam onder de celsuspensie zorg dat u de twee lagen te mengen. </li><li> De celsuspensie en Ficoll lagen is gecentrifugeerd bij 500x g gedurende 30 minuten met de remmen uitgeschakeld. </li><li> Cellen op het grensvlak van de Ficoll-Paque Plus en cel-dissociatie buffer worden verzameld en overgebracht naar een verse 50-mL conische buis. </li><li> Verse DMEM aangevuld met 10% FCS is toegevoegd aan de celsuspensie om het te verdunnen 1:3 (bv. 20 ml vers medium toegevoegd aan 10 ml celsuspensie). </li><li> De cellen worden verzameld door centrifugeren bij 450x g gedurende 10 minuten, gedecanteerd de media, en de cel pellet wordt geresuspendeerd in 1 ml ALDEFLUOR buffer. </li><li> Tien microliter van de celsuspensie wordt verdund met 10 pi trypan blauw en levensvatbare cellen worden geteld met behulp van een hemocytometer. Als een groot aantal dode cellen of weefselstukjes worden geconstateerd tijdens deze stap, dan celscheiding door de dichtheid centrifugeren kan worden herhaald (stappen 3,3 tot 3,7). </li></ol> 4. Vlek Cellen voor Fluorescence Activated Cell Sorting <ol><li> Label zeven 12 x 75 mm polystyreen reageerbuis als volgt: <ol><li> Onbevlekt </li><li> CD44-APC </li><li> CD24-PE </li><li> muis CD31-biotine + muis lijn-biotine + muis H-2Kd-biotine </li><li> ALDEFLUOR </li><li> ALDEFLUOR + DEAB + IgG 2bκ-APC + IgG 2aκ-PE </li><li> ALDEFLUOR + CD44-APC + CD24-PE + muis CD31-biotine + muis lijn-biotine + muis H-2Kd-biotine. </li></ol></li><li> Verdun de celsuspensie in 2 ml ALDEFLUOR buffer tot een uiteindelijke concentratie van 5-10 miljoen cellen / ml en blijf op ijs. Voeg 100 pi van de celsuspensie om buizen # 1, 2, 3 en 4 en houd ze op ijs. Voeg 1 ui DEAB tot buis # 6 en blijf op ijs. Voeg ALDEFLUOR reagens om de resterende celsuspensie verdund 1000 - voudige (bijv. 1,6 pi ALDEFLUOR reagens toe te voegen aan 1,6 ml celsuspensie), goed mengen, en leg ze op ijs. Breng 100 pi van dit mengsel op buizen # 5 en 6, en de resterende mengsel (1,4 ml) van de buis # 7. Incubeer alle van de buizen in een 37 ° C waterbad gedurende 40 minuten. Meng de celsuspensie elke 10 minuten om de cellen te voorkomen dat de afwikkeling aan de onderkant van de buizen. </li><li> Centrifugeer de cellen bij 450x g en 4 ° C gedurende 10 minuten en dan schenk de buffer. Resuspendeer de pellets in buizen # 1 en 5 in 100 ul ALDEFLUOR buffer. De buizen # 2, 3, 4 en 6, voeg 100 ul ALDEFLUOR buffer die de juiste antilichamen verdund als volgt uit: 01:20 voor de IgG 2bΚ-APC, IgG 2aΚ-PE, CD44-APC, en CD24-PEantilichamen; 1:100 voor muis CD31-biotine, muis lijn-biotine, en de muis H-2Kd-biotine antilichamen. Om tube # 7 toe te voegen 1,4 ml ALDEFLUOR buffer met een 1:20 verdunning van CD44-APC, en CD24-PE antilichamen en een 1:100 verdunning van de muis CD31-biotine, muis lijn-biotine, en de muis H-2Kd-biotine antilichamen. Incubeer de celsuspensies op ijs gedurende 10 minuten. </li><li> Centrifugeer de cellen bij 450x g en 4 ° C gedurende 10 minuten en dan schenk de buffer. Resuspendeer de pellets in buizen # 1, 2, 3, 5 en 6 in 100 ul ALDEFLUOR buffer. Bereid 1,5 ml ALDEFLUOR buffer met een 1:100 verdunning van streptavidine-PerCP eiwit. Voeg 100 ui aan buis # 4 en voeg 1,4 mL van de buis # 7. Incubeer de celsuspensies op ijs gedurende 10 minuten. </li><li> Centrifugeer de cellen bij 450x g en 4 ° C gedurende 10 minuten en dan schenk de buffer. Resuspendeer de pellets in buizen # 1, 2, 3, 4, 5 en 6 in 200 pi ALDEFLUOR buffer. Resuspendeer de pellet in buis # 7 in 2,8 ml ALDEFLUOR buffer met 2 ug / ml propidiumjodide. Houden buisjes op ijs te allen tijde. </li><li> Passeren cellen door middel van 35-um filter met behulp van 12 x 75 mm polystyreen reageerbuis met zeef caps. </li></ol> 5. Isoleer kanker stamcellen met behulp van fluorescentie geactiveerde celsortering <ol><li> Een FACSAria flowcytometer is voorbereid voor celsortering. </li><li> Compensatie controles zijn ingesteld met behulp van cellen van buizen # 1, 2, 3, 4 en 5. </li><li> Poorten zijn gemaakt op basis van forward-en zijkant-scatter parameters naar cel singlets te verzamelen. </li><li> Niet-muis (PerCP-negatief) en levensvatbaar is (non-propidiumiodide gekleurde cellen) zijn gated het gebruik van de FL-3-kanaal. </li><li> ALDH + cellen worden verzameld op basis van poorten gemaakt met behulp van DEAB-behandelde cellen (buis # 6) en de FL-1-kanaal. </li><li> CD44 + CD24 + cellen worden verzameld op basis van poorten gemaakt met behulp van cellen gekleurd met ALDEFLUOR, IgG 2bΚ-APC, en IgG 2aκ-PE (buis # 6) het gebruik van de FL-4 en FL-2 kanalen. </li><li> Cellen worden verzameld in 12 x 75 mm polystyreen reageerbuizen met een ml DMEM aangevuld met 10% FCS. </li><li> Na de cellen zijn gesorteerd, centrifuge de celsuspensie op 450x g gedurende 10 minuten, giet de media, en resuspendeer de cellen in 500 ui verse DMEM aangevuld met 10% FCS. </li><li> Tel het aantal gesorteerde cellen met behulp van een hemocytometer zoals beschreven in stap 3.8. </li></ol> 6. Representatieve resultaten Dit protocol zal leiden tot de isolatie van ALDH + en CD44 + CD24 + alvleesklier CSCs. Het percentage van de muis-afgeleide cellen is variabel, maar we hebben gemerkt dat de meeste menselijke alvleesklierkanker xenotransplantaten 20-60% bevatten muis-afgeleide cellen met de muis CD31, muis afkomst cocktail, en de muis H-2Kd biotine-geconjugeerde antilichamen (Figuur 1A ). Ook de frequentie van elk CSC populatie van verschillende xenotransplantaten is variabel, maar over het algemeen hebben we ontdekt dat 1-4% van de totale celpopulatie is ALDH + (Figuur 1B) en 0,2-5% is CD44 + CD24 + (figuur 1C). We regelmatig handmatig tellen gesorteerd cellen met behulp van een hemocytometer sinds de FACSAria machine telt zijn vaak onnauwkeurig te wijten aan niet-cellulaire deeltjes gedetecteerd door de FACSAria. <img src="/files/ftp_upload/2169/2169fig1.jpg" alt="Figuur 1" /> Figuur 1. Flowcytometrie plot beeltenis van specifieke populaties van een alvleesklierkanker xenograft. (A) Cellen kleuring positief in de FL-3 kanaal (propidiumjodide +, CD31 + muis muis + afkomst, of muis H-2Kd +) zijn zo uitgesloten om alleen te isoleren levensvatbare en niet-muis afgeleide cellen. (B) ALDH activiteit in een menselijke pancreas kanker xenotransplantaatmodellen werd gemeten door flowcytometrie met behulp van de ALDEFLUOR reagens in de aanwezigheid en afwezigheid van de ALDH1 inhibitor diethylamino-benzaldehyde (DEAB). De frames vertegenwoordigen poorten die ALDH + cellen die zijn gemaakt op basis van cellen behandeld met DEAB en vervolgens toegepast op onbehandelde cellen weer te geven. De percentages van ALDH + cellen worden getoond in de poort. (C) De CD44 + CD24 + poort werd gemaakt op basis van cellen gekleurd met ALDEFLUOR, en de IgG 2bκ-APC (isotypic controle voor CD44-APC) en IgG 2aκ-PE (isotypic controle voor CD24-PE) antilichamen. De percentages van CD44 + CD24 + cellen worden getoond in de poort.

<ol>
	<li>Clarke, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cancer+stem+cells--perspectives+on+current+status+and+future+directions:+AACR+Workshop+on+cancer+stem+cells.">Cancer stem cells--perspectives on current status and future directions: AACR Workshop on cancer stem cells.</a> Cancer Res. 66, 9339-9344 (2006).</li><li>Al-Hajj, M., Wicha, M. S., Benito-Hernandez, A., Morrison, S. J., Clarke, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prospective+identification+of+tumorigenic+breast+cancer+cells.">Prospective identification of tumorigenic breast cancer cells.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 100, 3983-3988 (2003).</li><li>Ginestier, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ALDH1+Is+a+Marker+of+Normal+and+Malignant+Human+Mammary+Stem+Cells+and+a+Predictor+of+Poor+Clinical+Outcome.">ALDH1 Is a Marker of Normal and Malignant Human Mammary Stem Cells and a Predictor of Poor Clinical Outcome.</a> Cell stem cell. 1, 555-567 (2007).</li><li>Jones, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Circulating+clonotypic+B+cells+in+classic+Hodgkin+lymphoma.">Circulating clonotypic B cells in classic Hodgkin lymphoma.</a> Blood. 113, 5920-5926 (2009).</li><li>Matsui, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clonogenic+multiple+myeloma+progenitors,+stem+cell+properties,+and+drug+resistance.">Clonogenic multiple myeloma progenitors, stem cell properties, and drug resistance.</a> Cancer Res. 68, 190-197 (2008).</li><li>Li, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+pancreatic+cancer+stem+cells.">Identification of pancreatic cancer stem cells.</a> Cancer Res. 67, 1030-1037 (2007).</li><li>Hermann, P. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Distinct+populations+of+cancer+stem+cells+determine+tumor+growth+and+metastatic+activity+in+human+pancreatic+cancer.">Distinct populations of cancer stem cells determine tumor growth and metastatic activity in human pancreatic cancer.</a> Cell stem cell. 1, 313-323 (2007).</li><li>Rasheed, Z. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prognostic+significance+of+tumorigenic+cells+with+mesenchymal+features+in+pancreatic+adenocarcinoma.">Prognostic significance of tumorigenic cells with mesenchymal features in pancreatic adenocarcinoma.</a> J Natl Cancer Inst. 102, 340-351 (2010).</li><li>Rubio-Viqueira, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+in+vivo+platform+for+translational+drug+development+in+pancreatic+cancer.">An in vivo platform for translational drug development in pancreatic cancer.</a> Clin Cancer Res. 12, 4652-4661 (2006).</li><li>Jones, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessment+of+aldehyde+dehydrogenase+in+viable+cells.">Assessment of aldehyde dehydrogenase in viable cells.</a> Blood. 85, 2742-2746 (1995).</li></ol>

Dit protocol beschrijft de isolatie van pancreatische CSCs uit menselijke xenotransplantaten. Een aantal belangrijke stappen in deze procedure zal de opbrengst van levensvatbare CSCs. Het herstel van een zuivere populatie van de alvleesklier CSCs is afhankelijk van de zuiverheid van levensvatbare cellen aanwezig in de celsuspensie vóór sortering op de FACSAria. Zorg ervoor dat xenotransplantaten die minder dan 1 cm in grootste diameter te gebruiken helpt om de hoeveelheid necrotisch weefsel te verminderen in het midden van de tumor. Daarnaast putten de celsuspensie van weefsel puin en dode cellen tijdens Ficoll-Paque gradiënt centrifugatie is kritisch en kan herhaald worden als een groot aantal van weefselstukjes of niet-levensvatbare cellen worden gedetecteerd wanneer de cellen worden geteld op de hemocytometer. De kleuringsprotocol hier beschreven maakt gebruik van de ALDEFLUOR reagens systeem ALDH activiteit evenals fluorofoor-geconjugeerde opsporing van antilichamen tegen specifieke cel oppervlakte-antigenen op te sporen. ALDEFLUOR kleuring is uitgevoerd bij 37 ° C, en daarom moet worden ingevuld voordat antilichaam kleuring (op ijs) de mogelijkheden voor antilichamen aftopping, wat kan gebeuren bij 37 ° C te voorkomen Omdat cellen kunnen efflux de ALDEFLUOR reagens, is het belangrijk om de cellen in ALDEFLUOR buffer te handhaven op 4 ° C na ALDEFLUOR vlekken is voltooid. De ALDEFLUOR buffer bevat een drug efflux remmer die helpt om intracellulaire niveaus van ALDEFLUOR. Omdat deze methode isoleert levensvatbaar alvleesklier CSCs ze kunnen worden toegepast in een aantal experimenten die de fysiologische functie van deze cellen te meten. We hebben deze cellen voor tumor-initiatie assays gebruik te maken van immuungecompromitteerde muizen en in vitro celmigratie / invasie assays. Bovendien kan RNA, DNA en eiwitten worden verzameld uit deze cellen voor analytische studies vergelijken CSC en niet-CSC populaties.

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>DMEM </td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen (Carlsbad, CA) </td>
<td>11965-118 </td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Fetal calf serum </td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Harlan (Indianapolis, IN)</td>
<td>BT-9501</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Penicillin-streptomycin </td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen </td>
<td>15140-122 </td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Collagenase type IV </td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen </td>
<td>17104-019 </td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Dispase </td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma (St. Louis, MO) </td>
<td>D4818 </td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>100 x 20 mm culture dish </td>
<td>&nbsp;</td>
<td>BD Biosciences (San Jose, CA) </td>
<td>353003 </td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>70-&mu;m filter </td>
<td>&nbsp;</td>
<td>BD Biosciences </td>
<td>352350 </td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>50-mL conical tube </td>
<td>&nbsp;</td>
<td>BD Biosciences </td>
<td>352070 </td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Ficoll-Paque Plus </td>
<td>&nbsp;</td>
<td>GE Healthcare (Upsala, Sweden) </td>
<td>17-1440 </td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>ALDEFLUOR reagent system </td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Stem Cell Technologies (Vancouver, BC, Canada) </td>
<td>01700 </td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Trypan blue </td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen </td>
<td>15250-061 </td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>12 x 75 mm polystyrene test tubes </td>
<td>&nbsp;</td>
<td>BD Biosciences </td>
<td>352054 </td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>CD44-APC (clone G44-26) </td>
<td>&nbsp;</td>
<td>BD Biosciences </td>
<td>559942 </td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>CD24-PE (clone ML5) </td>
<td>&nbsp;</td>
<td>BD Biosciences </td>
<td>555428 </td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Mouse CD31-biotin </td>
<td>&nbsp;</td>
<td>BD Biosciences </td>
<td>553371 </td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Mouse lineage-biotin </td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Miltenyi Biotec (Auburn, CA) </td>
<td>130-092-613 </td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Mouse H-2Kd-biotin </td>
<td>&nbsp;</td>
<td>BD Biosciences </td>
<td>553564 </td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>IgG2b&#x03BA;-APC</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>BD Biosciences </td>
<td>555745 </td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>IgG2a&#x03BA;-PE</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>BD Biosciences </td>
<td>555574 </td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Streptavidin-PerCP protein </td>
<td>&nbsp;</td>
<td>BD Biosciences </td>
<td>554064 </td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Propidium iodide </td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma </td>
<td>P4170 </td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>12 x 75 mm polystyrene test tubes with strainer caps </td>
<td>&nbsp;</td>
<td>BD Biosciences </td>
<td>352235 </td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

isolation of stem cells from human pancreatic cancer xenografts

Kankerstamcellen (CSCs) zijn geïdentificeerd in een groeiend aantal van maligniteiten en functioneel bepaald door hun vermogen om zelf-vernieuwing te ondergaan en te produceren gedifferentieerde nakomelingen 1. Deze eigenschappen laten CSCs de oorspronkelijke tumor recapituleren bij injectie in immuungecompromitteerde muizen. CSCs binnen een epitheliale maligniteit werden voor het eerst beschreven bij borstkanker en voldoet aan specifieke cel-oppervlakte-antigeen expressie (CD44 + CD24 laag / -) display 2. Sindsdien zijn CSCs geïdentificeerd in een toenemend aantal andere menselijke maligniteiten met behulp van CD44 en CD24, evenals een aantal andere oppervlakte-antigenen. Fysiologische eigenschappen, met inbegrip aldehyde dehydrogenase (ALDH) activiteit, zijn ook gebruikt om CSCs isoleren van kwaadaardige weefsels 3-5. Onlangs, wij en anderen geïdentificeerd CSCs adenocarcinoom van de pancreas op basis van ALDH activiteit en de expressie van de cel oppervlakte-antigenen CD44 en CD24 en CD133 6-8. Deze zeer tumorigene populaties kan wel of niet overlappen en weer andere functies. We vonden dat de ALDH + en CD44 + CD24 + alvleesklier CSCs worden op dezelfde tumorigeen, maar ALDH + cellen zijn relatief meer invasieve 8. In dit protocol beschrijven we een methode om levensvatbare alvleesklier CSCs isoleren van low-passage menselijke xenotransplantaten 9. Xenografted tumoren worden geoogst uit muizen en gemaakt in een single-celsuspensie. Weefselstukjes en dode cellen worden gescheiden van levende cellen en vervolgens gekleurd met behulp van antilichamen tegen CD44 en CD24 en het gebruik van de ALDEFLUOR reagens, een fluorescent substraat van ALDH 10. CSCs worden dan geïsoleerd door fluorescentie geactiveerde cel sortering. Geïsoleerde CSCs kan vervolgens worden gebruikt voor analytische of functionele tests die levensvatbare cellen.

Watch this Scientific Journal Video about Isolation of Stem Cells from Human Pancreatic Cancer Xenografts at JoVE.com

Isolation of Stem Cells from Human Pancreatic Cancer Xenografts

Kankerstamcellen (CSCs) zijn geïdentificeerd in een aantal maligniteiten. In dit protocol beschrijven we een flowcytometrische methode waarbij aldehyde dehydrogenase activiteit en CD44 en CD24 expressie CSCs isoleren van menselijke pancreas adenocarcinoom xenotransplantaten. Deze levensvatbare cellen kunnen vervolgens worden gebruikt in functionele en analytische studies.

Isolatie van stamcellen uit menselijke pancreaskanker xenotransplantaten

Cancer stem cells (CSCs) have been identified in a growing number of malignancies and are functionally defined by their ability to undergo self-renewal ...

Research

JoVE Journal

Biology

Isolation and Analysis of Hematopoietic Stem Cells from the Placenta

Isolatie en analyse van hematopoietische stamcellen uit de placenta

Hematopoietic stem cells (HSCs) have the ability to self-renew and generate all cell types of the blood lineages throughout the lifetime of an individual. ...

Chromatin Immunoprecipitation from Human Embryonic Stem Cells

Chromatine immunoprecipitatie van menselijke embryonale stamcellen

The functional and structural complexity of the myriad of cells in metazoan organisms arises from a small number of stem cells. Stem cells are ...

Human Pancreatic Islet Isolation: Part I: Digestion and Collection of Pancreatic Tissue

Human eilandjes van Langerhans Isolatie: Deel I: Spijsvertering en verzameling van alvleesklierweefsel

Management of Type 1 diabetes is burdensome, both to the individual and society, costing over 100 billion dollars annually. Despite the widespread use of ...

Isolation of Retinal Stem Cells from the Mouse Eye

Isolatie van het netvlies stamcellen van de muis Eye

The adult mouse retinal stem cell (RSC) is a rare quiescent cell found within the ciliary epithelium (CE) of the mammalian eye1,2,3. The CE is made up of ...

Isolation and Culture of Adult Epithelial Stem Cells from Human Skin

Isolatie en Cultuur van Volwassen epitheliale stamcellen uit menselijke huid

The homeostasis of all self-renewing tissues is dependent on adult stem cells. As undifferentiated stem cells undergo asymmetric divisions, they generate ...

Selecting and Isolating Colonies of Human Induced Pluripotent Stem Cells Reprogrammed from Adult Fibroblasts

Selecteren en isoleren van Koloniën van de mens geïnduceerde pluripotente stamcellen geherprogrammeerd tegen Adult Fibroblasten

Herein we present a protocol of reprogramming human adult fibroblasts into human induced pluripotent stem cells (hiPSC) using retroviral vectors encoding ...

Isolation of Immune Cells from Primary Tumors

Isolatie van immuuncellen van primaire tumoren

Tumors create a unique immunosuppressive microenvironment (tumor microenvironment, TME) whereby leukocytes are recruited into the tumor by various ...

Na&iuml;ve Adult Stem Cells Isolation from Primary Human Fibroblast Cultures

NaÃƒÆ’Ã‚Â¯ve Adult Stem Cells Isolation from Primary Human Fibroblast Cultures

Naïve Volwassen stamcellen Isolatie van primaire humane fibroblastkweken

Over the last decade, several adult stem cell  populations have been identified in human skin 1-4.  The isolation of multipotent adult dermal precursors ...

Manual Isolation of Adipose-derived Stem Cells from Human Lipoaspirates

Handmatig Isolatie van vetweefsel-afgeleide stamcellen uit menselijke Lipoaspirates

In 2001, researchers at the University of  California, Los Angeles, described the isolation of a new population of adult  stem cells from liposuctioned ...

Isolation and Culture of Dental Epithelial Stem Cells from the Adult Mouse Incisor

Isolatie en Cultuur van Dental epitheliale stamcellen van de volwassen muis Incisor

Understanding the cellular and molecular mechanisms that underlie tooth regeneration and renewal has become a topic of great interest1-4, and the mouse ...