Name: isolation of stem cells from human pancreatic cancer xenografts
Uploaded: 2010-09-26T17:00:00
Duration: 11 min 44 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Isolation of Stem Cells from Human Pancreatic Cancer Xenografts at JoVE.com

עבודה זו נתמכה על ידי מענקים מהמוסד הלאומי לבריאות (CA127574, CA107040 CA09071 ו) ל WM

1. קציר xenografts מעכברים <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן את התא דיסוציאציה חיץ: שונה Dulbecco הנשר בינוני (DMEM) בתוספת 10% עוברי עגל בסרום (FCS), פניצילין, סטרפטומיצין, 200 U / mL collagenase סוג ד &#39;, ו 0.6 U / mL dispase. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Athymic (נו + / נו +) עכבר מחסה סרטן הלבלב האנושי תת עורית xenograft כי הוא פחות מ 1 ס&quot;מ קוטר הגדול ביותר הוא להרדים בחנק פחמן דו חמצני ו נקע בצוואר הרחם. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הגידול תת עורית היא שנקטפו מן האגף של העכבר על ידי דיסקציה קהה באמצעות מלקחיים ומספריים והניח מיד למאגר תא דיסוציאציה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> גידולים שקל והניח בחזרה לגרם 1 של רקמת הגידול לתוך 10 מ&quot;ל תא דיסוציאציה חיץ. </li></ol> 2. צור השעיה תא בודד מתוך xenografts <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עבודה סטרילית biosafety הממשלה, הגידול מועבר 100 x 20 מ&quot;מ צלחת עם תרבות מ&quot;ל 1 של חיץ ניתוק התא. גידולים טחון מכנית באמצעות סכיני גילוח סטרילית מלקחיים. המתלים תאים סרטניים הוא triturated דרך pipet 5 מ&quot;ל סרולוגיות 10 פעמים. חתיכות הגידול צריך להיות קטן מספיק כדי לא להדביק את pipet 5 מ&quot;ל סרולוגיות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> המתלים תאים סרטניים מועבר צינור 50 מ&quot;ל חרוטי המכיל את נפח הנותרים של התא דיסוציאציה חיץ (מלא פחות מ 50%) vortexed במהירות המרבית למשך דקה 1. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> המתלים תאים סרטניים הוא מודגרות אז מעלות צלזיוס למשך 2 שעות עם vortexing לסירוגין במשך דקה 1 כל 20 דקות ב 37. </li></ol> 3. לכלות השעיה Cell של פסולת רקמות תאים מתים <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר דגירה 2 שעות השעיה התא vortexed במהירות המרבית למשך דקה 1. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ההשעיה התא לאחר מכן עבר דרך פילטר 70 מיקרומטר ואסף בתוך שפופרת 50 מ&quot;ל טרי חרוטי והותאמו נפח סופי של 15 מ&quot;ל לכל צינור. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כדי להמשיך תאים קיימא להפריד תאים מתים ופסולת רקמות, תאים סרטניים ההשעיה היא מופרדים על ידי צנטריפוגה צפיפות באמצעות Ficoll-Paque פלוס. Underlayment של Ficoll-Paque Plus נוצר על ידי pipeting 15 מ&quot;ל של Ficoll-Paque פלוס לאט מתחת ההשעיה תא נזהרים שלא לערבב את שתי השכבות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השעיית התא שכבות Ficoll הם הוא centrifuged בשעה 500x גרם במשך 30 דקות עם הבלמים כבוי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תאים על הממשק של Ficoll-Paque פלוס חיץ ניתוק התא נאספים ומועברים שפופרת 50 מ&quot;ל טרי חרוטי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> DMEM טריים בתוספת FCS 10% מתווסף ההשעיה תא לדלל אותה 01:03 (למשל 20 מ&quot;ל התקשורת טרי הוסיף 10 מ&quot;ל של השעיה התא). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> התאים נאספים על ידי צנטריפוגה בשעה 450x גרם במשך 10 דקות, התקשורת יצק, ואת גלולה התא resuspended ב 1 מ&quot;ל של חיץ ALDEFLUOR. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עשרת מיקרוליטר של השעיה התא מדולל עם 10 μL trypan כחול תאים קיימא נספרים באמצעות hemocytometer. אם מספר גדול של תאים מתים או פסולת רקמות מצוינים במהלך שלב זה, אז ההפרדה התא על ידי צנטריפוגה צפיפות ניתן לחזור (שלבים 3.3-3.7). </li></ol> 4. הכתם תאים עבור מיון פלואורסצנטי תא פעיל <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Seven לייבל 12 x 75 מ&quot;מ פוליסטירן מבחנות כדלקמן: <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בלא כתם </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> CD44-APC </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> CD24-PE </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עכבר CD31-ביוטין + עכבר השושלת-ביוטין + עכבר H-2Kd-ביוטין </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ALDEFLUOR </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ALDEFLUOR DEAB + + IgG 2bκ-APC + IgG 2aκ-PE </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ALDEFLUOR + CD44 + CD24-APC-PE + עכבר + CD31-ביוטין עכבר השושלת-ביוטין + עכבר H-2Kd-ביוטין. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לדלל את ההשעיה תא 2 מ&quot;ל של חיץ ALDEFLUOR לריכוז סופי של 5-10000000 תאים / מ&quot;ל ​​ולשמור על הקרח. הוספת 100 μL של ההשעיה התא צינורות # 1, 2, 3 ו 4 ולשמור אותם על הקרח. הוסף 1 DEAB μL אל צינור # 6 ולשמור על הקרח. הוסף מגיב ALDEFLUOR על ההשעיה תא הנותרים בדילול 1000 - לקפל (למשל להוסיף 1.6 μL מגיב ALDEFLUOR להשעיית 1.6 תא מ&quot;ל), ומערבבים היטב, ומניחים על קרח. העברת 100 μL של תערובת זו צינורות # 5 ו -6, וכן את התערובת שנותרה (1.4 מ&quot;ל) אל צינור # 7. דגירה של כל הצינורות בתוך אמבט המים 37 מעלות צלזיוס במשך 40 דקות. מערבבים את ההשעיה תא כל 10 דקות כדי למנוע את התאים מן ההתיישבות אל החלק התחתון של הצינורות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צנטריפוגה התאים בשעה 450x גרם ו - 4 מעלות צלזיוס למשך 10 דקות ולאחר מכן למזוג את המאגר. Resuspend את כדורי צינורות # 1 ו -5 במאגר 100 ALDEFLUOR μL. כדי # 2 צינורות, 3, 4 ו 6, להוסיף 100 μL של חיץ ALDEFLUOR המכיל את הנוגדנים המתאימים בדילול כדלקמן: 1:20 עבור IgG 2bΚ-APC, IgG 2aΚ-PE, APC-CD44, CD24 ו-PEנוגדנים; 1:100 עבור העכבר CD31-ביוטין, עכבר השושלת, ביוטין, ועכבר H-2Kd-ביוטין נוגדנים. כדי צינור # 7 להוסיף 1.4 מ&quot;ל של חיץ ALDEFLUOR המכיל דילול של 1:20 APC-CD44, CD24 ו-PE נוגדנים דילול 1:100 של העכבר CD31-ביוטין, עכבר השושלת, ביוטין, ועכבר H-2Kd-ביוטין נוגדנים. דגירה השעיות התא על קרח במשך 10 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צנטריפוגה התאים בשעה 450x גרם ו - 4 מעלות צלזיוס למשך 10 דקות ולאחר מכן למזוג את המאגר. Resuspend את כדורי במבחנות מס &#39;1, 2, 3, 5, 6 במאגר 100 ALDEFLUOR μL. הכן 1.5 מ&quot;ל של חיץ ALDEFLUOR המכיל דילול 1:100 חלבון streptavidin-PerCP. הוספת 100 μL אל צינור # 4 ולהוסיף 1.4 מ&quot;ל על צינור # 7. דגירה השעיות התא על קרח במשך 10 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צנטריפוגה התאים בשעה 450x גרם ו - 4 מעלות צלזיוס למשך 10 דקות ולאחר מכן למזוג את המאגר. Resuspend את כדורי במבחנות מס &#39;1, 2, 3, 4, 5, 6 במאגר 200 ALDEFLUOR μL. Resuspend גלולה בצינור # 7 ב 2.8 מ&quot;ל של חיץ ALDEFLUOR המכיל 2 מיקרוגרם / מ&quot;ל ​​יודיד propidium. שמור צינורות על הקרח בכל עת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מעבר תאים דרך 35 מיקרומטר מסנן באמצעות 12 x 75 מ&quot;מ פוליסטירן מבחנות עם כובעים מסננת. </li></ol> 5. בודד סרטן בתאי גזע על ידי מיון פלואורסצנטי תא פעיל <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Cytometer תזרים FACSAria מוכן מיון התא. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שולטת פיצוי נקבעים באמצעות תאים צינורות # 1, 2, 3, 4 ו 5. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> גייטס נוצרות מבוסס על קדימה ועל תופעות פיזור פרמטרים לאסוף singlets התא. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עכבר Non-(PerCP שלילי) ובת קיימא (שאינם propidium מוכתם יודיד) התאים מגודרת באמצעות ערוץ FL-3. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ALDH תאים + נאספים על בסיס השערים שנוצרו באמצעות DEAB שטופלו בתאים (צינור # 6) ואת ערוץ FL-1. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> CD44 + CD24 + תאים נאספים על בסיס השערים שנוצרו באמצעות תאים מוכתם ALDEFLUOR, IgG 2bΚ-APC, ו IgG 2aκ-PE (צינור # 6) באמצעות FL-4 ו FL-2 ערוצים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> התאים נאספים 12 x 75 מ&quot;מ פוליסטירן מבחנות המכילות 1 מ&quot;ל של DMEM FCS בתוספת 10%. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אחרי תאים מוינו, צנטריפוגה ההשעיה התא 450x גרם במשך 10 דקות, למזוג התקשורת, resuspend התאים 500 DMEM טרי μL בתוספת FCS 10%. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ספירת תאים ממוינים באמצעות hemocytometer כמתואר בשלב 3.8. </li></ol> 6. נציג תוצאות פרוטוקול זה יוביל לבידוד של ALDH + ו-CD44 + CD24 + הלבלב CSCs. אחוז התאים בעכבר הנגזרות משתנה, אך מצאנו כי האדם ביותר סרטן הלבלב xenografts מכילים 20-60% בתאי עכבר הנגזרות באמצעות העכבר CD31, קוקטייל עכבר השושלת, ועכבר H-2Kd ביוטין, מצומדות נוגדנים (איור 1A ). כמו כן התדירות של האוכלוסייה בכל CSC מ xenografts שונים משתנה, אבל בדרך כלל מצאנו כי 1-4% מכלל האוכלוסייה תא הכולל הוא ALDH + (איור 1B) ו 0.2-5% הוא CD44 + CD24 + (תרשים 1C). אנו שגרתי ידני לספור תאים ממוינים באמצעות hemocytometer מאז מונה FACSAria מכונה לעיתים קרובות לא מדויקים בגלל אי ​​- סלולרי חלקיקים זוהה על ידי FACSAria. <img src="/files/ftp_upload/2169/2169fig1.jpg" alt="איור 1" /> באיור 1. Cytometry העלילה זרימה המתאר אוכלוסיות ספציפיות xenograft בסרטן הלבלב. (א) תאים מכתים חיובי בערוץ-3 FL (propidium יודיד + עכבר + + CD31 עכבר השושלת, או עכבר H-2Kd +) נכללות כדי לבודד רק קיימא ושאינם עכבר נגזר תאים. (ב) פעילות ALDH ב xenograft סרטן הלבלב האנושי נמדד על ידי cytometry זרימה באמצעות ריאגנט ALDEFLUOR בנוכחות והיעדר מעכב ALDH1 diethylamino-benzaldehyde (DEAB). מסגרות מייצגות שערים המתארים תאים + ALDH שנוצרו על בסיס תאים שטופלו DEAB ולאחר מכן להחיל בתאים שלא טופלו. האחוזים של תאים ALDH + מוצגים השער. (ג) CD44 + CD24 + שער נוצרה על בסיס תאים מוכתם ALDEFLUOR, ואת IgG 2bκ-APC (שליטה isotypic עבור CD44-APC) ו IgG 2aκ-PE (שליטה isotypic עבור CD24-PE) נוגדנים. האחוזים של CD44 + CD24 + תאים מוצגים השער.

<ol>
	<li>Clarke, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cancer+stem+cells--perspectives+on+current+status+and+future+directions:+AACR+Workshop+on+cancer+stem+cells.">Cancer stem cells--perspectives on current status and future directions: AACR Workshop on cancer stem cells.</a> Cancer Res. 66, 9339-9344 (2006).</li><li>Al-Hajj, M., Wicha, M. S., Benito-Hernandez, A., Morrison, S. J., Clarke, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prospective+identification+of+tumorigenic+breast+cancer+cells.">Prospective identification of tumorigenic breast cancer cells.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 100, 3983-3988 (2003).</li><li>Ginestier, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ALDH1+Is+a+Marker+of+Normal+and+Malignant+Human+Mammary+Stem+Cells+and+a+Predictor+of+Poor+Clinical+Outcome.">ALDH1 Is a Marker of Normal and Malignant Human Mammary Stem Cells and a Predictor of Poor Clinical Outcome.</a> Cell stem cell. 1, 555-567 (2007).</li><li>Jones, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Circulating+clonotypic+B+cells+in+classic+Hodgkin+lymphoma.">Circulating clonotypic B cells in classic Hodgkin lymphoma.</a> Blood. 113, 5920-5926 (2009).</li><li>Matsui, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clonogenic+multiple+myeloma+progenitors,+stem+cell+properties,+and+drug+resistance.">Clonogenic multiple myeloma progenitors, stem cell properties, and drug resistance.</a> Cancer Res. 68, 190-197 (2008).</li><li>Li, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+pancreatic+cancer+stem+cells.">Identification of pancreatic cancer stem cells.</a> Cancer Res. 67, 1030-1037 (2007).</li><li>Hermann, P. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Distinct+populations+of+cancer+stem+cells+determine+tumor+growth+and+metastatic+activity+in+human+pancreatic+cancer.">Distinct populations of cancer stem cells determine tumor growth and metastatic activity in human pancreatic cancer.</a> Cell stem cell. 1, 313-323 (2007).</li><li>Rasheed, Z. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prognostic+significance+of+tumorigenic+cells+with+mesenchymal+features+in+pancreatic+adenocarcinoma.">Prognostic significance of tumorigenic cells with mesenchymal features in pancreatic adenocarcinoma.</a> J Natl Cancer Inst. 102, 340-351 (2010).</li><li>Rubio-Viqueira, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+in+vivo+platform+for+translational+drug+development+in+pancreatic+cancer.">An in vivo platform for translational drug development in pancreatic cancer.</a> Clin Cancer Res. 12, 4652-4661 (2006).</li><li>Jones, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessment+of+aldehyde+dehydrogenase+in+viable+cells.">Assessment of aldehyde dehydrogenase in viable cells.</a> Blood. 85, 2742-2746 (1995).</li></ol>

אין ניגודי אינטרסים הכריז.

פרוטוקול זה מתאר את הבידוד של הלבלב CSCs מ xenografts האדם. צעדים מרכזיים בהליך זה ישפר את התשואה של CSCs קיימא. ההתאוששות של אוכלוסייה טהורה של הלבלב CSCs תלוי טוהר של תאים קיימא נוכח ההשעיה התא לפני מיון על FACSAria. טיפול להשתמש xenografts כי הם פחות מ -1 ס&quot;מ בקוטר הגדול עוזר להפחית את כמות רקמת נמק במרכז הגידול. בנוסף, ומכלה את ההשעיה תא של פסולת רקמות תאים מתים במהלך צנטריפוגה Ficoll-Paque שיפוע הוא קריטי ניתן לחזור אם מספר גדול של פסולת רקמה או אי - קיימא תאים מזוהים כאשר תאים נספרים על hemocytometer. פרוטוקול מכתים המתואר כאן מנצל את מערכת מגיב ALDEFLUOR לאתר פעילות ALDH וכן fluorophore-מצומדות הנוגדנים לזהות אנטיגנים ספציפיים פני התא. מכתים ALDEFLUOR מבוצע על 37 מעלות צלזיוס, ולכן צריך להסתיים לפני מכתים נוגדנים (על הקרח) כדי למנוע את הפוטנציאל נוגדן מכסת, אשר יכול לקרות בכל 37 ° C. מאז תאים יכולים בזרימת מגיב ALDEFLUOR, חשוב לשמור על התאים ALDEFLUOR חיץ על 4 מעלות צלזיוס לאחר מכתים ALDEFLUOR הושלמה. המאגר מכיל ALDEFLUOR בזרימת התרופה מעכב המסייע לשמור על רמות תאיים של ALDEFLUOR. מאז שיטה זו מבודד הלבלב CSCs קיימא הם יכולים להיות מיושמים במספר ניסויים למדוד את הפונקציה הפיזיולוגית של תאים אלה. השתמשנו תאים אלו עבור גידולים ייזום מבחני ניצול עכברים immunocompromised ו במבחנה הגירה / הפלישה מבחני התא. יתר על כן, RNA, DNA, חלבון יכול להיות שנאספו תאים אלה ללימודי אנליטית השוואת CSC ולא CSC אוכלוסיות.

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>DMEM </td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen (Carlsbad, CA) </td>
<td>11965-118 </td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Fetal calf serum </td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Harlan (Indianapolis, IN)</td>
<td>BT-9501</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Penicillin-streptomycin </td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen </td>
<td>15140-122 </td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Collagenase type IV </td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen </td>
<td>17104-019 </td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Dispase </td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma (St. Louis, MO) </td>
<td>D4818 </td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>100 x 20 mm culture dish </td>
<td>&nbsp;</td>
<td>BD Biosciences (San Jose, CA) </td>
<td>353003 </td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>70-&mu;m filter </td>
<td>&nbsp;</td>
<td>BD Biosciences </td>
<td>352350 </td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>50-mL conical tube </td>
<td>&nbsp;</td>
<td>BD Biosciences </td>
<td>352070 </td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Ficoll-Paque Plus </td>
<td>&nbsp;</td>
<td>GE Healthcare (Upsala, Sweden) </td>
<td>17-1440 </td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>ALDEFLUOR reagent system </td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Stem Cell Technologies (Vancouver, BC, Canada) </td>
<td>01700 </td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Trypan blue </td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen </td>
<td>15250-061 </td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>12 x 75 mm polystyrene test tubes </td>
<td>&nbsp;</td>
<td>BD Biosciences </td>
<td>352054 </td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>CD44-APC (clone G44-26) </td>
<td>&nbsp;</td>
<td>BD Biosciences </td>
<td>559942 </td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>CD24-PE (clone ML5) </td>
<td>&nbsp;</td>
<td>BD Biosciences </td>
<td>555428 </td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Mouse CD31-biotin </td>
<td>&nbsp;</td>
<td>BD Biosciences </td>
<td>553371 </td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Mouse lineage-biotin </td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Miltenyi Biotec (Auburn, CA) </td>
<td>130-092-613 </td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Mouse H-2Kd-biotin </td>
<td>&nbsp;</td>
<td>BD Biosciences </td>
<td>553564 </td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>IgG2b&#x03BA;-APC</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>BD Biosciences </td>
<td>555745 </td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>IgG2a&#x03BA;-PE</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>BD Biosciences </td>
<td>555574 </td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Streptavidin-PerCP protein </td>
<td>&nbsp;</td>
<td>BD Biosciences </td>
<td>554064 </td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Propidium iodide </td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma </td>
<td>P4170 </td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>12 x 75 mm polystyrene test tubes with strainer caps </td>
<td>&nbsp;</td>
<td>BD Biosciences </td>
<td>352235 </td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

isolation of stem cells from human pancreatic cancer xenografts

סרטן בתאי גזע (CSCs) זוהו מספר הולך וגדל של מחלות ממאירות ומוגדרות תפקודית על ידי היכולת שלהם לעבור התחדשות עצמית לייצר צאצאים הבדיל 1. מאפיינים אלה מאפשרים CSCs לשחזר את הגידול המקורי כאשר הזריקו לעכברים immunocompromised. CSCs בתוך ממאירות אפיתל תוארו הראשון לסרטן השד ונמצא להציג תאים ספציפיים משטח אנטיגן הביטוי (CD44 + CD24 / נמוך -) 2. מאז, CSCs זוהו מספר הולך וגדל של מחלות ממאירות אדם אחרים באמצעות CD44 ו CD24 וכן מספר אנטיגנים פני אחרים. תכונות פיזיולוגיות, כולל פעילות dehydrogenase (ALDH) אלדהיד, יש גם שימש CSCs לבודד מרקמות ממאיר 3-5. לאחרונה, אנו ואחרים זיהו CSCs מ אדנוקרצינומה הלבלב מבוסס על פעילות ALDH ואת הבעת פני השטח אנטיגנים תא CD44 ו CD24, CD133 ו 6-8. אלה אוכלוסיות tumorigenic מאוד עשוי או עלול לא להיות חופפים להציג פונקציות אחרות. מצאנו כי ALDH + ו-CD44 + CD24 + הלבלב CSCs הם tumorigenic דומה, אבל ALDH תאים + יחסית יותר פולשנית 8. בפרוטוקול זה אנו מתארים שיטה לבודד הלבלב CSCs קיימא מן המעבר נמוכה xenografts אדם 9. גידולים Xenografted נקצרים מעכברים והפך ההשעיה תא בודד. פסולת רקמות תאים מתים מופרדים תאים חיים ומוכתמת מכן באמצעות נוגדנים כנגד CD44 ו CD24 ושימוש מגיב ALDEFLUOR, מצע הניאון של ALDH 10. CSCs מבודדים מכן על ידי מיון פלואורסצנטי תא הופעל. מבודד CSCs לאחר מכן ניתן להשתמש עבור מבחני אנליטית או תפקודית הדורשת תאים קיימא.

Watch this Scientific Journal Video about Isolation of Stem Cells from Human Pancreatic Cancer Xenografts at JoVE.com

Isolation of Stem Cells from Human Pancreatic Cancer Xenografts

סרטן בתאי גזע (CSCs) זוהו במספר מחלות ממאירות. בפרוטוקול זה אנו מתארים שיטת תזרים cytometric ניצול אלדהיד דהידרוגנז הפעילות CD44 ו CD24 ביטוי לבודד CSCs מ xenografts אדנוקרצינומה של הלבלב האנושי. תאים אלה קיימא לאחר מכן ניתן להשתמש במחקרים פונקציונלי אנליטית.

בידוד של בתאי גזע xenografts סרטן הלבלב האנושי

Cancer stem cells (CSCs) have been identified in a growing number of malignancies and are functionally defined by their ability to undergo self-renewal ...

Research

JoVE Journal

Biology

Isolation and Analysis of Hematopoietic Stem Cells from the Placenta

בידוד ניתוח בתאי גזע hematopoietic מן השליה

Hematopoietic stem cells (HSCs) have the ability to self-renew and generate all cell types of the blood lineages throughout the lifetime of an individual. ...

Chromatin Immunoprecipitation from Human Embryonic Stem Cells

הכרומטין immunoprecipitation מן בתאי גזע עובריים אנושיים

The functional and structural complexity of the myriad of cells in metazoan organisms arises from a small number of stem cells. Stem cells are ...

Human Pancreatic Islet Isolation: Part I: Digestion and Collection of Pancreatic Tissue

בידוד האדם לבלב: אני חלק: העיכול אוסף של רקמת לבלב

Management of Type 1 diabetes is burdensome, both to the individual and society, costing over 100 billion dollars annually. Despite the widespread use of ...

Isolation of Retinal Stem Cells from the Mouse Eye

בידוד של גזע תאים רשתית העין של העכבר

The adult mouse retinal stem cell (RSC) is a rare quiescent cell found within the ciliary epithelium (CE) of the mammalian eye1,2,3. The CE is made up of ...

Isolation and Culture of Adult Epithelial Stem Cells from Human Skin

בידוד תרבות למבוגרים גזע תאים אפיתל של העור האנושי

The homeostasis of all self-renewing tissues is dependent on adult stem cells. As undifferentiated stem cells undergo asymmetric divisions, they generate ...

Selecting and Isolating Colonies of Human Induced Pluripotent Stem Cells Reprogrammed from Adult Fibroblasts

בחירה בידוד מושבות של בתאי גזע pluripotent מושרה לתכנות מחדש של Fibroblasts למבוגרים

Herein we present a protocol of reprogramming human adult fibroblasts into human induced pluripotent stem cells (hiPSC) using retroviral vectors encoding ...

Isolation of Immune Cells from Primary Tumors

בידוד של תאים חיסוניים של גידולים ראשוניים

Tumors create a unique immunosuppressive microenvironment (tumor microenvironment, TME) whereby leukocytes are recruited into the tumor by various ...

Na&iuml;ve Adult Stem Cells Isolation from Primary Human Fibroblast Cultures

NaÃƒÆ’Ã‚Â¯ve Adult Stem Cells Isolation from Primary Human Fibroblast Cultures

בידוד תאי גזע בוגרים נאיבי מתרבויות פיברובלסטים אנושיות הראשוניות

Over the last decade, several adult stem cell  populations have been identified in human skin 1-4.  The isolation of multipotent adult dermal precursors ...

Manual Isolation of Adipose-derived Stem Cells from Human Lipoaspirates

בידוד ידני של תאי גזע שמקורם בשומן מLipoaspirates האדם

In 2001, researchers at the University of  California, Los Angeles, described the isolation of a new population of adult  stem cells from liposuctioned ...

Isolation and Culture of Dental Epithelial Stem Cells from the Adult Mouse Incisor

בידוד והתרבות של תאי גזע השיניים אפיתל ממבוגרי העכבר הארקטיק

Understanding the cellular and molecular mechanisms that underlie tooth regeneration and renewal has become a topic of great interest1-4, and the mouse ...