Name: testing protozoacidal activity of ligand-lytic peptides against termite gut protozoa in vitro (protozoa culture) and in vivo (microinjection into termite hindgut)
Uploaded: 2010-12-29T17:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Testing Protozoacidal Activity of Ligand-lytic Peptides Against Termite Gut Protozoa in vitro Protozoa Culture and in vivo Microinjection into Termite Hindgut

Nous remercions le Dr Allison Richard, ancien directeur de l&#39;établissement peptide LSU pour la synthèse ligand fluorescent, le Centre de recherche en biotechnologie Interdisciplinaray, UF pour la synthèse peptidique ligand-lytique, et l&#39;installation de microscope Socolovsky pour donner accès à des microscopes à fluorescence. Le financement a été fourni par le Programme de développement SERDP exploratoire pour demain (SEED) du ministère de la Défense, ministère de l&#39;Énergie et de l&#39;Environmental Protection Agency, le Programme de biotechnologie AgCenter équipe interdisciplinaire et l&#39;État de Louisiane.

Expérience 1: Extraction de l&#39;intestin des termites protozoaires dans des conditions anaérobies <ol><li> Utilisez une boîte de ventilateur (Laboratoires Cie) dans une boîte à gants de constamment circuler l&#39;air à travers un déshydratant et le type catalyseur D Stak-Paks de contrôler l&#39;humidité et les niveaux d&#39;oxygène et d&#39;éliminer les températures inégales. Remplissez la boîte à gants avec un flux continu d&#39;azote de 20 à 30 min. Surveiller les niveaux d&#39;oxygène avec un cap...

<ol>
	<li>Hansel, W., Leuschner, C., Enright, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Conjugates+of+lytic+peptides+and+LHRH+or+&#946;CG+target+and+cause+necrosis+of+prostate+cancers+and+metastases.">Conjugates of lytic peptides and LHRH or &#946;CG target and cause necrosis of prostate cancers and metastases.</a> Mol. Cell. Endocrinol. 269, 26-33 (2007).</li><li>Husseneder, C., Collier, R. E., Bourtzis, K., Miller, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Paratransgenesis+for+termite+control.">Paratransgenesis for termite control.</a> Insect Symbiosis. 3, 361-376 (2009).</li><li>Husseneder, C., Grace, J. K., Oishi, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+genetically+engineered+bacteria+(Escherichia+coli)+to+monitor+ingestion,+loss+and+transfer+of+bacteria+in+termites.">Use of genetically engineered bacteria (Escherichia coli) to monitor ingestion, loss and transfer of bacteria in termites.</a> Curr. Microbiol. 50, 119-123 (2005).</li><li>Husseneder, C., Grace, J. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetically+engineered+termite+gut+bacteria+deliver+and+spread+foreign+genes+in+termite+colonies.">Genetically engineered termite gut bacteria deliver and spread foreign genes in termite colonies.</a> Appl. Microbiol. Biotechnol. 68, 360-367 (2005).</li><li>Javadpour, M. M., Juban, M. M., Lo, W. C., Bishop, S. M., Alberty, J. B., Cowell, S. M., Becker, C. L., Mc Laughlin, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=De+novo+antimicrobial+peptides+with+low+mammalian+cell+toxicity.">De novo antimicrobial peptides with low mammalian cell toxicity.</a> J. Med. Chem. 39, 3107-3113 (1996).</li><li>Lai, P. Y., Tamashiro, M., Fuji, J. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Abundance+and+distribution+of+the+three+species+of+symbiotic+protozoa+in+the+hindgut+of+Coptotermes+formosanus+(Isoptera).">Abundance and distribution of the three species of symbiotic protozoa in the hindgut of Coptotermes formosanus (Isoptera).</a> Proc. Haw. Entomol. Soc. 24, 271-276 (1983).</li><li>Leuschner, C., Hansel, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Membrane+disrupting+lytic+peptides+for+cancer+treatments.">Membrane disrupting lytic peptides for cancer treatments.</a> Curr. Pharm. Des. 10, 2299-2310 (2004).</li><li>Mutwiri, G. K., Henk, W. G., Enright, F. M., Corbeil, L. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+the+Antimicrobial+Peptide,+d-Hecate,+on+Trichomonads.">Effect of the Antimicrobial Peptide, d-Hecate, on Trichomonads.</a> J. Parasitol. 86, 1355-1359 (2000).</li><li>Trager, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+cultivation+of+a+cellulose-digesting+flagellate,+Trichomonas+termopsidis,+and+of+certain+other+termite+protozoa.">The cultivation of a cellulose-digesting flagellate, Trichomonas termopsidis, and of certain other termite protozoa.</a> Biol. Bull. 66, 182-190 (1934).</li></ol>

Ligand-lytique peptides ont été utilisés avec succès pour cibler efficacement et de détruire les cellules cancéreuses (Hansel et Leuschner 2004, Hansel et al. 2007). Basé sur ce concept, nous avons développé un ligand qui se lie à heptapeptide la surface de protozoaires dans l&#39;intestin des termites souterrains de Formose et couplé à un peptide lytique dans le but de détruire ces n&#39;oblige digérer la cellulose-symbiotes dans l&#39;intestin des termites pour atteindre les termites contrôle (...

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		<div>
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		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Sigmacote</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma Aldrich</td>
<td>SL-2</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>EDANS</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Novabiochem</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Anaerobic glove box</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Coy Laboratories, Inc.</td>
<td>Custom made</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Intellus environmental controller</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Percival</td>
<td>I36NL</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>PC-10 Glass micropipette puller</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Narishige Scientific Instrument Lab</td>
<td>PC-10</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Glass needles (Model GD-1, 1 X 900 mm)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Narishige Scientific Instrument Lab</td>
<td>GD-1</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Leitz micromanipulators</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Vermont Optechs, Inc.</td>
<td>ACS01</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Microinjector</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Tritech Research, Inc.</td>
<td>MINJ-1</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Microcaps</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Drummond Scientific Company</td>
<td>1-000-0005</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>LEICA fluorescence imaging system</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Leica</td>
<td>DMRxA2</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>LEICA dissecting scope</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Leica</td>
<td>MZ16</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>LEICA microscope</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Leica</td>
<td>DMLB</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Olympus dissecting scope</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Olympus</td>
<td>SZ61</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

testing protozoacidal activity of ligand-lytic peptides against termite gut protozoa in vitro (protozoa culture) and in vivo (microinjection into termite hindgut)

Nous développons une nouvelle approche de lutte contre les termites souterrains qui conduirait à réduire la dépendance à l&#39;utilisation de pesticides chimiques. Les termites souterrains sont dépendants des protozoaires dans le hindguts des travailleurs à digérer efficacement le bois. Peptides lytiques ont été capables de tuer une variété de parasites protozoaires (Mutwiri et al. 2000) et aussi des protozoaires dans l&#39;intestin des termites de Formose souterraines, Coptotermes formosanus (Husseneder et Collier 2009). Peptides lytiques sont partie du système immunitaire non spécifique des eucaryotes, et de détruire les membranes des microorganismes (Leuschner et Hansel 2004). La plupart des peptides lytiques ne sont pas susceptibles de nuire les eucaryotes supérieurs, parce qu&#39;ils n&#39;affectent pas les membranes cellulaires électriquement neutre contenant du cholestérol des eucaryotes supérieurs (Javadpour et al. 1996). L&#39;action lytique peptide peuvent être ciblées sur des types cellulaires spécifiques par l&#39;ajout d&#39;un ligand. Par exemple, Hansel et al. (2007) a rapporté que les peptides lytiques conjugués avec des ligands des récepteurs des cellules du cancer de membrane peuvent être utilisées pour détruire les cellules cancéreuses du sein, tandis que les peptides lytiques seul ou conjugué avec des non-peptides spécifiques n&#39;ont pas été efficaces. Peptides lytiques ont également été conjugué à des hormones humaines qui se lient à des récepteurs sur les cellules tumorales pour destruction ciblée de cellules cancéreuses de la prostate et des testicules (Leuschner et Hansel 2004). Dans cet article nous présentons les techniques utilisées pour démontrer l&#39;activité protozoacidal d&#39;un peptide lytique (Hecate) couplé à un ligand qui se lie à heptapeptide la membrane de surface des protozoaires de l&#39;intestin des termites de Formose souterraines. Ces techniques comprennent extirpation de l&#39;intestin des travailleurs contre les termites, la culture anaérobie de l&#39;intestin protozoaires (Pseudotrichonympha grassii, Holomastigotoides hartmanni, Spirotrichonympha leidyi), confirmation microscopique que le ligand marqué avec un colorant fluorescent se lie à l&#39;intestin des termites et autres protozoaires vivant librement protozoaires, mais pas à des bactéries ou tissu intestinal. Nous démontrons également que le même ligand couplé à un peptide lytique tue efficacement l&#39;intestin des termites protozoaires in vitro (culture de protozoaires) et in vivo (micro-injection dans l&#39;intestin postérieur des travailleurs), mais il est moins bactéricide que le peptide lytique seul. La perte de protozoaires conduit à la mort des termites en moins de deux semaines. Dans le futur, nous allons modifier génétiquement des micro-organismes qui peuvent survivre dans l&#39;intestin postérieur des termites et la propagation à travers une colonie de termites comme «cheval de Troie» pour exprimer ligand-lytique des peptides qui allait tuer les protozoaires dans l&#39;intestin des termites et ensuite tuer les termites de la colonie . Ligand-lytique peptides pourrait également être utile pour le développement de médicaments contre les parasites protozoaires.

Watch this Scientific Journal Video about Testing Protozoacidal Activity of Ligand-lytic Peptides Against Termite Gut Protozoa in vitro Protozoa Culture and in vivo Microinjection into Termite Hindgut

Testing Protozoacidal Activity of Ligand-lytic Peptides Against Termite Gut Protozoa in vitro Protozoa Culture and in vivo Microinjection into Termite Hindgut

Nous présentons les procédures pour démontrer que les ligands se lient à la membrane de surface des ces protozoaires digérant la cellulose-dans l&#39;intestin des termites de Formose souterraines en utilisant la microscopie fluorescente et que les ligands couplés avec des peptides lytiques tuer les protozoaires<em&gt; In vitro</em&gt; (Anaérobie de la culture de protozoaires) et<em&gt; In vivo</em&gt; (Injection dans l&#39;intestin postérieur des termites).

Test activité Protozoacidal du ligand-lytique peptides contre Gut Termite protozoaires In vitro (Culture protozoaires) et In vivo (Microinjection dans Termite Intestin postérieur)

We are developing a novel approach to subterranean termite control that would lead to reduced reliance on the use of chemical pesticides. Subterranean ...

Research

JoVE Journal

Biology

Testing Protozoacidal Activity of Ligand-lytic Peptides Against Termite Gut Protozoa in vitro (Protozoa Culture) and in vivo (Microinjection into Termite Hindgut)

Extracting DNA from the Gut Microbes of the Termite (Zootermopsis Angusticollis) and Visualizing Gut Microbes

Extracting DNA from the Gut Microbes of the Termite Zootermopsis Angusticollis and Visualizing Gut Microbes

Extraction d&#39;ADN de l&#39;microbes de l&#39;intestin des termites (Zootermopsis Angusticollis) et Visualisation microbes de l&#39;intestin

Termites are among the few animals known to have the capacity to subsist solely by consuming wood.  The termite gut tract contains a dense and ...

Recherche

Biologie

Investigating the Microbial Community in the Termite Hindgut - Interview

Enquêter la communauté microbienne dans l&#39;intestin postérieur des termites - Interview

Jared Leadbetter explains why the termite-gut microbial community is an excellent system for studying the complex interactions between microbes.     The ...

Layers of Symbiosis - Visualizing the Termite Hindgut Microbial Community

Couches de Symbiose - Visualisation de la communauté microbienne Termite Intestin postérieur

Jared Leadbetter takes us for a nature walk through the diversity of life resident in the termite hindgut - a microenvironment containing 250 different ...

Testing the Physiological Barriers to Viral Transmission in Aphids Using Microinjection

Test de la barrières physiologiques à la transmission virale chez les pucerons avec microinjection

Potato loafroll virus (PLRV), from the family Luteoviridae infects solanaceous plants. It is transmitted by aphids, primarily, the green peach aphid. When ...

In vivo and in vitro Studies of Adaptor-clathrin Interaction

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In vivo et in vitro de l&#39;adaptateur-clathrine Interaction

A major endocytic pathway initiates with the formation of clathrin-coated vesicles (CCVs) that transport cargo from the cell surface to endosomes1-6. CCVs ...

Activation of Apoptosis by Cytoplasmic Microinjection of Cytochrome c

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L&#39;activation de l&#39;apoptose par micro-injection cytoplasmique du cytochrome C</em

Apoptosis, or programmed cell death, is a conserved and highly regulated pathway by which cells die1.  Apoptosis can be triggered when cells encounter a ...

Induction and Testing of Hypoxia in Cell Culture

Induction et les essais de l&#39;hypoxie en culture cellulaire

Hypoxia is defined as the reduction or lack of oxygen in organs, tissues, or cells.  This decrease of oxygen tension can be due to a reduced supply in ...

Dissection of Xenopus laevis Neural Crest for in vitro Explant Culture or in vivo Transplantation

Dissection of Xenopus laevis Neural Crest for in vitro Explant Culture or in vivo Transplantation

Dissection de<em&gt; Xenopus laevis</em&gt; Crête neurale pour<em&gt; In vitro</em&gt; Culture explantation ou<em&gt; In vivo</em&gt; Transplantation

The neural crest (NC) is a transient dorsal neural tube cell population that undergoes an epithelium-to-mesenchyme transition (EMT) at the end of ...

In Vivo Microinjection and Electroporation of Mouse Testis

In Vivo Microinjection and Electroporation of Mouse Testis

In Vivo L&#39;électroporation et microinjection de testicule de souris

This video and article contribution gives a comprehensive description of microinjection and electroporation of mouse testis in vivo. This particular ...

Functional Reconstitution and Channel Activity Measurements of Purified Wildtype and Mutant CFTR Protein

Reconstitution fonctionnelle et Activité du Chan mesures de type sauvage purifiée et Mutant protéine CFTR

The Cystic Fibrosis Transmembrane Conductance Regulator (CFTR) is a unique channel-forming member of the ATP Binding Cassette (ABC) superfamily of ...