Name: testing protozoacidal activity of ligand-lytic peptides against termite gut protozoa in vitro (protozoa culture) and in vivo (microinjection into termite hindgut)
Uploaded: 2010-12-29T17:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Testing Protozoacidal Activity of Ligand-lytic Peptides Against Termite Gut Protozoa in vitro Protozoa Culture and in vivo Microinjection into Termite Hindgut

Ringraziamo il Dr. Allison Richard, ex direttore della struttura peptide LSU per la sintesi ligando fluorescente, il Centro per la Ricerca Interdisciplinaray Biotecnologie, UF per il ligando-litica sintesi del peptide, e l&#39;impianto Microscopio Socolovsky per dare accesso al microscopio a fluorescenza. Il finanziamento è stato fornito dal Programma di Sviluppo SERDP esplorativi (SEED) del Dipartimento della Difesa, Dipartimento di Energia e Agenzia di Protezione Ambientale, il Programma AgCenter squadra Biotecnologie interdisciplinare e lo stato della Louisiana.

Esperimento 1: Estrazione del budello termiti protozoi in condizioni anaerobiche <ol><li> Utilizzare una casella di fan (Laboratori Coy) in un vano portaoggetti per far circolare sempre aria attraverso un disseccante e il tipo D catalizzatore Stak-Paks per controllare l&#39;umidità ei livelli di ossigeno e di eliminare le temperature irregolari. Riempire il vano portaoggetti con un flusso continuo di azoto per 20 a 30 min. Monitorare i livelli di ossigeno con un sensore di ossigeno (C-squared, Inc.) per 1 h. Utilizza...

<ol>
	<li>Hansel, W., Leuschner, C., Enright, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Conjugates+of+lytic+peptides+and+LHRH+or+&#946;CG+target+and+cause+necrosis+of+prostate+cancers+and+metastases.">Conjugates of lytic peptides and LHRH or &#946;CG target and cause necrosis of prostate cancers and metastases.</a> Mol. Cell. Endocrinol. 269, 26-33 (2007).</li><li>Husseneder, C., Collier, R. E., Bourtzis, K., Miller, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Paratransgenesis+for+termite+control.">Paratransgenesis for termite control.</a> Insect Symbiosis. 3, 361-376 (2009).</li><li>Husseneder, C., Grace, J. K., Oishi, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+genetically+engineered+bacteria+(Escherichia+coli)+to+monitor+ingestion,+loss+and+transfer+of+bacteria+in+termites.">Use of genetically engineered bacteria (Escherichia coli) to monitor ingestion, loss and transfer of bacteria in termites.</a> Curr. Microbiol. 50, 119-123 (2005).</li><li>Husseneder, C., Grace, J. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetically+engineered+termite+gut+bacteria+deliver+and+spread+foreign+genes+in+termite+colonies.">Genetically engineered termite gut bacteria deliver and spread foreign genes in termite colonies.</a> Appl. Microbiol. Biotechnol. 68, 360-367 (2005).</li><li>Javadpour, M. M., Juban, M. M., Lo, W. C., Bishop, S. M., Alberty, J. B., Cowell, S. M., Becker, C. L., Mc Laughlin, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=De+novo+antimicrobial+peptides+with+low+mammalian+cell+toxicity.">De novo antimicrobial peptides with low mammalian cell toxicity.</a> J. Med. Chem. 39, 3107-3113 (1996).</li><li>Lai, P. Y., Tamashiro, M., Fuji, J. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Abundance+and+distribution+of+the+three+species+of+symbiotic+protozoa+in+the+hindgut+of+Coptotermes+formosanus+(Isoptera).">Abundance and distribution of the three species of symbiotic protozoa in the hindgut of Coptotermes formosanus (Isoptera).</a> Proc. Haw. Entomol. Soc. 24, 271-276 (1983).</li><li>Leuschner, C., Hansel, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Membrane+disrupting+lytic+peptides+for+cancer+treatments.">Membrane disrupting lytic peptides for cancer treatments.</a> Curr. Pharm. Des. 10, 2299-2310 (2004).</li><li>Mutwiri, G. K., Henk, W. G., Enright, F. M., Corbeil, L. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+the+Antimicrobial+Peptide,+d-Hecate,+on+Trichomonads.">Effect of the Antimicrobial Peptide, d-Hecate, on Trichomonads.</a> J. Parasitol. 86, 1355-1359 (2000).</li><li>Trager, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+cultivation+of+a+cellulose-digesting+flagellate,+Trichomonas+termopsidis,+and+of+certain+other+termite+protozoa.">The cultivation of a cellulose-digesting flagellate, Trichomonas termopsidis, and of certain other termite protozoa.</a> Biol. Bull. 66, 182-190 (1934).</li></ol>

Ligando-litica peptidi sono stati utilizzati con successo per raggiungere in modo efficace e distruggere le cellule tumorali (Hansel e Leuschner 2004, Hansel et al. 2007). Sulla base di questo concetto, abbiamo sviluppato un ligando eptapeptide che si lega alla superficie di protozoi nell&#39;intestino delle termiti di Formosa sotterranee e accoppiato a un peptide litica con l&#39;obiettivo di distruggere queste obbligare cellulosa digerire simbionti nell&#39;intestino delle termiti per raggiungere termite cont...

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		<div>
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		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Sigmacote</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma Aldrich</td>
<td>SL-2</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>EDANS</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Novabiochem</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Anaerobic glove box</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Coy Laboratories, Inc.</td>
<td>Custom made</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Intellus environmental controller</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Percival</td>
<td>I36NL</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>PC-10 Glass micropipette puller</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Narishige Scientific Instrument Lab</td>
<td>PC-10</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Glass needles (Model GD-1, 1 X 900 mm)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Narishige Scientific Instrument Lab</td>
<td>GD-1</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Leitz micromanipulators</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Vermont Optechs, Inc.</td>
<td>ACS01</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Microinjector</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Tritech Research, Inc.</td>
<td>MINJ-1</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Microcaps</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Drummond Scientific Company</td>
<td>1-000-0005</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>LEICA fluorescence imaging system</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Leica</td>
<td>DMRxA2</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>LEICA dissecting scope</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Leica</td>
<td>MZ16</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>LEICA microscope</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Leica</td>
<td>DMLB</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Olympus dissecting scope</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Olympus</td>
<td>SZ61</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

testing protozoacidal activity of ligand-lytic peptides against termite gut protozoa in vitro (protozoa culture) and in vivo (microinjection into termite hindgut)

Stiamo sviluppando un nuovo approccio per il controllo delle termiti sotterranee che avrebbe portato alla ridotta dipendenza l&#39;uso di pesticidi chimici. Termiti sotterranee dipendono da protozoi del hindguts dei lavoratori di digerire in modo efficiente legno. Peptidi litici hanno dimostrato di uccidere una varietà di protozoi parassiti (Mutwiri et al. 2000) e anche protozoi nell&#39;intestino della termite Formosa sotterraneo, Coptotermes formosanus (Husseneder e Collier 2009). Peptidi litici sono parte del sistema immunitario aspecifico degli eucarioti, e distruggere le membrane di microrganismi (Leuschner e Hansel 2004). La maggior parte dei peptidi litici non sono suscettibili di nuocere eucarioti superiori, perché non influiscono sul elettricamente neutro colesterolo contenenti le membrane delle cellule di eucarioti superiori (Javadpour et al. 1996). Azione del peptide litica può essere mirata a specifici tipi cellulari con l&#39;aggiunta di un legante. Per esempio, Hansel et al. (2007) ha riferito che peptidi litici coniugati con ligandi dei recettori di membrana di cellule di cancro potrebbero essere utilizzati per distruggere le cellule tumorali del seno, mentre peptidi litici da solo o coniugato con non specifici peptidi non sono stati efficaci. Peptidi litici inoltre sono stati coniugati con ormoni umani che si legano ai recettori sulle cellule tumorali per la distruzione mirata delle cellule del cancro alla prostata e ai testicoli (Leuschner e Hansel 2004). In questo articolo presentiamo le tecniche utilizzate per dimostrare l&#39;attività protozoacidal di un peptide litico (Ecate), accoppiato ad un ligando eptapeptide che si lega alla membrana superficiale di protozoi dall&#39;intestino di termiti sotterranee Formosa. Queste tecniche includono estirpazione dell&#39;intestino dai lavoratori delle termiti, la cultura anaerobica di budello protozoi (Pseudotrichonympha grassii, Holomastigotoides hartmanni, Spirotrichonympha leidyi), la conferma microscopici che il legante marcato con un colorante fluorescente si lega l&#39;intestino termite protozoi e altri protozoi a vita libera ma non di batteri o tessuto intestinale. Abbiamo anche dimostrato che il legante stesso accoppiato ad un peptide litici uccide in modo efficiente intestino termite protozoi in vitro (cultura protozoi) e in vivo (microiniezione in hindgut dei lavoratori), ma è meno bacteriacidal che il peptide litica da sola. La perdita di protozoi porta alla morte delle termiti in meno di due settimane. In futuro, saremo geneticamente ingegnere microrganismi che possono sopravvivere nel hindgut termiti e diffondere attraverso una colonia di termiti come &quot;cavalli di Troia&quot; per esprimere ligando-litica peptidi che avrebbero ucciso i protozoi nell&#39;intestino delle termiti e successivamente uccidere le termiti nella colonia . Ligando-litica peptidi potrebbe anche essere utile per lo sviluppo di farmaci contro protozoi parassiti.

Watch this Scientific Journal Video about Testing Protozoacidal Activity of Ligand-lytic Peptides Against Termite Gut Protozoa in vitro Protozoa Culture and in vivo Microinjection into Termite Hindgut

Testing Protozoacidal Activity of Ligand-lytic Peptides Against Termite Gut Protozoa in vitro Protozoa Culture and in vivo Microinjection into Termite Hindgut

Vi presentiamo le procedure per dimostrare che ligandi si legano alla membrana superficiale della cellulosa digestione protozoi nell&#39;intestino delle termiti di Formosa sotterraneo usando la microscopia a fluorescenza e che ligandi accoppiato con peptidi litici uccidere questi protozoi<em&gt; In vitro</em&gt; (Anaerobica cultura protozoi) e<em&gt; In vivo</em&gt; (Iniezione nel hindgut termite).

Testing Protozoacidal di Ligand-litica Peptidi Contro Gut Termite protozoi In vitro (Cultura protozoi) e In vivo (Microiniezione in Termite hindgut)

We are developing a novel approach to subterranean termite control that would lead to reduced reliance on the use of chemical pesticides. Subterranean ...

Research

JoVE Journal

Biology

Testing Protozoacidal Activity of Ligand-lytic Peptides Against Termite Gut Protozoa in vitro (Protozoa Culture) and in vivo (Microinjection into Termite Hindgut)

Extracting DNA from the Gut Microbes of the Termite (Zootermopsis Angusticollis) and Visualizing Gut Microbes

Extracting DNA from the Gut Microbes of the Termite Zootermopsis Angusticollis and Visualizing Gut Microbes

Estrazione del DNA da microbi intestinali della Termite (Zootermopsis Angusticollis) e visualizzare microbi intestinali

Termites are among the few animals known to have the capacity to subsist solely by consuming wood.  The termite gut tract contains a dense and ...

Ricerca

Biologia

Investigating the Microbial Community in the Termite Hindgut - Interview

Indagare la comunità microbica nel hindgut Termite - Intervista

Jared Leadbetter explains why the termite-gut microbial community is an excellent system for studying the complex interactions between microbes.     The ...

Layers of Symbiosis - Visualizing the Termite Hindgut Microbial Community

Livelli di simbiosi - Visualizzazione della Comunità hindgut Termite microbica

Jared Leadbetter takes us for a nature walk through the diversity of life resident in the termite hindgut - a microenvironment containing 250 different ...

Testing the Physiological Barriers to Viral Transmission in Aphids Using Microinjection

Test della barriere fisiologiche di trasmissione virale in Afidi Utilizzando Microiniezione

Potato loafroll virus (PLRV), from the family Luteoviridae infects solanaceous plants. It is transmitted by aphids, primarily, the green peach aphid. When ...

In vivo and in vitro Studies of Adaptor-clathrin Interaction

In vivo and in vitro Studies of Adaptor-clathrin Interaction

In vivo e in vitro di adattatore-clatrina Interazione

A major endocytic pathway initiates with the formation of clathrin-coated vesicles (CCVs) that transport cargo from the cell surface to endosomes1-6. CCVs ...

Activation of Apoptosis by Cytoplasmic Microinjection of Cytochrome c

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Attivazione di apoptosi da Microiniezione citoplasmatici del Citocromo C</em

Apoptosis, or programmed cell death, is a conserved and highly regulated pathway by which cells die1.  Apoptosis can be triggered when cells encounter a ...

Induction and Testing of Hypoxia in Cell Culture

Induzione e test di ipossia in coltura cellulare

Hypoxia is defined as the reduction or lack of oxygen in organs, tissues, or cells.  This decrease of oxygen tension can be due to a reduced supply in ...

Dissection of Xenopus laevis Neural Crest for in vitro Explant Culture or in vivo Transplantation

Dissection of Xenopus laevis Neural Crest for in vitro Explant Culture or in vivo Transplantation

Dissezione dei<em&gt; Xenopus laevis</em&gt; Cresta neurale per<em&gt; In vitro</em&gt; Espianto Cultura o<em&gt; In vivo</em&gt; Trapianto

The neural crest (NC) is a transient dorsal neural tube cell population that undergoes an epithelium-to-mesenchyme transition (EMT) at the end of ...

In Vivo Microinjection and Electroporation of Mouse Testis

In Vivo Microinjection and Electroporation of Mouse Testis

In Vivo Microiniezione e Elettroporazione di mouse Testicolo

This video and article contribution gives a comprehensive description of microinjection and electroporation of mouse testis in vivo. This particular ...

Functional Reconstitution and Channel Activity Measurements of Purified Wildtype and Mutant CFTR Protein

Ricostituzione funzionale e attività Canale Misure di purificata di tipo selvatico e mutante CFTR proteine

The Cystic Fibrosis Transmembrane Conductance Regulator (CFTR) is a unique channel-forming member of the ATP Binding Cassette (ABC) superfamily of ...