Name: testing protozoacidal activity of ligand-lytic peptides against termite gut protozoa in vitro (protozoa culture) and in vivo (microinjection into termite hindgut)
Uploaded: 2010-12-29T17:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Testing Protozoacidal Activity of Ligand-lytic Peptides Against Termite Gut Protozoa in vitro Protozoa Culture and in vivo Microinjection into Termite Hindgut

Vi tackar Dr Allison Richard, tidigare chef för LSU peptiden anläggning för fluorescerande ligand syntesen, den Interdisciplinaray Centrum för bioteknisk forskning, UF för ligand-lytisk peptidsyntes och Socolovsky Mikroskop anläggningen för att ge tillgång till fluorescens mikroskop. Finansiering gavs av SERDP undersökande utvecklingsprogram (SEED) av försvarsdepartementet, Department of Energy och Naturvårdsverket, bioteknik AgCenter tvärvetenskaplig grupp Program och delstaten Louisiana.

Experiment 1: Utvinning av termit tarmen protozoer under anaeroba förhållanden <ol><li> Använd en fläkt låda (Coy Laboratories) i en handskfacket att ständigt cirkulera luft genom ett torkmedel och typ D katalysator Stak-Paks att styra luftfuktighet och syrehalt och eliminera ojämna temperaturer. Fyll i handskfacket med en kontinuerlig ström av kväve i 20 till 30 min. Övervaka syrenivåer med en syresensor (C-kvadrat, Inc.), 1 h. Använd kväve för att nå och upprätthålla anaeroba förhållanden när det...

<ol>
	<li>Hansel, W., Leuschner, C., Enright, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Conjugates+of+lytic+peptides+and+LHRH+or+&#946;CG+target+and+cause+necrosis+of+prostate+cancers+and+metastases.">Conjugates of lytic peptides and LHRH or &#946;CG target and cause necrosis of prostate cancers and metastases.</a> Mol. Cell. Endocrinol. 269, 26-33 (2007).</li><li>Husseneder, C., Collier, R. E., Bourtzis, K., Miller, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Paratransgenesis+for+termite+control.">Paratransgenesis for termite control.</a> Insect Symbiosis. 3, 361-376 (2009).</li><li>Husseneder, C., Grace, J. K., Oishi, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+genetically+engineered+bacteria+(Escherichia+coli)+to+monitor+ingestion,+loss+and+transfer+of+bacteria+in+termites.">Use of genetically engineered bacteria (Escherichia coli) to monitor ingestion, loss and transfer of bacteria in termites.</a> Curr. Microbiol. 50, 119-123 (2005).</li><li>Husseneder, C., Grace, J. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetically+engineered+termite+gut+bacteria+deliver+and+spread+foreign+genes+in+termite+colonies.">Genetically engineered termite gut bacteria deliver and spread foreign genes in termite colonies.</a> Appl. Microbiol. Biotechnol. 68, 360-367 (2005).</li><li>Javadpour, M. M., Juban, M. M., Lo, W. C., Bishop, S. M., Alberty, J. B., Cowell, S. M., Becker, C. L., Mc Laughlin, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=De+novo+antimicrobial+peptides+with+low+mammalian+cell+toxicity.">De novo antimicrobial peptides with low mammalian cell toxicity.</a> J. Med. Chem. 39, 3107-3113 (1996).</li><li>Lai, P. Y., Tamashiro, M., Fuji, J. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Abundance+and+distribution+of+the+three+species+of+symbiotic+protozoa+in+the+hindgut+of+Coptotermes+formosanus+(Isoptera).">Abundance and distribution of the three species of symbiotic protozoa in the hindgut of Coptotermes formosanus (Isoptera).</a> Proc. Haw. Entomol. Soc. 24, 271-276 (1983).</li><li>Leuschner, C., Hansel, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Membrane+disrupting+lytic+peptides+for+cancer+treatments.">Membrane disrupting lytic peptides for cancer treatments.</a> Curr. Pharm. Des. 10, 2299-2310 (2004).</li><li>Mutwiri, G. K., Henk, W. G., Enright, F. M., Corbeil, L. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+the+Antimicrobial+Peptide,+d-Hecate,+on+Trichomonads.">Effect of the Antimicrobial Peptide, d-Hecate, on Trichomonads.</a> J. Parasitol. 86, 1355-1359 (2000).</li><li>Trager, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+cultivation+of+a+cellulose-digesting+flagellate,+Trichomonas+termopsidis,+and+of+certain+other+termite+protozoa.">The cultivation of a cellulose-digesting flagellate, Trichomonas termopsidis, and of certain other termite protozoa.</a> Biol. Bull. 66, 182-190 (1934).</li></ol>

Ligand-lytisk peptider har med framgång använts för att effektivt rikta och förstöra cancerceller (Hans och Leuschner 2004, Hansel et al. 2007). Utifrån detta koncept har vi utvecklat en heptapeptid ligand som binder till ytan av protozoer i tarmen av Formosan underjordiska termiter och kopplat den till en lytisk peptid med målet att förstöra dessa obligata cellulosa-smälta symbionter i tarmen av termiter att uppnå termit kontroll (Husseneder och Collier 2009). Vi bekräf...

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Sigmacote</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma Aldrich</td>
<td>SL-2</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>EDANS</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Novabiochem</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Anaerobic glove box</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Coy Laboratories, Inc.</td>
<td>Custom made</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Intellus environmental controller</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Percival</td>
<td>I36NL</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>PC-10 Glass micropipette puller</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Narishige Scientific Instrument Lab</td>
<td>PC-10</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Glass needles (Model GD-1, 1 X 900 mm)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Narishige Scientific Instrument Lab</td>
<td>GD-1</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Leitz micromanipulators</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Vermont Optechs, Inc.</td>
<td>ACS01</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Microinjector</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Tritech Research, Inc.</td>
<td>MINJ-1</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Microcaps</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Drummond Scientific Company</td>
<td>1-000-0005</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>LEICA fluorescence imaging system</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Leica</td>
<td>DMRxA2</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>LEICA dissecting scope</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Leica</td>
<td>MZ16</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>LEICA microscope</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Leica</td>
<td>DMLB</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Olympus dissecting scope</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Olympus</td>
<td>SZ61</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

testing protozoacidal activity of ligand-lytic peptides against termite gut protozoa in vitro (protozoa culture) and in vivo (microinjection into termite hindgut)

Vi utvecklar en ny metod för att underjordiska termit kontroll som skulle leda till minskat beroende av användningen av kemiska bekämpningsmedel. Underjordiska termiter är beroende av protozoer i hindguts arbetstagare att effektivt smälta trä. Lytisk peptider har visat att döda en mängd encelliga djur parasiter (Mutwiri et al. 2000) och även protozoer i tarmen av Formosan underjordiska termit, Coptotermes formosanus (Husseneder och Collier 2009). Lytisk peptider är en del av ospecifika immunförsvaret hos eukaryoter, och förstöra membran av mikroorganismer (Leuschner och Hans 2004). De flesta lytisk peptider sannolikt inte kommer att skada högre eukaryoter, eftersom de inte påverkar den elektriskt neutrala kolesterol-innehållande cellmembran högre eukaryoter (Javadpour et al. 1996). Lytisk peptid åtgärder kan riktas till specifika celltyper genom tillsats av en ligand. Till exempel, rapporterade Hansel et al. (2007) att lytisk peptider konjugerat med membran cancer cell receptor ligander kan användas för att förstöra cellerna bröstcancer, medan lytisk peptider ensam eller konjugerat med icke-specifika peptider inte var effektiva. Lytisk peptider har också konjugerad till mänskliga hormoner som binder till receptorer på tumörceller för riktade förstörelse av prostata-och testikelcancer cancerceller (Leuschner och Hans 2004). I denna artikel presenterar vi tekniker som används för att demonstrera protozoacidal aktiviteten hos en lytisk peptid (Hecate) kopplad till en heptapeptid ligand som binder till ytan membranet för protozoer från tarmen av Formosan underjordiska termit. Dessa tekniker innefattar utrotande av tarmen från termit arbetare, anaerob kultur tarmen protozoer (Pseudotrichonympha grassii, Holomastigotoides hartmanni, Spirotrichonympha leidyi), mikroskopiska bekräftelse på att liganden märkt med en fluorescerande färg binder till termit tarmen protozoer och andra viltlevande protozoer men inte bakterier eller tarmen vävnad. Vi visar också att samma liganden kopplad till en lytisk peptid effektivt dödar termit tarmen protozoer in vitro (protozoer kultur) och in vivo (mikroinjektion i hindgut för arbetstagare), men är mindre bacteriacidal än lytisk peptid ensam. Förlusten av protozoer leder till döden av termiter på mindre än två veckor. I framtiden kommer vi ingenjör genetiskt mikroorganismer som kan överleva i termiter hindgut och sprids via en termit koloni som &quot;trojanska hästar&quot; för att uttrycka ligand-lytisk peptider som skulle döda protozoer i termiter tarmen och därefter döda termiter i kolonin . Ligand-lytisk peptider även vara användbar för utveckling av läkemedel mot protozo parasiter.

Watch this Scientific Journal Video about Testing Protozoacidal Activity of Ligand-lytic Peptides Against Termite Gut Protozoa in vitro Protozoa Culture and in vivo Microinjection into Termite Hindgut

Testing Protozoacidal Activity of Ligand-lytic Peptides Against Termite Gut Protozoa in vitro Protozoa Culture and in vivo Microinjection into Termite Hindgut

Vi presenterar förfaranden för att påvisa att ligander binder till ytan membranet i protozoer cellulosa-smälta protozoer i tarmen av Formosan underjordiska termiter med fluorescerande mikroskopi och att ligander tillsammans med lytisk peptider dödar dessa<em&gt; In vitro</em&gt; (Anaerob protozoer kultur) och<em&gt; In vivo</em&gt; (Injektion i termit hindgut).

Provning Protozoacidal aktivitet Ligand-lytisk Peptider Mot Termite Protozoa Gut In vitro (Protozoa Kultur) och In vivo (Mikroinjektion i Termite hindgut)

We are developing a novel approach to subterranean termite control that would lead to reduced reliance on the use of chemical pesticides. Subterranean ...

Research

JoVE Journal

Biology

Testing Protozoacidal Activity of Ligand-lytic Peptides Against Termite Gut Protozoa in vitro (Protozoa Culture) and in vivo (Microinjection into Termite Hindgut)

Extracting DNA from the Gut Microbes of the Termite (Zootermopsis Angusticollis) and Visualizing Gut Microbes

Extracting DNA from the Gut Microbes of the Termite Zootermopsis Angusticollis and Visualizing Gut Microbes

Extrahera DNA från tarmen Mikroberna i Termite (Zootermopsis Angusticollis) och visualisering Gut Mikroberna

Termites are among the few animals known to have the capacity to subsist solely by consuming wood.  The termite gut tract contains a dense and ...

Investigating the Microbial Community in the Termite Hindgut - Interview

Undersöka den mikrobiella i Termite hindgut - Intervju

Jared Leadbetter explains why the termite-gut microbial community is an excellent system for studying the complex interactions between microbes.     The ...

Layers of Symbiosis - Visualizing the Termite Hindgut Microbial Community

Lager av Symbios - Visualisera Termite gemenskapen hindgut Microbial

Jared Leadbetter takes us for a nature walk through the diversity of life resident in the termite hindgut - a microenvironment containing 250 different ...

Testing the Physiological Barriers to Viral Transmission in Aphids Using Microinjection

Testa Fysiologiska Hinder för virustransmission i Bladlöss Använda mikroinjektion

Potato loafroll virus (PLRV), from the family Luteoviridae infects solanaceous plants. It is transmitted by aphids, primarily, the green peach aphid. When ...

In vivo and in vitro Studies of Adaptor-clathrin Interaction

In vivo and in vitro Studies of Adaptor-clathrin Interaction

In vivo och in vitro studier av Adapter-clathrin Interaktion

A major endocytic pathway initiates with the formation of clathrin-coated vesicles (CCVs) that transport cargo from the cell surface to endosomes1-6. CCVs ...

Activation of Apoptosis by Cytoplasmic Microinjection of Cytochrome c

Activation of Apoptosis by Cytoplasmic Microinjection of Cytochrome c

Aktivering av apoptos genom cytoplasmiska mikroinjektion av cytokrom C</em

Apoptosis, or programmed cell death, is a conserved and highly regulated pathway by which cells die1.  Apoptosis can be triggered when cells encounter a ...

Induction and Testing of Hypoxia in Cell Culture

Induktion och testning av Hypoxi i cellodling

Hypoxia is defined as the reduction or lack of oxygen in organs, tissues, or cells.  This decrease of oxygen tension can be due to a reduced supply in ...

Dissection of Xenopus laevis Neural Crest for in vitro Explant Culture or in vivo Transplantation

Dissection of Xenopus laevis Neural Crest for in vitro Explant Culture or in vivo Transplantation

Dissekering av<em&gt; Xenopus laevis</em&gt; Neural Crest för<em&gt; In vitro</em&gt; Explantation kultur eller<em&gt; In vivo</em&gt; Transplantation

The neural crest (NC) is a transient dorsal neural tube cell population that undergoes an epithelium-to-mesenchyme transition (EMT) at the end of ...

In Vivo Microinjection and Electroporation of Mouse Testis

In Vivo Microinjection and Electroporation of Mouse Testis

In vivo mikroinjektion och elektroporation av Mus Testikel

This video and article contribution gives a comprehensive description of microinjection and electroporation of mouse testis in vivo. This particular ...

Functional Reconstitution and Channel Activity Measurements of Purified Wildtype and Mutant CFTR Protein

Funktionell beredning och Kanalaktivitets Mätningar av renat Vildtyps och Mutant CFTR Protein

The Cystic Fibrosis Transmembrane Conductance Regulator (CFTR) is a unique channel-forming member of the ATP Binding Cassette (ABC) superfamily of ...