Name: strategies for study of neuroprotection from cold-preconditioning
Uploaded: 2010-09-02T17:30:00
Duration: 16 min 27 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Strategies for Study of Neuroprotection from Cold-preconditioning at JoVE.com

עבודה זו מומנה על ידי תרומות של המכון הלאומי להפרעות נוירולוגיות ושבץ (NS-19108), קרן מחקר מיגרנה, וקרן הלבן ריצ&#39;רד פ &#39;Kraig. גב &#39;פ&#39; מרשה Kraig סייעו בהכנת התקשורת בתרבות ותחזוקה של תרבויות פרוסה. אנו מודים ילנה גרינברג הערות ותיקונים אותה על גרסה סופית של מאמר זה.

<ol>
	<li>Aptowicz, C. O., Kunkler, P. E., Kraig, R. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Homeostatic+plasticity+in+hippocampal+slice+cultures+involves+changes+in+voltage-gated+Na++channel+expression.">Homeostatic plasticity in hippocampal slice cultures involves changes in voltage-gated Na+ channel expression.</a> Brain Res. 998, 155-163 (2004).</li><li>Beattie, E. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Control+of+synaptic+strength+by+glial+TNFalpha.">Control of synaptic strength by glial TNFalpha.</a> Science. 295, 2282-2285 (2002).</li><li>Breder, C. D., Dewitt, D., Kraig, R. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+inducible+cyclooxygenase+in+rat+brain.">Characterization of inducible cyclooxygenase in rat brain.</a> J Comp Neurol. 355, 296-315 (1995).</li><li>Caggiano, A. O., Breder, C. D., Kraig, R. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-term+elevation+of+cyclooxygenase-2,+but+not+lipoxygenase,+in+regions+synaptically+distant+from+spreading+depression.">Long-term elevation of cyclooxygenase-2, but not lipoxygenase, in regions synaptically distant from spreading depression.</a> J Comp Neurol. 376, 447-462 (1996).</li><li>Caggiano, A. O., Kraig, R. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Eicosanoids+and+nitric+oxide+influence+induction+of+reactive+gliosis+from+spreading+depression+in+microglia+but+not+astrocytes.">Eicosanoids and nitric oxide influence induction of reactive gliosis from spreading depression in microglia but not astrocytes.</a> J Comp Neurol. 369, 93-108 (1996).</li><li>Caggiano, A. O., Kraig, R. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prostaglandin+E2+and+4-aminopyridine+prevent+the+lipopolysaccharide-induced+outwardly+rectifying+potassium+current+and+interleukin-1beta+production+in+cultured+rat+microglia.">Prostaglandin E2 and 4-aminopyridine prevent the lipopolysaccharide-induced outwardly rectifying potassium current and interleukin-1beta production in cultured rat microglia.</a> J Neurochem. 70, 2357-2368 (1998).</li><li>Caggiano, A. O., Kraig, R. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prostaglandin+E+receptor+subtypes+in+cultured+rat+microglia+and+their+role+in+reducing+lipopolysaccharide-induced+interleukin-1beta+production.">Prostaglandin E receptor subtypes in cultured rat microglia and their role in reducing lipopolysaccharide-induced interleukin-1beta production.</a> J Neurochem. 72, 565-575 (1999).</li><li>Calabrese, E. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drug+therapies+for+stroke+and+traumatic+brain+injury+often+display+U-shaped+dose+responses:+occurrence,+mechanisms,+and+clinical+implications.">Drug therapies for stroke and traumatic brain injury often display U-shaped dose responses: occurrence, mechanisms, and clinical implications.</a> Crit Rev Toxicol. 38, 557-577 (2008).</li><li>Calabrese, E. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biological+stress+response+terminology:+Integrating+the+concepts+of+adaptive+response+and+preconditioning+stress+within+a+hormetic+dose-response+framework.">Biological stress response terminology: Integrating the concepts of adaptive response and preconditioning stress within a hormetic dose-response framework.</a> Toxicol Appl Pharmacol. 222, 122-128 (2007).</li><li>Calabrese, E. J., Baldwin, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hormesis:+the+dose-response+revolution.">Hormesis: the dose-response revolution.</a> Annu Rev Pharmacol Toxicol. 43, 175-197 (2003).</li><li>Hansel, N. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+of+CD4++T-cell+gene+expression+in+allergic+subjects+using+two+different+microarray+platforms.">Analysis of CD4+ T-cell gene expression in allergic subjects using two different microarray platforms.</a> Allergy. 63, 366-369 (2008).</li><li>Hulse, R. E., Kunkler, P. E., Fedynyshyn, J. P., Kraig, R. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimization+of+multiplexed+bead-based+cytokine+immunoassays+for+rat+serum+and+brain+tissue.">Optimization of multiplexed bead-based cytokine immunoassays for rat serum and brain tissue.</a> J Neurosci Methods. 136, 87-98 (2004).</li><li>Hulse, R. E., Swenson, W. G., Kunkler, P. E., White, D. M., Kraig, R. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Monomeric+IgG+is+neuroprotective+via+enhancing+microglial+recycling+endocytosis+and+TNF-alpha.">Monomeric IgG is neuroprotective via enhancing microglial recycling endocytosis and TNF-alpha.</a> J Neurosci. 28, 12199-12211 (2008).</li><li>Hulse, R. E., Winterfield, J., Kunkler, P. E., Kraig, R. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Astrocytic+clasmatodendrosis+in+hippocampal+organ+culture.">Astrocytic clasmatodendrosis in hippocampal organ culture.</a> Glia. 33, 169-179 (2001).</li><li>Kraig, R. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=TNF-alpha+and+Microglial+Hormetic+Involvement+in+Neurological+Health+and+Migraine.">TNF-alpha and Microglial Hormetic Involvement in Neurological Health and Migraine.</a> International Dose-Respose Society. , (2010).</li><li>Kunkler, P. E., Hulse, R. E., Kraig, R. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multiplexed+cytokine+protein+expression+profiles+from+spreading+depression+in+hippocampal+organotypic+cultures.">Multiplexed cytokine protein expression profiles from spreading depression in hippocampal organotypic cultures.</a> J Cereb Blood Flow Metab. 24, 829-839 (2004).</li><li>Kunkler, P. E., Hulse, R. E., Schmitt, M. W., Nicholson, C., Kraig, R. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optical+current+source+density+analysis+in+hippocampal+organotypic+culture+shows+that+spreading+depression+occurs+with+uniquely+reversing+currents.">Optical current source density analysis in hippocampal organotypic culture shows that spreading depression occurs with uniquely reversing currents.</a> J Neurosci. 25, 3952-3961 (2005).</li><li>Kunkler, P. E., Kraig, R. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reactive+astrocytosis+from+excitotoxic+injury+in+hippocampal+organ+culture+parallels+that+seen+in+vivo.">Reactive astrocytosis from excitotoxic injury in hippocampal organ culture parallels that seen in vivo.</a> J Cereb Blood Flow Metab. 17, 26-43 (1997).</li><li>Kunkler, P. E., Kraig, R. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Calcium+waves+precede+electrophysiological+changes+of+spreading+depression+in+hippocampal+organ+cultures.">Calcium waves precede electrophysiological changes of spreading depression in hippocampal organ cultures.</a> J Neurosci. 18, 3416-3425 (1998).</li><li>Kunkler, P. E., Kraig, R. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=P/Q+Ca2++channel+blockade+stops+spreading+depression+and+related+pyramidal+neuronal+Ca2++rise+in+hippocampal+organ+culture.">P/Q Ca2+ channel blockade stops spreading depression and related pyramidal neuronal Ca2+ rise in hippocampal organ culture.</a> Hippocampus. 14, 356-367 (2004).</li><li>Lambertsen, K. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microglia+protect+neurons+against+ischemia+by+synthesis+of+tumor+necrosis+factor.">Microglia protect neurons against ischemia by synthesis of tumor necrosis factor.</a> J Neurosci. 29, 1319-1330 (2009).</li><li>Lee, J. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulator+of+G-protein+signaling+10+promotes+dopaminergic+neuron+survival+via+regulation+of+the+microglial+inflammatory+response.">Regulator of G-protein signaling 10 promotes dopaminergic neuron survival via regulation of the microglial inflammatory response.</a> J Neurosci. 28, 8517-8528 (2008).</li><li>Mattson, M. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hormesis+and+disease+resistance:+activation+of+cellular+stress+response+pathways.">Hormesis and disease resistance: activation of cellular stress response pathways.</a> Hum Exp Toxicol. 27, 155-162 (2008).</li><li>Ning, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Systematic+and+simultaneous+gene+profiling+of+84+drug-metabolizing+genes+in+primary+human+hepatocytes.">Systematic and simultaneous gene profiling of 84 drug-metabolizing genes in primary human hepatocytes.</a> J Biomol Screen. 13, 194-201 (2008).</li><li>Oppenheim, J., Feldman, M., Oppenheim, J. J., Feldman, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> in Cytokine Reference. 1, (2001).</li><li>Pfaffl, M. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+mathematical+model+for+relative+quantification+in+real-time+RT-PCR.">A new mathematical model for relative quantification in real-time RT-PCR.</a> Nucleic Acids Res. 29, e45-e45 (2001).</li><li>Stellwagen, D., Beattie, E. C., Seo, J. Y., Malenka, R. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+regulation+of+AMPA+receptor+and+GABA+receptor+trafficking+by+tumor+necrosis+factor-alpha.">Differential regulation of AMPA receptor and GABA receptor trafficking by tumor necrosis factor-alpha.</a> J Neurosci. 25, 3219-3228 (2005).</li><li>Stellwagen, D., Malenka, R. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synaptic+scaling+mediated+by+glial+TNF-alpha.">Synaptic scaling mediated by glial TNF-alpha.</a> Nature. 440, 1054-1059 (2006).</li><li>Streit, W. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microglia+as+neuroprotective,+immunocompetent+cells+of+the+CNS.">Microglia as neuroprotective, immunocompetent cells of the CNS.</a> Glia. 40, 133-139 (2002).</li><li>Wilde, G. J., Pringle, A. K., Sundstrom, L. E., Mann, D. A., Iannotti, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Attenuation+and+augmentation+of+ischaemia-related+neuronal+death+by+tumour+necrosis+factor-alpha+in+vitro.">Attenuation and augmentation of ischaemia-related neuronal death by tumour necrosis factor-alpha in vitro.</a> Eur J Neurosci. 12, 3863-3870 (2000).</li></ol>

אין ניגודי אינטרסים הכריז.

שני מושגים חשובים ביסודו חשוב התיחום של מערכת איתות ציטוקינים המעורבים neuroprotection קר נפשית מראש מומחשים איורים 6 ו -7. ראשית, ציטוקינים הם ריכוז נמוך מאוד מולקולות איתות במוח הנורמלי. עם זאת, שינויים פיזיולוגיים ריכוז ציטוקינים יש פוטנציאל עצום לשנות את מבנה המוח ותפקודו (כלומר, פנוטיפ) בגלל היכולת שלהם לשנות את ביטוי הגנים (איור 6). יתר על כן, הציטוקינים הם מיותרים מאוד pleiotropic בכך ציטוקינים מרובים יכולה להיות השפעה דומה ציטוקין בודד יכולה להיות השפעה משתנה (איור 7). לכן, כדי לקבוע במדויק את המולדת ציטוקינים-בסיסים neuroprotection מהקור-נפשית מראש (או גירויים אחרים נפשית מראש פיזיולוגיים), ניתוח מורכב של משתנים הקשורים איתות חייבת להיות נחושה. מטרה זו מושגת באמצעות אסטרטגיות assay multiplexed. זה יהיה להקים את ציטוקינים &quot;חתימה&quot; של neuroprotection קר נפשית מראש. <img src="/files/ftp_upload/2192/2192fig6.jpg" alt="איור 6" /> איור 6. כוחה של ציטוקינים איתות במוח. האיורים להעביר את הכוח איתות עצום של ריכוזים פיזיולוגיים של ציטוקינים במוח לעומת ריכוזי מוכרת היטב עמיתיהם אחרים. ריכוז מיוצג ההופכי של המרחק, החל זיף חתול בודד כנקודת התייחסות. נתרן (מ -1 10 מאויר על ידי גרגר פלפל) ואשלגן (10 מ -3 מאויר על ידי עגבניה) נמצאים במרחב ביניים המוח ברמות של סביב 150 ו - 3 מ&quot;מ, בהתאמה, יש מוכרים היטב תפקידים תאים עצביים לתפקד אלקטרו. כמו כן, ה-pH (כלומר, ~ 10 -7 M רמות של יוני מימן ואייר כמו 780 מטרים לאורך שפת האגם של שיקגו) וסידן (כלומר, ~ 10 -8 M רמות כפי שמוצג 7.8 ק&quot;מ לראות תמונת לווין גוגל שפת האגם של שיקגו מ מקורמיק המקום לנקודה חרטום בהייד פארק ליד אוניברסיטת שיקגו). בנוסף, העצביים המשוחררים לחלל ביניים על ריכוזים אלה משפיעים על הפעילות המקומית אזור במוח. לעומת זאת, ציטוקינים (כפי שמוצג המרחק מכדור הארץ למאדים) יכול לשנות את תפקוד המוח בריכוזים יותר מעשר מיליון פעמים פחות. <img src="/files/ftp_upload/2192/2192fig7.jpg" alt="איור 7" /> איור 7. איתות אינטראקטיבית של מסלולים ציטוקינים מולדים. ציטוקינים הם מיותרים מאוד pleiotropic בכך ציטוקינים מרובים יכולה להיות השפעה דומה ציטוקין בודד יכולה להיות השפעה משתנה. גיוון כזה נובעת איתות אינטראקטיביים מורכבים המתרחשת ברמה של ligands, קולטנים, ו phosphoproteins. מורכבות נוספת נובעת מהעובדה כי המוח מורכב של סוגי תאים שונים, שכל אחד מהם מסוגל ציטוקינים תא קולטן ספציפי מולדת, ושינויים phosphoprotein בנושא. לשם המחשה כאן, רק ציטוקינים מולדת איתות המסלולים (הנגזרות מחקרים תא החיסון) מוצגים. לשם הפשטות, המוח הוא נמשך כמו תא בודד (קו לבן) מראה את יחסי הגומלין פוטנציאל מולד ציטוקינים (IL-1α ו-IL-1β (המכונה כאן כמו IL-1α / β), TNF-α, IL-6, IFN-γ ו IL-10), קולטנים (IL-1R1, TNFR1, IL-6/gp130, IFNγR, ו-IL-10R), ו phosphoproteins (כלומר, קינאזות ERK1 / 2, p38 (p38-MAPK) ו JNK) ואת גורמי תעתוק (ATF-2, NFκB ו STAT3). לדוגמה, TNF-α אותות דרך TNFR1 כדי JNK, p38 ו-MAPK ERK1 / 2, אשר מפעילה ביטוי גנים באמצעות ATF-2. TNF-α גם משנה את ביטוי הגנים ישירות באמצעות הפעלת NFκB. יחד, הפעלה של גורמי שעתוק אלה מעוררות מוגברת (חץ) וירידה (סוף בוטה) ביטוי של ציטוקינים הקולטנים שלהם כפי שצוין. חשוב לציין, מסלולים אלה מראים כי שינויים ציטוקינים אחד (למשל, TNF-α) ההשפעה של ייצור (למשל, IL-1β) ציטוקינים אחרים. לכן, כדי להקים במדויק את ציטוקינים-בסיסים neuroprotection מהקור-נפשית מראש, ניתוח מורכב של משתנים הקשורים איתות חייבת להיות נחושה. זה יהיה להקים את ציטוקינים מולדת &quot;חתימה&quot; של קר נפשית מראש. (תמונה נערך מנתוני התייחסות # 25).

הכנת תרבויות Slice <table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> שם מגיב / ציוד </td><td> חברה </td><td> קטלוג / דגם מספר </td><td> תגובות </td></tr><tr><td> Millicell-CM בתרבית רקמה מוסיף (30 מ&quot;מ) </td><td> תרמו פישר </td><td> PICM0-3050 </td><td></td></tr><tr><td> בינוני בסל הנשר </td><td> Invitrogen </td><td> 21010 </td><td></td></tr><tr><td> ארל s פתרון מאוזן מלח </td><td> סיגמא </td><td> E2888 </td><td></td></tr><tr><td> סוס בסרום </td><td> Invitrogen </td><td> 26050-088 </td><td></td></tr><tr><td> Glutamax </td><td> Invitrogen </td><td> 35050 </td><td></td></tr><tr><td> גנטמיצין </td><td> Invitrogen </td><td> 15710-064 </td><td></td></tr><tr><td> Fungizone </td><td> Invitrogen </td><td> 15295 </td><td></td></tr><tr><td> D-גלוקוז </td><td> סיגמא </td><td> G8769 </td><td></td></tr><tr><td> BSL-1 קטר ברדס </td><td> אופה </td><td></td><td></td></tr><tr><td> McIlwain המסוק רקמה </td><td> Brinkmann </td><td></td><td></td></tr><tr><td> טפלון דיסקים </td><td> Brinkmann </td><td> 023-49-310-1 </td><td></td></tr><tr><td> מרית </td><td> תרמו פישר </td><td> 14-373-25A </td><td></td></tr><tr><td> Curved איריס מספריים </td><td> המדע כלים פיין </td><td> 14091-09 </td><td></td></tr><tr><td> מספריים ישר ארוך </td><td> המדע כלים פיין </td><td> 14002-14 </td><td></td></tr><tr><td> לונג מלקחיים </td><td> תרמו פישר </td><td> 13-812-40 </td><td></td></tr><tr><td> בזווית מלקחיים </td><td> המדע כלים פיין </td><td> 11808-02 </td><td></td></tr><tr><td> קצר מלקחיים </td><td> תרמו פישר </td><td> 13-812-38 </td><td></td></tr><tr><td> # 5 Inox מלקחיים </td><td> המדע כלים פיין </td><td> 11254-20 </td><td></td></tr><tr><td> 2 איריס spatulae </td><td> המדע כלים פיין </td><td> 10094-13 </td><td></td></tr><tr><td> 150 x 15 מ&quot;מ צלחות פטרי </td><td> תרמו פישר </td><td> 08-757-148 </td><td></td></tr><tr><td> 60 x 15 מ&quot;מ צלחות פטרי </td><td> תרמו פישר </td><td> 08-757-100B </td><td></td></tr><tr><td> Stereomicroscope Wild M8 </td><td> Wild Heerbrugg </td><td></td><td></td></tr><tr><td> מלח איזון גיי של פתרון </td><td> סיגמא </td><td> G9779 </td><td></td></tr><tr><td> Blak-Ray למדידת גלים קצרים סגול מטר </td><td> UVP </td><td> J-225 </td><td></td></tr><tr><td> 6-Falcon היטב מנות תרבות </td><td> תרמו פישר </td><td> 08-772-1B </td><td></td></tr><tr><td> Neurobasal </td><td> Invitrogen </td><td> 21103</td><td></td></tr><tr><td> תוסף B27 </td><td> Invitrogen </td><td> 17504 </td><td></td></tr><tr><td> Gem21 Neuroplex </td><td> ג&#39;מיני Bioproducts </td><td> 400-160-010 </td><td></td></tr><tr><td> חומצה אסקורבית </td><td> סיגמא </td><td> A4544 </td><td></td></tr><tr><td> CO 2 Analyzer </td><td> בכרך </td><td> # 2820 </td><td></td></tr></tbody></table> לפני ההקרנה של Vitality תרבויות Slice <table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> שם מגיב / ציוד </td><td> חברה </td><td> קטלוג / דגם מספר </td><td> תגובות </td></tr><tr><td> Sytox גרין </td><td> Invitrogen </td><td> S7020 </td><td></td></tr><tr><td> DMIBRE הפוכה מיקרוסקופ </td><td> לייקה </td><td></td><td></td></tr></tbody></table> הקרה נפשית מראש <table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> שם מגיב / ציוד </td><td> חברה </td><td> קטלוג / דגם מספר </td><td> תגובות </td></tr><tr><td> BSL-2 פומה הוד </td><td> NuAire </td><td></td><td></td></tr></tbody></table> Excitotoxic פגיעה <table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> שם מגיב / ציוד </td><td> חברה </td><td> קטלוג / דגם מספר </td><td> תגובות </td></tr><tr><td> CoolSnap fx מצלמת CCD </td><td> Photometrics </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Fluoroscein </td><td> Invitrogen </td><td> F36915 </td><td></td></tr><tr><td> MetaMorph תוכנה </td><td> מולקולרית התקנים </td><td> נ 7.5.04 </td><td></td></tr><tr><td> 100 hemacytometer עמוק מיקרומטר </td><td> האוסר מדעי </td><td></td><td></td></tr><tr><td> N-methyl-D-aspartate </td><td> Calbiochem </td><td> 454575 </td><td></td></tr><tr><td> SigmaStat תוכנה </td><td> Systat תוכנה בע&quot;מ </td><td> נ 3.5 </td><td></td></tr></tbody></table> עמית טיפולים להחיל עם הקרה נפשית מראש <table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> שם מגיב / ציוד </td><td> חברה </td><td> קטלוג / דגם מספר </td><td> תגובות </td></tr><tr><td> sTNFR1 </td><td> R &amp; D מערכות </td><td> 425-R1-050 </td><td></td></tr><tr><td> שור סרום אלבומין </td><td> סיגמא </td><td> A-4503 </td><td></td></tr></tbody></table> בידוד RNA <table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> שם מגיב / ציוד </td><td> חברה </td><td> קטלוג / דגם מספר </td><td> תגובות </td></tr><tr><td> RNAl ater </td><td> Ambion </td><td> AM7021 </td><td></td></tr><tr><td> מיקרו RNEasy Kit </td><td> Qiagen </td><td> 74004 </td><td></td></tr><tr><td> β-mercaptoethanol </td><td> דיג </td><td> 03446-100 </td><td></td></tr><tr><td> Diposable 1.5 RNAse ללא העלי </td><td> דרום ג&#39;רזי כלי Precision ו, עובש בע&quot;מ </td><td> 749521-1590 </td><td></td></tr><tr><td> RNasin </td><td> Promega </td><td> N261A </td><td></td></tr><tr><td> טריס [hydroxymethyl] aminomethane </td><td> סיגמא </td><td> T3069 </td><td></td></tr><tr><td> EDTA (ethylenediaminetetraacetic חומצה disodium מימה מלח </td><td> סיגמא </td><td> # E7889 </td><td></td></tr></tbody></table> RNA כימות <table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> שם מגיב / ציוד </td><td> חברה </td><td> קטלוג / דגם מספר </td><td> תגובות </td></tr><tr><td> RiboGreen Assay </td><td> Invitrogen </td><td> R11491 </td><td></td></tr><tr><td> שמרים tRNA </td><td> Invitrogen </td><td> 15401-011 </td><td></td></tr><tr><td> 1.5 צנטריפוגות צינורות מ&quot;ל </td><td> ארה&quot;ב מדעי </td><td> 16155500 </td><td></td></tr><tr><td> גם 96-assay פלורסנט צלחת </td><td> Nunc </td><td> DK-4000 </td><td></td></tr><tr><td> 96 גם צלחת פלורסנט הקורא </td><td> טקאן </td><td> ספייר מה&quot;ניו II </td><td></td></tr></tbody></table> PCR כמותי <table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> שם מגיב / ציוד </td><td> חברה </td><td> קטלוג / דגם מספר </td><td> תגובות </td></tr><tr><td> שעתוק iScript הפוכה ערכת </td><td> Bio-Rad </td><td> 170-8891 </td><td></td></tr><tr><td> SYBR גרין </td><td> Invitrogen </td><td> S7563 </td><td></td></tr><tr><td> תקי פלטינום פולימראז </td><td> Invitrogen </td><td> RNA Ultrasense 11732-927 </td><td></td></tr><tr><td> iCycler thermocycler </td><td> Bio-Rad </td><td> iCycler אופטי מודול </td><td></td></tr><tr><td> iCycler תוכנת המערכת </td><td> Bio-Rad </td><td> נ 3.1 </td><td></td></tr></tbody></table> כמותי PCR עבור microarrays <table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> שם מגיב / ציוד </td><td> חברה </td><td> קטלוג / דגם מספר </td><td> תגובות </td></tr><tr><td> RNase חוץ </td><td> מולקולרית Bioproducts </td><td> # 7000 </td><td></td></tr><tr><td> RT 2 סטרנד ראשון Kit </td><td> SABiosciences </td><td> C-03 </td><td></td></tr><tr><td> SYBR גרין מבוססי PCR לערבב </td><td> SABiosciences </td><td> PA-011 </td><td> ספציפיות iCycler </td></tr><tr><td> RT 2 Profiler מערך ה-PCR </td><td> SABiosciences </td><td> פרן-011A </td><td></td></tr></tbody></table> Proteomic Assay <table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> שם מגיב / ציוד </td><td> חברה </td><td> קטלוג/ דגם מספר </td><td> תגובות </td></tr><tr><td> תמוגה Cell ערכת </td><td> Bio-Rad </td><td> 171-304011 </td><td></td></tr><tr><td> Microcentrifuge </td><td> פישר סיינטיפיק </td><td> מיקרו 7 </td><td></td></tr><tr><td> BSA מניות חלבון </td><td> Bio-Rad </td><td> 500-0007 </td><td></td></tr><tr><td> Assay BCA חלבון ערכת </td><td> Thermo Scientific </td><td> 23225 </td><td></td></tr><tr><td> חיסונית 96 microwell צלחות </td><td> Nunc </td><td> 449824 </td><td></td></tr><tr><td> איטום קלטת </td><td> Bio-Rad </td><td> 2239444 </td><td></td></tr><tr><td> 96 גם צלחת הקורא </td><td> פרקין אלמר </td><td> 1420-mulilabel לדלפק </td><td></td></tr><tr><td> Bioplex עכברוש TNF-α ציטוקינים assay </td><td> Bio-Rad </td><td> X0000001T </td><td></td></tr></tbody></table> Immunostaining <table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> שם מגיב / ציוד </td><td> חברה </td><td> קטלוג / דגם מספר </td><td> תגובות </td></tr><tr><td> 16% Paraformaldehyde </td><td> אלפא Aesar </td><td> 43368 </td><td></td></tr><tr><td> ליזין </td><td> סיגמא </td><td> L-6001 </td><td></td></tr><tr><td> סודיום פוספט </td><td> פישר סיינטיפיק </td><td> S374-1 </td><td></td></tr><tr><td> נתרן periodate </td><td> סיגמא </td><td> S-1878 </td><td></td></tr><tr><td> נתרן אזיד </td><td> סיגמא </td><td> S-2002 </td><td></td></tr><tr><td> מי חמצן (30%) </td><td> סיגמא </td><td> H1009 </td><td></td></tr><tr><td> עיזים בסרום </td><td> קולורדו החברה סרום </td><td> CS 0920 </td><td></td></tr><tr><td> טריטון X-100 </td><td> סיגמא </td><td> T-8787 </td><td></td></tr><tr><td> מכתים מנות </td><td> טד פלה, Inc </td><td> 14511 </td><td></td></tr><tr><td> פלייט שאכר </td><td> Lab-Line מכשירים, Inc </td><td> 3520 </td><td></td></tr><tr><td> # 1 סנן מאמרים (185 מ&quot;מ) </td><td> Whatman </td><td> 1001-185 </td><td></td></tr><tr><td> 3,3-diaminobenzidine </td><td> סיגמא </td><td> D8001 </td><td></td></tr><tr><td> דימתיל sulfoxide </td><td> סיגמא </td><td> D8418 </td><td></td></tr><tr><td> אתנול </td><td> Pharmco-AAPER </td><td> 111000200 </td><td></td></tr><tr><td> קסילן </td><td> פישר סיינטיפיק </td><td> X3S-4 </td><td></td></tr><tr><td> התקשורת הרכבה Permount </td><td> פישר סיינטיפיק </td><td> SP15-100 </td><td></td></tr><tr><td> Cryostat </td><td> לייקה </td><td> 3 ס&quot;מ 050 S </td><td></td></tr><tr><td> רקמות-Tek </td><td> טד פלה, Inc </td><td> 27050 </td><td></td></tr><tr><td> עדין קצה מברשת צבע </td><td> טד פלה </td><td> 11806 </td><td></td></tr><tr><td> PAP חסימת עט </td><td> טד פלה, Inc </td><td> 22309 </td><td></td></tr><tr><td> SFX אות משפר </td><td> Invitrogen </td><td> A31631 </td><td></td></tr><tr><td> להאריך Antifade </td><td> Invitrogen </td><td> P7481 </td><td></td></tr></tbody></table>

strategies for study of neuroprotection from cold-preconditioning

פציעה נוירולוגיות הוא הגורם השכיח של תחלואה ותמותה מן ההרדמה הכללית ניתוחים הקשורים שניתן להקל על ידי פיתוח יעיל, קל לניהול וטיפולים נפשית מראש בטוח. אנו מבקשים להגדיר את האותות העצביים האחראים החיסונית קר נפשית מראש כאמצעי לזיהוי מטרות הרומן לפיתוח הרפוי כדי להגן על המוח לפני תחילת פציעה. ברמה נמוכה הפרו דלקתי מתווך איתות שינויים לאורך זמן חיוניים neuroprotection קר נפשית מראש. איתות זה עולה בקנה אחד עם העקרונות הבסיסיים של hormesis מיזוג פיזיולוגיים, אשר דורשים גירויים irritative להגיע גודל סף עם מספיק זמן הסתגלות לגירויים להגנה להיות ברור. לפיכך, התוויית איתות החיסון המעורבים neuroprotection קר נפשית מראש דורש כי מערכות ביולוגיות מניפולציות ניסיוני בתוספת היכולות הטכניות ולייצר מאוד רגיש. הגישה שלנו היא להשתמש תרבויות פרוסה בהיפוקמפוס כמו במודל חוץ גופית כי מקרוב משקף שלהם עם עמיתיהם vivo רב סינפטיים רשתות עצביות מושפע macroglia בוגרת שקט / microglia. מצב זה גליה חשוב במיוחד עבור microglia שכן הם המקור העיקרי של ציטוקינים, אשר פעיל בטווח femtomolar. כמו כן, תרבויות פרוסה יכול להישמר במבחנה במשך מספר שבועות, וזה מספיק זמן כדי לעורר גירויים הפעלת ולהעריך התגובות אדפטיבית. לבסוף, תנאים סביבתיים ניתן לשלוט בצורה מדויקת באמצעות תרביות פרוסה כך ציטוקינים כי האיתות של קר נפשית מראש ניתן למדוד, חיקה, ומתנגן לנתח את ההיבטים צומת קריטי. איתות ציטוקין מנתחת המערכת דורשת שימוש בטכניקות multiplexed רגיש לשחזור. אנו משתמשים כמותי PCR עבור TNF-α למסך להפעלת microglial ואחריו כמותי ההקרנה בזמן אמת qPCR מערך להעריך רקמות רחב שינויים ציטוקינים. האחרון הוא אמצעי רגיש ביותר לשחזור למדוד מערכת ציטוקינים מרובים איתות שינויים בו זמנית. שינויים משמעותיים הם אישרו עם qPCR ממוקד ולאחר מכן גילוי חלבון. אנחנו בדיקה עבור מבוססי רקמות ציטוקינים שינויים חלבון באמצעות זרם multiplexed microsphere מבחני cytometric באמצעות טכנולוגיית Luminex. תא ספציפי ייצור ציטוקינים נקבעת עם אימונוהיסטוכימיה פעמיים התווית. יחדיו, זו רקמת המוח הכנה וסגנון השימוש, מצמידים את האסטרטגיות החקירה הציע, יכול להיות גישה אופטימלית לזיהוי מטרות פוטנציאליות לפיתוח הרפוי הרומן הזה יכול לחקות את היתרונות של קר נפשית מראש.

Watch this Scientific Journal Video about Strategies for Study of Neuroprotection from Cold-preconditioning at JoVE.com

Strategies for Study of Neuroprotection from Cold-preconditioning

אנו מבקשים להגדיר את האותות העצביים האחראים החיסונית קר נפשית מראש כאמצעי לזיהוי מטרות הרומן לפיתוח הרפוי כדי להגן על המוח לפני תחילת פציעה. אנו מציגים אסטרטגיות עבודה כזו הדורשים מערכות ביולוגיות, מניפולציות ניסיוני בתוספת היכולות הטכניות, כי הם לשעתקו מאוד רגיש.

אסטרטגיות לחקר neuroprotection מן הקרה נפשית מראש

Neurological injury is a frequent cause of morbidity and mortality from general anesthesia and related surgical procedures that could be alleviated by ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Laser Capture Microdissection of Drosophila Peripheral Neurons

Laser Capture Microdissection of Drosophila Peripheral Neurons

לייזר Microdissection לכידה של תסיסנית נוירונים היקפיים

The dendritic arborization (da) neurons of the Drosophila peripheral nervous system (PNS) provide an excellent model system in which to investigate the ...

Preparation of Acute Hippocampal Slices from Rats and Transgenic Mice for the Study of Synaptic Alterations during Aging and Amyloid Pathology

הכנת פרוסות בהיפוקמפוס של חולדות חריפה העכברים הטרנסגניים לחקר שינויים Synaptic במהלך ההזדקנות עמילואיד פתולוגיה

The rodent hippocampal slice preparation is perhaps the most broadly used tool for investigating mammalian synaptic function and plasticity. The ...

Vibrodissociation of Neurons from Rodent Brain Slices to Study Synaptic Transmission and Image Presynaptic Terminals

Vibrodissociation של נוירונים בין פרוסות המוח מכרסמים לחקר הילוכים Synaptic ותמונה מסופי Presynaptic

Mechanical dissociation of neurons from the central nervous system has the advantage that presynaptic boutons remain attached to the isolated neuron of ...

Sequential Photo-bleaching to Delineate Single Schwann Cells at the Neuromuscular Junction

תמונה רציפה-הלבנה להתוות תאי שווא יחידים בצומת Neuromuscular

Sequential photo-bleaching provides a non-invasive way to label individual SCs at the NMJ. The NMJ is the largest synapse of the mammalian nervous system ...

Membrane Potential Dye Imaging of Ventromedial Hypothalamus Neurons From Adult Mice to Study Glucose Sensing

ממברנה דיי הדמיה אפשרית של ventromedial היפותלמוס נוירונים מעכברים בוגרים ללמוד גלוקוז חישה

Studies of neuronal activity are often performed using neurons from rodents less than 2 months of age due to the technical difficulties associated with ...

Isolation of CA1 Nuclear Enriched Fractions from Hippocampal Slices to Study Activity-dependent Nuclear Import of Synapto-nuclear Messenger Proteins

בידוד של CA1 גרעיני שברים מועשרים מSlices בהיפוקמפוס לחקר פעילות תלויה גרעיני יבוא של חלבונים Messenger synapto-גרעיניים

Studying activity dependent protein expression, subcellular translocation, or phosphorylation is essential to understand the underlying cellular ...

Real-Time Impedance-based Cell Analyzer as a Tool to Delineate Molecular Pathways Involved in Neurotoxicity and Neuroprotection in a Neuronal Cell Line

Analyzer הנייד מבוססת עכבה בזמן אמת ככלי להתוות מסלולים מולקולריים מעורבים ברעילות העצבית וneuroprotection בקו תאים עצבי

Many brain-related disorders have neuronal cell death involved in their pathophysiology. Improved in vitro models to study neuroprotective or neurotoxic ...

Organotypic Hippocampal Slice Cultures As a Model to Study Neuroprotection and Invasiveness of Tumor Cells

Organotypic תרבויות פרוסה בהיפוקמפוס כמודל מחקר Neuroprotection, Invasiveness של תאים סרטניים

In organotypic hippocampal slice cultures (OHSC), the morphological and functional characteristics of both neurons and glial cells are well preserved. ...

Time-dependent Increase in the Network Response to the Stimulation of Neuronal Cell Cultures on Micro-electrode Arrays

זמן תלויי תגובת הרשת בתגובה לגירוי של תרבויות תאים עצביים על מערכי מיקרו-אלקטרודה

Micro-electrode arrays (MEAs) can be used to investigate drug toxicity, design paradigms for next-generation personalized medicine, and study network ...

Experimental Models to Study the Neuroprotection of Acidic Postconditioning Against Cerebral Ischemia

מודלים ניסיוניים לחקר הנוירו-פרוטקציה של התסמינים החומציים נגד איסכמיה מוחית

Stroke is one of the leading causes of mortality and disability worldwide, with limited therapeutic approaches. As an endogenous strategy for ...