Name: strategies for study of neuroprotection from cold-preconditioning
Uploaded: 2010-09-02T17:30:00
Duration: 16 min 27 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Strategies for Study of Neuroprotection from Cold-preconditioning at JoVE.com

この作品は、国立神経疾患研究所およびストローク（NS - 19108）、片頭痛研究財団、そしてリチャードP.クレイグへホワイト財団からの補助金によって賄われていた。さんマーシャP.クレイグは、培地およびスライス培養のメンテナンスの準備に協力した。我々は、この記事の最終版の彼女のコメントやリビジョンのためエレーナグリンベルクに感謝。

<ol>
	<li>Aptowicz, C. O., Kunkler, P. E., Kraig, R. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Homeostatic+plasticity+in+hippocampal+slice+cultures+involves+changes+in+voltage-gated+Na++channel+expression.">Homeostatic plasticity in hippocampal slice cultures involves changes in voltage-gated Na+ channel expression.</a> Brain Res. 998, 155-163 (2004).</li><li>Beattie, E. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Control+of+synaptic+strength+by+glial+TNFalpha.">Control of synaptic strength by glial TNFalpha.</a> Science. 295, 2282-2285 (2002).</li><li>Breder, C. D., Dewitt, D., Kraig, R. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+inducible+cyclooxygenase+in+rat+brain.">Characterization of inducible cyclooxygenase in rat brain.</a> J Comp Neurol. 355, 296-315 (1995).</li><li>Caggiano, A. O., Breder, C. D., Kraig, R. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-term+elevation+of+cyclooxygenase-2,+but+not+lipoxygenase,+in+regions+synaptically+distant+from+spreading+depression.">Long-term elevation of cyclooxygenase-2, but not lipoxygenase, in regions synaptically distant from spreading depression.</a> J Comp Neurol. 376, 447-462 (1996).</li><li>Caggiano, A. O., Kraig, R. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Eicosanoids+and+nitric+oxide+influence+induction+of+reactive+gliosis+from+spreading+depression+in+microglia+but+not+astrocytes.">Eicosanoids and nitric oxide influence induction of reactive gliosis from spreading depression in microglia but not astrocytes.</a> J Comp Neurol. 369, 93-108 (1996).</li><li>Caggiano, A. O., Kraig, R. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prostaglandin+E2+and+4-aminopyridine+prevent+the+lipopolysaccharide-induced+outwardly+rectifying+potassium+current+and+interleukin-1beta+production+in+cultured+rat+microglia.">Prostaglandin E2 and 4-aminopyridine prevent the lipopolysaccharide-induced outwardly rectifying potassium current and interleukin-1beta production in cultured rat microglia.</a> J Neurochem. 70, 2357-2368 (1998).</li><li>Caggiano, A. O., Kraig, R. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prostaglandin+E+receptor+subtypes+in+cultured+rat+microglia+and+their+role+in+reducing+lipopolysaccharide-induced+interleukin-1beta+production.">Prostaglandin E receptor subtypes in cultured rat microglia and their role in reducing lipopolysaccharide-induced interleukin-1beta production.</a> J Neurochem. 72, 565-575 (1999).</li><li>Calabrese, E. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drug+therapies+for+stroke+and+traumatic+brain+injury+often+display+U-shaped+dose+responses:+occurrence,+mechanisms,+and+clinical+implications.">Drug therapies for stroke and traumatic brain injury often display U-shaped dose responses: occurrence, mechanisms, and clinical implications.</a> Crit Rev Toxicol. 38, 557-577 (2008).</li><li>Calabrese, E. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biological+stress+response+terminology:+Integrating+the+concepts+of+adaptive+response+and+preconditioning+stress+within+a+hormetic+dose-response+framework.">Biological stress response terminology: Integrating the concepts of adaptive response and preconditioning stress within a hormetic dose-response framework.</a> Toxicol Appl Pharmacol. 222, 122-128 (2007).</li><li>Calabrese, E. J., Baldwin, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hormesis:+the+dose-response+revolution.">Hormesis: the dose-response revolution.</a> Annu Rev Pharmacol Toxicol. 43, 175-197 (2003).</li><li>Hansel, N. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+of+CD4++T-cell+gene+expression+in+allergic+subjects+using+two+different+microarray+platforms.">Analysis of CD4+ T-cell gene expression in allergic subjects using two different microarray platforms.</a> Allergy. 63, 366-369 (2008).</li><li>Hulse, R. E., Kunkler, P. E., Fedynyshyn, J. P., Kraig, R. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimization+of+multiplexed+bead-based+cytokine+immunoassays+for+rat+serum+and+brain+tissue.">Optimization of multiplexed bead-based cytokine immunoassays for rat serum and brain tissue.</a> J Neurosci Methods. 136, 87-98 (2004).</li><li>Hulse, R. E., Swenson, W. G., Kunkler, P. E., White, D. M., Kraig, R. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Monomeric+IgG+is+neuroprotective+via+enhancing+microglial+recycling+endocytosis+and+TNF-alpha.">Monomeric IgG is neuroprotective via enhancing microglial recycling endocytosis and TNF-alpha.</a> J Neurosci. 28, 12199-12211 (2008).</li><li>Hulse, R. E., Winterfield, J., Kunkler, P. E., Kraig, R. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Astrocytic+clasmatodendrosis+in+hippocampal+organ+culture.">Astrocytic clasmatodendrosis in hippocampal organ culture.</a> Glia. 33, 169-179 (2001).</li><li>Kraig, R. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=TNF-alpha+and+Microglial+Hormetic+Involvement+in+Neurological+Health+and+Migraine.">TNF-alpha and Microglial Hormetic Involvement in Neurological Health and Migraine.</a> International Dose-Respose Society. , (2010).</li><li>Kunkler, P. E., Hulse, R. E., Kraig, R. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multiplexed+cytokine+protein+expression+profiles+from+spreading+depression+in+hippocampal+organotypic+cultures.">Multiplexed cytokine protein expression profiles from spreading depression in hippocampal organotypic cultures.</a> J Cereb Blood Flow Metab. 24, 829-839 (2004).</li><li>Kunkler, P. E., Hulse, R. E., Schmitt, M. W., Nicholson, C., Kraig, R. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optical+current+source+density+analysis+in+hippocampal+organotypic+culture+shows+that+spreading+depression+occurs+with+uniquely+reversing+currents.">Optical current source density analysis in hippocampal organotypic culture shows that spreading depression occurs with uniquely reversing currents.</a> J Neurosci. 25, 3952-3961 (2005).</li><li>Kunkler, P. E., Kraig, R. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reactive+astrocytosis+from+excitotoxic+injury+in+hippocampal+organ+culture+parallels+that+seen+in+vivo.">Reactive astrocytosis from excitotoxic injury in hippocampal organ culture parallels that seen in vivo.</a> J Cereb Blood Flow Metab. 17, 26-43 (1997).</li><li>Kunkler, P. E., Kraig, R. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Calcium+waves+precede+electrophysiological+changes+of+spreading+depression+in+hippocampal+organ+cultures.">Calcium waves precede electrophysiological changes of spreading depression in hippocampal organ cultures.</a> J Neurosci. 18, 3416-3425 (1998).</li><li>Kunkler, P. E., Kraig, R. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=P/Q+Ca2++channel+blockade+stops+spreading+depression+and+related+pyramidal+neuronal+Ca2++rise+in+hippocampal+organ+culture.">P/Q Ca2+ channel blockade stops spreading depression and related pyramidal neuronal Ca2+ rise in hippocampal organ culture.</a> Hippocampus. 14, 356-367 (2004).</li><li>Lambertsen, K. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microglia+protect+neurons+against+ischemia+by+synthesis+of+tumor+necrosis+factor.">Microglia protect neurons against ischemia by synthesis of tumor necrosis factor.</a> J Neurosci. 29, 1319-1330 (2009).</li><li>Lee, J. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulator+of+G-protein+signaling+10+promotes+dopaminergic+neuron+survival+via+regulation+of+the+microglial+inflammatory+response.">Regulator of G-protein signaling 10 promotes dopaminergic neuron survival via regulation of the microglial inflammatory response.</a> J Neurosci. 28, 8517-8528 (2008).</li><li>Mattson, M. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hormesis+and+disease+resistance:+activation+of+cellular+stress+response+pathways.">Hormesis and disease resistance: activation of cellular stress response pathways.</a> Hum Exp Toxicol. 27, 155-162 (2008).</li><li>Ning, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Systematic+and+simultaneous+gene+profiling+of+84+drug-metabolizing+genes+in+primary+human+hepatocytes.">Systematic and simultaneous gene profiling of 84 drug-metabolizing genes in primary human hepatocytes.</a> J Biomol Screen. 13, 194-201 (2008).</li><li>Oppenheim, J., Feldman, M., Oppenheim, J. J., Feldman, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> in Cytokine Reference. 1, (2001).</li><li>Pfaffl, M. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+mathematical+model+for+relative+quantification+in+real-time+RT-PCR.">A new mathematical model for relative quantification in real-time RT-PCR.</a> Nucleic Acids Res. 29, e45-e45 (2001).</li><li>Stellwagen, D., Beattie, E. C., Seo, J. Y., Malenka, R. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+regulation+of+AMPA+receptor+and+GABA+receptor+trafficking+by+tumor+necrosis+factor-alpha.">Differential regulation of AMPA receptor and GABA receptor trafficking by tumor necrosis factor-alpha.</a> J Neurosci. 25, 3219-3228 (2005).</li><li>Stellwagen, D., Malenka, R. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synaptic+scaling+mediated+by+glial+TNF-alpha.">Synaptic scaling mediated by glial TNF-alpha.</a> Nature. 440, 1054-1059 (2006).</li><li>Streit, W. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microglia+as+neuroprotective,+immunocompetent+cells+of+the+CNS.">Microglia as neuroprotective, immunocompetent cells of the CNS.</a> Glia. 40, 133-139 (2002).</li><li>Wilde, G. J., Pringle, A. K., Sundstrom, L. E., Mann, D. A., Iannotti, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Attenuation+and+augmentation+of+ischaemia-related+neuronal+death+by+tumour+necrosis+factor-alpha+in+vitro.">Attenuation and augmentation of ischaemia-related neuronal death by tumour necrosis factor-alpha in vitro.</a> Eur J Neurosci. 12, 3863-3870 (2000).</li></ol>

利害の衝突は宣言されません。

コー​​ルド - プレコンディショニング神経保護に関与サイトカインシグナル伝達系の描写に重要な二つの根本的に重要な概念は、図6と図7に示されています。最初に、サイトカインは通常の脳内シグナル伝達分子が非常に低濃度です。それにもかかわらず、生理的サイトカイン濃度の変化は、遺伝子の発現を変化させる能力（図6）の脳の構造と機能（すなわち、表現型）を変更するために計り知れない可能性を秘めている。さらに、サイトカインは、同様の効果と、単一のサイトカインが変数の効果（図7）を持つことができますを持つことが非常に冗長とその複数のサイトカインの多面的です。従って、正確に冷間前処理演算子（または他の生理的前処理の刺激）から神経保護作用のための生得的なサイトカイン拠点を確立するために、関連するシグナリング変数の複合解析を判定する必要があります。これは、多重化アッセイ戦略によって実現されます。これは、コールドプレコンディショニング神経保護のサイトカイン&quot;署名&quot;を設立します。 <img src="/files/ftp_upload/2192/2192fig6.jpg" alt="図6" /> 図6。脳内サイトカインのシグナル伝達のパワー。イラストは他のよく知ら対応の濃度に比べて脳のサイトカインの生理的濃度の巨大なシグナル伝達力を伝える。濃度は、基準点として、単一の猫のひげをはじめ、距離の逆数として表されます。ナトリウム（コショウの粒で示される10 -1 M）およびカリウム（トマトで示される10 -3 M）は、内の役割はそれぞれ約150及び3mMの、のレベルで間質脳空間に存在し、十分に認識している神経細胞の電気生理学的機能。同様に、pH（すなわち、〜10 -7 Mの水素イオンの濃度とシカゴの湖畔に沿って780メートルとして図示）とカルシウム（すなわち、7.8キロマコーミックからシカゴの湖畔に沿って衛星Googleの画像から見て示すように、〜10 -8 Mの濃度）シカゴ大学の近くにハイドパークでのプロモントリーポイントに置きます。さらに、これらの濃度以上の間隙に放出された神経伝達物質は、局所脳領域の活性に影響を与える。対照的に、サイトカインは、（地球から火星までの距離として示されている）十数万倍未満の濃度で脳の機能を変更することができます。 <img src="/files/ftp_upload/2192/2192fig7.jpg" alt="図7" /> 図7。生得的なサイトカイン経路のインタラクティブなシグナリング。サイトカインは、非常に冗長とその複数のサイトカインの多面的なものは、同様の効果を持つことができ、単一のサイトカインは、変数の効果を持つことができます。そのような多様性は、リガンド、受容体、およびリン酸化のレベルで発生する複雑な対話型のシグナリングに由来する。さらに複雑さは、セル固有の生得的なサイトカイン、受容体、および関連するリン酸化タンパク質の変化の各能力で、脳が別の細胞型から構成されているという事実から生じている。ここに例示を目的として、唯一の生得的なサイトカインシグナル伝達経路は、（免疫細胞の研究から派生）が表示されます。単純にするために、脳は生得的なサイトカインの潜在的な相互作用を示す単セル（白い線）（（IL -1α/βとしてここに呼ばれる）、IL -1αおよびIL -1β、TNF -α、IL - 6、として描かれているIFN -γとIL - 10）、受容体（IL - 1R1、TNFR1、IL-6/gp130、IFNγR、およびIL - 10R）、およびリン酸化タンパク質（すなわち、キナーゼERK1 / 2、P38（P38 - MAPK）やJNK）と転写因子（ATF - 2、NFκB、およびSTAT3）。 TNFR1を介したATF - 2を介して遺伝子発現を誘発するJNK、p38の- MAPKおよびERK1 / 2、に例えば、TNF -αシグナル。 TNF -αはまた、NFκB活性化を介して直接遺伝子発現を変化させる。示されるように一緒に、これらの転写因子の活性化は、サイトカインとその受容体の増加（矢印）と減少した（平滑末端）式を呼び起こす。重要なことは、これらの経路は、他の（例えば、IL -1β）サイトカインの一つサイトカインの変化（例えば、TNF -α）の影響の生産を示している。従って、正確に確立するために関連するシグナリング変数の冷間前処理演算子、複合解​​析から神経保護のためのサイトカインの塩基は決定されなければならない。これは、コールドプレコンディショニングの生得的なサイトカイン&quot;署名&quot;を設立します。 （画像を参照＃25のデータから、コンパイルされています。）

スライス培養の準備<table border="1"><tbody><tr><td> 試薬/装置の名前 </td><td> 会社 </td><td> カタログ/モデル番号 </td><td> コメント </td></tr><tr><td> Millicell - CM組織培養インサート（30 mm）の</td><td>サーモフィッシャー</td><td> PICM0 - 3050 </td><td></td></tr><tr><td>基礎培地イーグル</td><td>インビトロジェン</td><td> 21010 </td><td></td></tr><tr><td>アールの平衡塩類溶液</td><td>シグマ</td><td> E2888 </td><td></td></tr><tr><td>馬血清</td><td>インビトロジェン</td><td> 26050-088 </td><td></td></tr><tr><td>グルタミン</td><td>インビトロジェン</td><td> 35050 </td><td></td></tr><tr><td>ゲンタマイシン</td><td>インビトロジェン</td><td> 15710-064 </td><td></td></tr><tr><td> Fungizone </td><td>インビトロジェン</td><td> 15295 </td><td></td></tr><tr><td> D -グルコース</td><td>シグマ</td><td> G8769 </td><td></td></tr><tr><td> BSL - 1ヒュームフード</td><td>ベイカー</td><td></td><td></td></tr><tr><td>マッキルウェーン組織チョッパー</td><td>ブリンクマン</td><td></td><td></td></tr><tr><td>テフロンディスク</td><td>ブリンクマン</td><td> 023-49-310-1 </td><td></td></tr><tr><td>へら</td><td>サーモフィッシャー</td><td> 14から373 - 25A </td><td></td></tr><tr><td>湾曲した虹彩鋏</td><td>ファイン科学ツール</td><td> 14091〜09 </td><td></td></tr><tr><td>ロングストレートはさみ</td><td>ファイン科学ツール</td><td> 14002〜14 </td><td></td></tr><tr><td>長い鉗子</td><td>サーモフィッシャー</td><td> 13-812-40 </td><td></td></tr><tr><td>角度付き鉗子</td><td>ファイン科学ツール</td><td> 11808〜02 </td><td></td></tr><tr><td>ショート鉗子</td><td>サーモフィッシャー</td><td> 13-812-38 </td><td></td></tr><tr><td> ＃5イノックス鉗子</td><td>ファイン科学ツール</td><td> 11254〜20 </td><td></td></tr><tr><td> 2アイリスspatulae </td><td>ファイン科学ツール</td><td> 10094〜13 </td><td></td></tr><tr><td> 150 × 15ミリメートルのペトリ皿</td><td>サーモフィッシャー</td><td> 08-757-148 </td><td></td></tr><tr><td> 60 × 15ミリメートルのペトリ皿</td><td>サーモフィッシャー</td><td> 08から757 - 100B </td><td></td></tr><tr><td>ワイルドM8実体顕微鏡</td><td>ワイルドHeerbrugg </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Geyのバランス塩溶液</td><td>シグマ</td><td> G9779 </td><td></td></tr><tr><td> Blak - Rayの短波長紫外線測定メーター</td><td> UVP </td><td> J - 225 </td><td></td></tr><tr><td> 6ウェルファルコン培養ディッシュ</td><td>サーモフィッシャー</td><td> 08から772 - 1B </td><td></td></tr><tr><td> Neurobasal </td><td>インビトロジェン</td><td> 21103</td><td></td></tr><tr><td> B27サプリメント</td><td>インビトロジェン</td><td> 17504 </td><td></td></tr><tr><td> Gem21 Neuroplex </td><td>ジェミニのバイオ製品</td><td> 400-160-010 </td><td></td></tr><tr><td>アスコルビン酸</td><td>シグマ</td><td> A4544 </td><td></td></tr><tr><td> CO 2アナライザー</td><td>バカラック</td><td> ＃2820 </td><td></td></tr></tbody></table>スライス培養のバイタリティでの事前スクリーニング<table border="1"><tbody><tr><td> 試薬/装置の名前 </td><td> 会社 </td><td> カタログ/モデル番号 </td><td> コメント </td></tr><tr><td> SYTOXグリーン</td><td>インビトロジェン</td><td> S7020 </td><td></td></tr><tr><td> DMIBRE倒立顕微鏡</td><td>ライカ</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>冷間前処理<table border="1"><tbody><tr><td> 試薬/装置の名前 </td><td> 会社 </td><td> カタログ/モデル番号 </td><td> コメント </td></tr><tr><td> BSL - 2の換気フード</td><td> NuAire </td><td></td><td></td></tr></tbody></table>興奮毒性損傷<table border="1"><tbody><tr><td> 試薬/装置の名前 </td><td> 会社 </td><td> カタログ/モデル番号 </td><td> コメント </td></tr><tr><td> CoolSnap FX CCDカメラ</td><td> Photometrics </td><td></td><td></td></tr><tr><td>フルオレセイン</td><td>インビトロジェン</td><td> F36915 </td><td></td></tr><tr><td> MetaMorphソフトウェア</td><td>分子デバイス</td><td> V. 7.5.04 </td><td></td></tr><tr><td> 100μmの深さ血球計</td><td> Hausserサイエンティフィック</td><td></td><td></td></tr><tr><td> N -メチル- D -アスパラギン酸</td><td>カルビオケム</td><td> 454575 </td><td></td></tr><tr><td> SigmaStatソフトウェア</td><td> SYSTATソフトウェア株式会社</td><td> V. 3.5 </td><td></td></tr></tbody></table>コー​​ルド - プレコンディショニングを適用した共同治療<table border="1"><tbody><tr><td> 試薬/装置の名前 </td><td> 会社 </td><td> カタログ/モデル番号 </td><td> コメント </td></tr><tr><td> sTNFR1 </td><td> R＆Dシステムズ</td><td> 425 - R1 - 050 </td><td></td></tr><tr><td>ウシ血清アルブミン</td><td>シグマ</td><td> - 4503 </td><td></td></tr></tbody></table> RNA分離<table border="1"><tbody><tr><td> 試薬/装置の名前 </td><td> 会社 </td><td> カタログ/モデル番号 </td><td> コメント </td></tr><tr><td> RNAl ater </td><td>アンビオン</td><td> AM7021 </td><td></td></tr><tr><td>マイクロRNeasyキット</td><td>キアゲン</td><td> 74004 </td><td></td></tr><tr><td> β-メルカプトエタノール</td><td>フィッシャー</td><td> 03446-100 </td><td></td></tr><tr><td> Diposable 1.5 RNaseフリーの杵</td><td>サウスジャージーの精密工具や金型、（株） </td><td> 749521-1590 </td><td></td></tr><tr><td> RNasin </td><td>プロメガ</td><td> N261A </td><td></td></tr><tr><td>トリス[ヒドロキシメチル]アミノメタン</td><td>シグマ</td><td> T3069 </td><td></td></tr><tr><td> EDTA（エチレンジアミン四酢酸二ナトリウム塩水和物</td><td>シグマ</td><td> ＃E7889 </td><td></td></tr></tbody></table> RNAの定量<table border="1"><tbody><tr><td> 試薬/装置の名前 </td><td> 会社 </td><td> カタログ/モデル番号 </td><td> コメント </td></tr><tr><td> RiboGreenアッセイ</td><td>インビトロジェン</td><td> R11491 </td><td></td></tr><tr><td>酵母tRNA </td><td>インビトロジェン</td><td> 15401-011 </td><td></td></tr><tr><td> 1.5mLの遠心チューブ</td><td>米国サイエンティフィック</td><td> 16155500 </td><td></td></tr><tr><td> 96ウェル蛍光アッセイプレート</td><td>ヌンク</td><td> DK - 4000 </td><td></td></tr><tr><td> 96ウェル蛍光プレートリーダー</td><td>テカン</td><td>サファイアII </td><td></td></tr></tbody></table>定量PCR <table border="1"><tbody><tr><td> 試薬/装置の名前 </td><td> 会社 </td><td> カタログ/モデル番号 </td><td> コメント </td></tr><tr><td> iScript逆転写キット</td><td> Bio - Rad社</td><td> 170-8891 </td><td></td></tr><tr><td> SYBRグリーン</td><td>インビトロジェン</td><td> S7563 </td><td></td></tr><tr><td>プラチナTaqポリメラーゼ</td><td>インビトロジェン</td><td> RNA Ultrasense 11732-927 </td><td></td></tr><tr><td> iCyclerサーマルサイクラー</td><td> Bio - Rad社</td><td> iCycler光モジュール</td><td></td></tr><tr><td> iCyclerのシステムソフトウェア</td><td> Bio - Rad社</td><td> V. 3.1 </td><td></td></tr></tbody></table>マイクロアレイのための定量PCR <table border="1"><tbody><tr><td> 試薬/装置の名前 </td><td> 会社 </td><td> カタログ/モデル番号 </td><td> コメント </td></tr><tr><td> アウェイ RNaseの</td><td>分子バイオ製品</td><td> ＃7000 </td><td></td></tr><tr><td> RT 2最初ストランドキット</td><td> SABiosciences </td><td> C - 03 </td><td></td></tr><tr><td> SYBRグリーンベースのPCRミックス</td><td> SABiosciences </td><td> PA - 011 </td><td> iCyclerのための特定の</td></tr><tr><td> RT 2 ProfilerのPCRアレイ</td><td> SABiosciences </td><td> PARN - 011A </td><td></td></tr></tbody></table>プロテオミクスアッセイ<table border="1"><tbody><tr><td> 試薬/装置の名前 </td><td> 会社 </td><td> カタログ/モデル番号</td><td> コメント </td></tr><tr><td>細胞溶解キット</td><td> Bio - Rad社</td><td> 171-304011 </td><td></td></tr><tr><td>マイクロ遠心機</td><td>フィッシャーサイエンティフィック</td><td>マイクロ7 </td><td></td></tr><tr><td> BSAタンパク質の株式</td><td> Bio - Rad社</td><td> 500-0007 </td><td></td></tr><tr><td> BCAタンパク質アッセイキット</td><td>サーモサイエンティフィック</td><td> 23225 </td><td></td></tr><tr><td>免疫96マイクロウェルプレート</td><td>ヌンク</td><td> 449824 </td><td></td></tr><tr><td>ガムテープ</td><td> Bio - Rad社</td><td> 2239444 </td><td></td></tr><tr><td> 96ウェルプレートリーダー</td><td>パーキンエルマー</td><td> 1420 - mulilabelカウンタ</td><td></td></tr><tr><td> BioplexラットTNF -αのサイトカインアッセイ</td><td> Bio - Rad社</td><td> X0000001T </td><td></td></tr></tbody></table>免疫染色<table border="1"><tbody><tr><td> 試薬/装置の名前 </td><td> 会社 </td><td> カタログ/モデル番号 </td><td> コメント </td></tr><tr><td> 16％パラホルムアルデヒド</td><td>アルファAesar </td><td> 43368 </td><td></td></tr><tr><td>リジン</td><td>シグマ</td><td> L - 6001 </td><td></td></tr><tr><td>リン酸ナトリウム</td><td>フィッシャーサイエンティフィック</td><td> S374 - 1 </td><td></td></tr><tr><td>ヨウ素酸ナトリウム</td><td>シグマ</td><td> S - 1878 </td><td></td></tr><tr><td>アジ化ナトリウム</td><td>シグマ</td><td> S - 2002 </td><td></td></tr><tr><td>過酸化水素（30％） </td><td>シグマ</td><td> H1009 </td><td></td></tr><tr><td>ヤギ血清</td><td>コロラド血清会社</td><td> CS 0920 </td><td></td></tr><tr><td>トリトンX - 100 </td><td>シグマ</td><td> T - 8787 </td><td></td></tr><tr><td>染色皿</td><td>テッドペラ、（株） </td><td> 14511 </td><td></td></tr><tr><td>プレートシェーカー</td><td>ラボラインインスツルメンツ株式会社</td><td> 3520 </td><td></td></tr><tr><td> ＃1フィルタペーパー（185ミリメートル） </td><td>ワットマン紙</td><td> 1001-185 </td><td></td></tr><tr><td> 3,3 - ジアミノベンジジン</td><td>シグマ</td><td> D8001 </td><td></td></tr><tr><td>ジメチルスルホキシド</td><td>シグマ</td><td> D8418 </td><td></td></tr><tr><td>エタノール</td><td> Pharmco - AAPER </td><td> 111000200 </td><td></td></tr><tr><td>キシレン</td><td>フィッシャーサイエンティフィック</td><td> X3S - 4 </td><td></td></tr><tr><td> Permountマウントメディア</td><td>フィッシャーサイエンティフィック</td><td> SP15 - 100 </td><td></td></tr><tr><td>クライオスタット</td><td>ライカ</td><td> cm 3の 050 S </td><td></td></tr><tr><td>組織 - Tek社</td><td>テッドペラ、（株） </td><td> 2705​​0 </td><td></td></tr><tr><td>精密チップペイントブラシ</td><td>テッドペラ</td><td> 11806 </td><td></td></tr><tr><td> PAPブロッキングペン</td><td>テッドペラ、（株） </td><td> 22309 </td><td></td></tr><tr><td> SFXシグナルエンハンサー</td><td>インビトロジェン</td><td> A31631 </td><td></td></tr><tr><td>退色を延長</td><td>インビトロジェン</td><td> P7481 </td><td></td></tr></tbody></table>

strategies for study of neuroprotection from cold-preconditioning

神経損傷は、全身麻酔と、効果的な管理が容易で安全なプレコンディショニング治療法の開発により軽減することができる関連する外科的処置の罹患率と死亡率の原因となることが多い。我々は、傷害の発症前に脳を保護するための治療薬の開発のための新たなターゲットを特定する手段として、コールドプレコンディショニングを担当し神経免疫シグナルを定義しようとしています。時間の経過に伴う変化をシグナリング低レベルのプロ炎症性メディエーターは、冷間プレコンディショニング神経保護のために不可欠です。このシグナリングは、刺激性の刺激が明らかになることを保護するための刺激に適応するための十分な時間と閾値の大きさに達することを必要と生理的なコンディショニングのホルミシスの基本的な教義と一致しています。 従って、冷間プレコンディショニング神経保護に関与する免疫シグナルの線引きは、生物学的システムと実験操作に加え、技術的能力が高い再現性と小文字を区別することが必要です。我々のアプローチは密接に成熟しており、静止大膠細胞/ミクログリアの影響を受けた多シナプスニューラルネットワークによる生体のカウンターでを反映するin vitroモデルとしての海馬のスライス培養を使用することです。彼らはフェムトモル範囲の手術であるサイトカイン、の主要な供給源であるため、このグリア状態では、ミクログリアのために特に重要です。また、スライス培養、活性化刺激を呼び起こすと適応応答を評価するために十分な時間である、数週間のためにin vitroで維持することができます。最後に、環境条件を正確にそのサイトカインがコールドプレコンディショニングのシグナリングようにスライス培養を用いて制御することができるが、測定模倣、および重要なノードの側面を分析するように変調することができます。サイトカインシグナル伝達系の解析では、高感度で再現性の多重化技術を使用する必要があります。我々は、組織全体のサイトカインの変化を評価する定量的リアルタイム定量PCRアレイのスクリーニングに続いてミクログリアの活性化のために画面にTNF -αのために定量PCRを使用してください。後者は、同時に変更を通知する複数のサイトカインのシステムを測定する最も高感度で再現性の手段です。重要な変更は、対象となる定量PCRしてから、蛋白質の検出により確認されています。我々はLuminexの技術を使用して多重化ミクロスフェアのフローサイトメトリーアッセイを用いて組織ベースのサイトカインタンパク質の変化を探る。細胞特異的サイトカイン産生は、二重ラベルの免疫組織化学で決定されます。一緒になって、提案された調査の戦略に結合この脳組織の調製および使用のスタイルは、、コールドプレコンディショニングの利点を模倣することができる新たな治療法の開発のための潜在的なターゲットを特定するための最適なアプローチかもしれない。

Watch this Scientific Journal Video about Strategies for Study of Neuroprotection from Cold-preconditioning at JoVE.com

Strategies for Study of Neuroprotection from Cold-preconditioning

我々は、傷害の発症前に脳を保護するための治療薬の開発のための新たなターゲットを特定する手段として、コールドプレコンディショニングを担当し神経免疫シグナルを定義しようとしています。我々は生物学的システム、実験操作に加え、再現性の高いと小文字が区別される技術的能力を必要とするような作業のための戦略を提示する。

コー​​ルド - プレコンディショニングによる神経保護の研究のための戦略

Neurological injury is a frequent cause of morbidity and mortality from general anesthesia and related surgical procedures that could be alleviated by ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Laser Capture Microdissection of Drosophila Peripheral Neurons

Laser Capture Microdissection of Drosophila Peripheral Neurons

のレーザーキャプチャーマイクロダイセクションショウジョウバエ末梢ニューロン

The dendritic arborization (da) neurons of the Drosophila peripheral nervous system (PNS) provide an excellent model system in which to investigate the ...

Preparation of Acute Hippocampal Slices from Rats and Transgenic Mice for the Study of Synaptic Alterations during Aging and Amyloid Pathology

老化とアミロイド病理の間にシナプス変化の研究のためのラットおよびトランスジェニックマウスからの急性海馬スライスの準備

The rodent hippocampal slice preparation is perhaps the most broadly used tool for investigating mammalian synaptic function and plasticity. The ...

Vibrodissociation of Neurons from Rodent Brain Slices to Study Synaptic Transmission and Image Presynaptic Terminals

シナプス伝達とイメージシナプス前終末を研究するために齧歯類の脳スライスからの神経細胞のVibrodissociation

Mechanical dissociation of neurons from the central nervous system has the advantage that presynaptic boutons remain attached to the isolated neuron of ...

Sequential Photo-bleaching to Delineate Single Schwann Cells at the Neuromuscular Junction

シーケンシャル神経筋接合部におけるシングルシュワン細胞の輪郭を描くのにフォトブリーチング

Sequential photo-bleaching provides a non-invasive way to label individual SCs at the NMJ. The NMJ is the largest synapse of the mammalian nervous system ...

Membrane Potential Dye Imaging of Ventromedial Hypothalamus Neurons From Adult Mice to Study Glucose Sensing

グルコース感知を勉強する成体マウス由来の膜視床下部腹内側部のニューロンの電位色素イメージング

Studies of neuronal activity are often performed using neurons from rodents less than 2 months of age due to the technical difficulties associated with ...

Isolation of CA1 Nuclear Enriched Fractions from Hippocampal Slices to Study Activity-dependent Nuclear Import of Synapto-nuclear Messenger Proteins

Synapto核メッセンジャータンパク質の活性に依存する核内移行を研究するために海馬スライスからCA1原子力エンリッチ画分の単離

Studying activity dependent protein expression, subcellular translocation, or phosphorylation is essential to understand the underlying cellular ...

Real-Time Impedance-based Cell Analyzer as a Tool to Delineate Molecular Pathways Involved in Neurotoxicity and Neuroprotection in a Neuronal Cell Line

リアルタイム神経細胞株に神経毒性および神経保護に関与する分子経路を描写するツールとしてのインピーダンスベースの細胞分析装置

Many brain-related disorders have neuronal cell death involved in their pathophysiology. Improved in vitro models to study neuroprotective or neurotoxic ...

Organotypic Hippocampal Slice Cultures As a Model to Study Neuroprotection and Invasiveness of Tumor Cells

研究保護および腫瘍細胞の侵襲性をモデルとして脊髄海馬スライス培養

In organotypic hippocampal slice cultures (OHSC), the morphological and functional characteristics of both neurons and glial cells are well preserved. ...

Time-dependent Increase in the Network Response to the Stimulation of Neuronal Cell Cultures on Micro-electrode Arrays

マイクロ電極アレイにおけるニューロン細胞培養の刺激に対するネットワーク応答の時間依存的増加

Micro-electrode arrays (MEAs) can be used to investigate drug toxicity, design paradigms for next-generation personalized medicine, and study network ...

Experimental Models to Study the Neuroprotection of Acidic Postconditioning Against Cerebral Ischemia

脳虚血に対する酸性ポストコンディショニングの神経保護を研究するための実験モデル

Stroke is one of the leading causes of mortality and disability worldwide, with limited therapeutic approaches. As an endogenous strategy for ...

コー​​ルド - プレコンディショニングによる神経保護の研究のための戦略

コールド - プレコンディショニングによる神経保護の研究のための戦略