Name: specific marking of hiv-1 positive cells using a rev-dependent lentiviral vector expressing the green fluorescent protein
Uploaded: 2010-09-23T18:30:00
Duration: 9 min 53 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Specific Marking of HIV-1 Positive Cells using a Rev-dependent Lentiviral Vector Expressing the Green Fluorescent Protein at JoVE.com

وأيد العمل في جزء من دائرة الصحة العامة 1R01AI081568 منحة من NIAID لYW والتبرعات السخية من الجهات المانحة والدراجين من ركوب 2009 NYCDC الإيدز التي نظمتها وشركة روزن M. Day2

1. ترنسفكأيشن من البلازميدات لإنتاج الجسيمات التي تعتمد على رؤيا Lentiviral إعداد : ووصف القس تعتمد على ناقلات lentiviral GFP ، PNL - GFP - RRE - SA ، 4،5،6 سابقا. لتجميع الجسيمات إلى الفيروسية ، وكان contransfected البلازميد في HEK293 الخلايا التائية مع HIV - 1 بناء التعبئة والتغليف ، pCMVΔ8.2 (شريطة تتكرم الدكتور Dider Trono) ، وبلازميد يحمل بروتين سكري VSV - G (pHCMV - G) . تم تنفيذ ترنسفكأيشن خارج باستخدام الأسلوب فوسفات الكالسيوم. إعداد المخازن : 10 X HBS (Hepes التخزين المؤقت مالحة) أعد بحل 5 غرام من Hepes و 8 غم من كلوريد الصوديوم ، 0،37 غرام من بوكل ، 1 غرام من سكر العنب ، 0.103 غرام من الصوديوم هبو 2 4 (اللامائية) في 100 مليلتر من H 2 O. قسامة the10 العازلة HBS X في aliquots مل (1) ومخزن في -20 درجة مئوية. في وقت ترنسفكأيشن ، تحويل 10 X إلى HBS HBS X 2 مع H 2 O (1 : 5 تمييع) ، وضبط الرقم الهيدروجيني إلى ما بين 7،05-7،12. (لمدة 10 مل HBS X 2 ، فإنه يتطلب عادة حوالي 50 ميكرولتر من هيدروكسيد الصوديوم 1M). فلتر تعقيم العازلة HBS 2X التي تمر عبر مرشح 0.22 ميكرومتر ميليبور. وأدلى CaCl 2 العازلة حل CaCl 2 في Hepes 10 مم إلى تركيز 2M النهائي. ضبط الرقم الهيدروجيني إلى 5.8 ، تصفية وتعقيم العازلة المحل في 4 درجات مئوية. الإجراء : <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قبل يوم واحد لترنسفكأيشن والبذور 2 × 10 6 خلايا HEK293T في 100 مم طبق بيتري ، وتنمو الخلايا خلال الليل في 10 مل DMEM FBS 10 ٪ + 37 درجة مئوية ، 5 ٪ CO 2. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> في اليوم التالي ، وإزالة الخلايا من طاف واستبدالها مع 5 مل الطازجة DMEM FBS + 10 ٪ ، وخلايا الثقافة بشكل مستمر لمدة 4 ساعات. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> في أنبوب البوليسترين 5 مل ، أضف 480 ميكرولتر العازلة HBS 2X. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> في الثانية 5 مل أنبوب البوليسترين ، إضافة 60 ميكرولتر 2M CaCl 2 العازلة ، بلازميد الحمض النووي ، وترنسفكأيشن TE العازلة (1 ملم تريس ، EDTA 25 ملم ، ودرجة الحموضة 8.0) إلى وحدة تخزين ما مجموعه 480 ميكرولتر. لكل صحن بيتري ، ينبغي إضافة البلازميدات في نسبة 10 ميكروغرام من PNL - GFP - RRE - SA ، و 7.5 ميكروغرام من pCMVΔR8.3 ، و 2.5 ملغ من pHCMV - G. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة البلازميد الحمض النووي CaCl 2 نقطه نقطه الخليط في أنبوب HBS 2 X ، ويحضن في درجة حرارة الغرفة لمدة 30 دقيقة. وسوف يعجل غرامة النموذج. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة ميكرولتر 960 من الخليط نقطه نقطه بواسطة ماصة للخلايا. احتضان ثاني أكسيد الكربون في 37 ° C ، 5 2 ٪ بين عشية وضحاها. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> في اليوم التالي ، إزالة طاف وإضافة 10 مل الطازجة DMEM FBS + 10 ٪ ، واحتضان خلايا باستمرار في 37 ° C CO ، 5 2 ٪ بين عشية وضحاها. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> في 48 ترنسفكأيشن آخر ساعة ، الحصاد الفيروس عن طريق ازالة طاف ونقله في أنابيب معقمة 50 مل. إضافة 10 مل الطازج الطازجة DMEM FBS + 10 ٪ في كل طبق بيتري ، والاستمرار في الثقافة بين عشية وضحاها. تخزين طاف الفيروس في 4 درجات مئوية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تواصل الحصاد في آخر 72 ساعة ترنسفكأيشن عن طريق جمع طاف. الجمع بين جميع supernatants ، وأجهزة الطرد المركزي في supernatants في 500 x ج لمدة 15 دقيقة لتكوير وإزالة الحطام الخلية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تم جمع طاف وتصفيتها من خلال تصفية 0.22 ميكرومتر ميليبور. وتركز كذلك على الفيروس من خلال الحجم استبعاد الأعمدة. </li></ol> 2. تركيز الجسيمات الفيروسية وتحديد العيار الحجمي الفيروسية <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وتركزت الجسيمات الفيروسية حسب عمود الحجم الاستبعاد (100،000 ميغاواط قطع ، Centricoin). تم تحميل طاف الفيروسي في العمود ، وطرد في 6000 XG عند 4 درجة مئوية لمدة 15 دقيقة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وقد تم جمع طاف الفيروسية المركزة ، aliquoted ، وتخزينها في -80 درجة مئوية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تم تحديد عيار عن طريق العدوى الفيروسية من TNF المعاملة ، HIV - 1 إيجابية سترات خط الخلية ، J1.1 7. والخلايا المستزرعة في صفيحة جيدا في 96 2.5 × 5 10 خلايا لكل مل (100 مل حجم الإجمالي) ، واصاب مع 100 مل من المخفف متسلسل VNL - GFP - RRE - SA لمدة أسبوع. قدرت عيار (TCID50) من الجسيمات عن طريق العد الآبار GFP الإيجابية التالية طريقة ريد ومونش 8. </li></ol> 3. بمناسبة HIV - 1 خلايا ايجابي مع الجسيمات Lentiviral ، VNL - GFP - RRE - SA إعداد : لأول مرة كانت مصابة CD4 T خط الخلية البشرية ، CEM - SS ، مع HIV - 1. إصابة آخر في 48 ساعة ، وكانت superinfected الخلايا التي تحتوي على جزيئات lentiviral ، VNL - GFP - RRE - SA. عدوى التالية ليومين آخرين ، وجرى تحليل GFP إيجابية الخلايا التدفق الخلوي. كعنصر تحكم ، HIV - 1 أصيبوا مماثل المعافين CEM - SS - VNL الخلايا مع GFP - RRE - SA. أعطى فقط HIV - 1 - المصابة CEM - SS ارتفاع الخلايا إلى خلايا GFP ايجابية لكنها ليست مصابة HIV - 1 - SS CEM الخلايا. الإجراء : <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قبل ساعتين من الإصابة ، إضافة إلى تركيز polybrane النهائي 4 ملغ / مل. عدد الخلايا واتخاذ 2 × 10 5 خلايا لكل العدوى. تصيب الخلايا التي تحتوي على 200 نانوغرام (P24) من HIV - 1 - 3 NL4 لمدة 2 ساعة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> غسل الخلايا بواسطة الطرد المركزي في 300 x ج لمدة 10 دقائق ، resuspendالخلايا في الخلايا 2 × 5 10 / مل ، والثقافة في 37 درجة مئوية لمدة 48 ساعة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> عدد الخلايا واتخاذ 2 × 10 5 خلية لكل عدوى VNL - GFP - RRE - SA. إضافة 100 مل من VNL - GFP - RRE - SA واحتضان عند 37 درجة مئوية خلال الليل. غسل الخلايا وresuspend في 2 × 5 10 خلايا / مل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إجراء تحليل تدفق الخلوي في 48 عدوى آخر ساعة. وكانت الخلايا المصابة مكعبات ومعلق في paraformaldehede 500 مل 1 ٪ ، حضنت في درجة حرارة الغرفة لمدة 20 دقيقة ، وتحليلها ثم محلل FACScan (بيكتون ديكنسون). </li></ol> 4. ممثل النتائج إذا تم تنفيذ هذه التجارب بنجاح ، سيتم الكشف عن مجموعة من السكان GFP كبيرة في الخلايا CEM - SS - 1 - فيروس نقص المناعة البشرية المصابة من تدفق عداد الكريات ، في حين ، في السيطرة ، لن تكون الخلايا GFP ايجابية في الكشف عن HIV - 1 المعافين SS - CEM الخلايا. إذا كان يتم تنفيذها بنجاح التجارب ، والتي تعتمد على ناقلات رؤيا lentiviral ، VNL - GFP - RRE - SA ، سوف تسمح للكشف عن فيروس نقص المناعة البشرية محددة للغاية من السكان المقيمين في تكرار الخلية ، من خلال قياس مخضر التعبير (GFP) البروتين. في هذا المثال ، تم صبغ تحصد CEM - SS خلايا الفئران مع الأضداد وحيدة النسيلة PE المسمى ضد الماوس CD24 ، HSA ، وتحليلها ثم على تدفق عداد الكريات لكلا هائل سعيد أنعم والتعبير GFP. <img src="/files/ftp_upload/2198/2198fig1.jpg" alt="الشكل 1" /> الشكل 1. وكما هو موضح هنا ، تم الكشف عن مجموعة من السكان GFP كبير في HIV - 1 - الخلايا المصابة superinfected مع VNL - GFP - RRE - SA (الشكل 1C). في المقابل ، لم يتم اكتشاف خلايا GFP إيجابية في الخلايا إما CEM - SS HIV - 1 غير مصاب دون عدوى lentiviral (الشكل 1A) أو HIV - 1. الخلايا غير المصابة مع عدوى lentiviral (1B الشكل)

<ol>
	<li>Garcia, J. A., Wu, F. K., Mitsuyasu, R., Gaynor, R. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interactions+of+cellular+proteins+involved+in+the+transcriptional+regulation+of+the+human+immunodeficiency+virus.">Interactions of cellular proteins involved in the transcriptional regulation of the human immunodeficiency virus.</a> EMBO Journal. 6, 3761-3770 (1987).</li><li>Merzouki, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=HIV-1+gp120/160+expressing+cells+upregulate+HIV-1+LTR+directed+gene+expression+in+a+cell+line+transfected+with+HIV-1+LTR-reporter+gene+constructs.">HIV-1 gp120/160 expressing cells upregulate HIV-1 LTR directed gene expression in a cell line transfected with HIV-1 LTR-reporter gene constructs.</a> Cell Mol Biol (Noisy-le-grand. 41, 445-452 (1995).</li><li>Aguilar-Cordova, E., Chinen, J., Donehower, L., Lewis, D. E., Belmont, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+sensitive+reporter+cell+line+for+HIV-1+tat+activity,+HIV-1+inhibitors,+and+T+cell+activation+effects.">A sensitive reporter cell line for HIV-1 tat activity, HIV-1 inhibitors, and T cell activation effects.</a> AIDS Res Hum Retroviruses. 10, 295-301 (1994).</li><li>Wu, Y., Beddall, M. H., Marsh, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rev-dependent+lentiviral+expression+vector.">Rev-dependent lentiviral expression vector.</a> Retrovirology. 4, 12-12 (2007).</li><li>Wu, Y., Beddall, M. H., Marsh, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rev-dependent+indicator+T+cell+line.">Rev-dependent indicator T cell line.</a> Current HIV Research. 5, 395-403 (2007).</li><li>Young, J., Tang, Z., Yu, Q., Yu, D., Wu, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Selective+killing+of+HIV-1-positive+macrophages+and+T+Cells+by+the+Rev-dependent+lentivirus+carrying+anthrolysin+O+from+Bacillus+anthracis.">Selective killing of HIV-1-positive macrophages and T Cells by the Rev-dependent lentivirus carrying anthrolysin O from Bacillus anthracis.</a> Retrovirology. 5, 36-36 (2008).</li><li>Perez, V. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+HIV-1-infected+T+cell+clone+defective+in+IL-2+production+and+Ca2++mobilization+after+CD3+stimulation.">An HIV-1-infected T cell clone defective in IL-2 production and Ca2+ mobilization after CD3 stimulation.</a> Journal of Immunology. 147, 3145-3148 (1991).</li><li>Reed, L. J., Muench, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simple+method+of+estimating+fifty+percent+endpoints.">A simple method of estimating fifty percent endpoints.</a> American Journal of Hygiene. 27, 493-497 (1938).</li></ol>

الإعلان عن أي تضارب في المصالح.

كما هو الحال مع نواقل في وقت سابق المتقدمة التي تعتمد على التعبير تات ، وصف نظام القس هنا هو استغلال عملية تطور فيروس نقص المناعة البشرية. إدراج رؤيا - التبعية يجعل ناقلات LTR التعبير المستندة تعتمد اعتمادا كبيرا على وجود فيروس نقص المناعة البشرية تكرار. تطبيق هذه النواقل كما ذكرت هنا ، وفيروس نقص المناعة البشرية التي تعتمد على الصحفي ، ويقدم مقاربة الرواية الجديدة لتحديد الخلايا بفيروس نقص المناعة البشرية. الموجه تصاريح دراسة الخلايا الحية ، ويمكن التعبير عن أي الجينات الأساسية للتجريب أو السريرية ، ونتيجة لالفيروسة البطيئة شبه كتبته لديه حق الوصول إلى معظم أنواع الخلايا والأنسجة.

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Biosafety Cabinet</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>37&deg;C 5%CO2 incubator</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Flow cytometer</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>FACSCalibur</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Centrifuge</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Beckman</td>
<td>Allega&trade;6KR</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>4&deg;C regrigerator</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>-20&deg;C refrigerator</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td> -80&deg;C refrigerator</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Cell counter</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Nexcelom</td>
<td>Cellometer&trade; AutoT4</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>HEK293T cell line</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>NIH</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>CEM-SS cell line</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>NIH</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Jurkat cell line J1.1</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>NIH</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>DMEM</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>11965-118</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>RPMI 1640</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>21870</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>HI FBS</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>10438-018</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>HIV-1NL4-3</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>prepared by tranfsection of HeLa cells with cloned proviral DNA</td>
</tr>
<tr>
<td>pNL-GFP-RRE</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>copmlete deletion of all HIV ORFs of pNL4-3</td>
</tr>
<tr>
<td>pNL-GFP-RRE-SA</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Insert HIV-1 A5 and D4 into pNL-GFP-RRE</td>
</tr>
<tr>
<td>pCMV&Delta;8.2</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>provided by Dr. Dider Trono</td>
</tr>
<tr>
<td>pHCMV-G</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>10 x HBS (Hepes Buffered Saline)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>11344-041</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>2M CaCl2 buffer</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>S-013-154-10</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>1% paraformaldehy</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma Aldrich</td>
<td>158127</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Bleach</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>50ml Falcon tubes</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>BD Bioscience</td>
<td>358206</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>5ml round bottom tubes</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>BD Bioscience</td>
<td>352063</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>0.45&mu;M Millipore filter</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Millipore</td>
<td>SLHA033SS</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>0.20&mu;M Millipore filter</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Millipore</td>
<td>SLFG85000</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>100mm Petri-dish</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma Aldrich</td>
<td>CLS430588</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Size-exclusion column (100,000MW cut off)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>SartoriuStedim biotech</td>
<td>VS2041</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>2ml frozen tube</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Axygen</td>
<td>SCT-200</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>96-well plate</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>BD Bioscience</td>
<td>353227</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>1.7mL Microcentrifuge Tube</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Axygen</td>
<td>MCT- 175-C</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

specific marking of hiv-1 positive cells using a rev-dependent lentiviral vector expressing the green fluorescent protein

وتستند معظم ناقلات التعبير فيروس نقص المناعة البشرية التي تستجيب على مروج للفيروس ، وتكرار محطة الطويلة (LTR). بينما تستجيب لبروتين الفيروس في وقت مبكر ، تات ، وLTR هو أيضا استجابة لدول التنشيط الخلوي والنشاط لونين المحلية حيث التكامل حدث. وهذا يمكن أن يؤدي إلى نشاط مستقل عن فيروس نقص المناعة البشرية المرتفعة ، وفرضت قيودا على فائدة LTR المستندة إلى الخلايا بفيروس نقص المناعة البشرية مراسل علامة إيجابية 1،2،3. هنا ، وضعنا متجه التعبير lentiviral التي تمتلك ، بالإضافة إلى LTR تات التي تستجيب ، والعديد من تسلسل الحمض النووي لفيروس نقص المناعة البشرية التي تتضمن عنصر الاستجابة للرؤيا ومواقع الربط 4،5،6 فيروس نقص المناعة البشرية. تأسست الموجه الى فيروس مراسل lentiviral ، مما يتيح الكشف عن فيروس نقص المناعة البشرية محددة للغاية من تكرار السكان في الخلية الحية. وقد تم قياس نشاط ناقلات بواسطة التعبير مضان من البروتين الأخضر (GFP). تطبيق هذه النواقل كما ذكرت هنا يقدم نهجا بديلا للرواية الأساليب القائمة ، مثل فيروس نقص المناعة البشرية أو PCR الموقع تلطيخ مستضد ، لتحديد الخلايا بفيروس نقص المناعة البشرية. يمكن للناقلات أيضا أن أعرب عن الجينات العلاجية الأساسية للتجريب أو السريرية لاستهداف الخلايا بفيروس نقص المناعة البشرية.

Watch this Scientific Journal Video about Specific Marking of HIV-1 Positive Cells using a Rev-dependent Lentiviral Vector Expressing the Green Fluorescent Protein at JoVE.com

Specific Marking of HIV-1 Positive Cells using a Rev-dependent Lentiviral Vector Expressing the Green Fluorescent Protein

قمنا بتطوير lentiviral التي تمتلك ناقلات ، بالإضافة إلى LTR تات التي تستجيب ، العنصر رؤيا الاستجابة (RRE) التي يمكن أن تنظم مراسل التعبير الجيني بطريقة HIV - 1 تات وتعتمد على رؤيا. الموجه تصاريح محددة للكشف فيروس نقص المناعة البشرية في تكرار الخلايا الحية عن طريق التعبير عن GFP.

تمييز خلايا محددة HIV - 1 الإيجابية باستخدام المتجهات التي تعتمد على رؤيا Lentiviral وإذ تعرب عن البروتين الأخضر نيون

Most of HIV-responsive expression vectors are based on the HIV promoter, the long terminal repeat (LTR). While responsive to an early HIV protein, Tat, ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Genotypic Inference of HIV-1 Tropism Using Population-based Sequencing of V3

الاستدلال الوراثي من HIV - 1 Tropism باستخدام السكان على أساس تسلسل V3

Background: Prior to receiving a drug from CCR5-antagonist class in HIV therapy, a patient must undergo an HIV tropism test to confirm that his or her ...

Prediction of HIV-1 Coreceptor Usage (Tropism) by Sequence Analysis using a Genotypic Approach

Prediction of HIV-1 Coreceptor Usage Tropism by Sequence Analysis using a Genotypic Approach

التنبؤ الإشتخدام HIV-1 Coreceptor (Tropism) من خلال تحليل تسلسل الوراثي باستخدام نهج

Maraviroc (MVC) is the first licensed antiretroviral drug from the class of coreceptor antagonists. It binds to the host coreceptor CCR5, which is used by ...

In vitro Uncoating of HIV-1 Cores

In vitro Uncoating of HIV-1 Cores

Uncoating في المختبر من HIV - 1 النوى

The genome of the retroviruses is encased in a capsid surrounded by a lipid envelope. For lentiviruses, such as HIV-1, the conical capsid shell is ...

New Tools to Expand Regulatory T Cells from HIV-1-infected Individuals

أدوات جديدة لتوسيع الخلايا التائية التنظيمية من الأفراد HIV-1-المصابة

CD4+ Regulatory T cells (Tregs) are potent immune modulators and serve an important function in human immune homeostasis. Depletion of Tregs has led to ...

Assessing the Innate Sensing of HIV-1 Infected CD4+ T Cells by Plasmacytoid Dendritic Cells Using an Ex vivo Co-culture System.

Assessing the Innate Sensing of HIV-1 Infected CD4+ T Cells by Plasmacytoid Dendritic Cells Using an Ex vivo Co-culture System.

تقييم الفطرية الاستشعار من HIV-1 CD4 المصابة<sup&gt; +</sup&gt; T الخلايا عن طريق الخلايا الجذعية بلازماوية الشكل باستخدام<em&gt; خارج الحي</em&gt; المشارك ثقافة النظام.

HIV-1 innate sensing requires direct contact of infected CD4+ T cells with plasmacytoid dendritic cells (pDCs). In order to study this process, the ...

Conformational Evaluation of HIV-1 Trimeric Envelope Glycoproteins Using a Cell-based ELISA Assay

تقييم بتكوين لHIV-1 مغلف مثلوثي بروتينات سكرية باستخدام خلية القاعدة ELISA الفحص

HIV-1 envelope glycoproteins (Env) mediate viral entry into target cells and are essential to the infectious cycle. Understanding how those glycoproteins ...

Isolation of Exosomes from the Plasma of HIV-1 Positive Individuals

عزل Exosomes من البلازما من HIV-1 الأفراد ايجابية

Exosomes are small vesicles ranging in size from 30 nm to 100 nm that are released both constitutively and upon stimulation from a variety of cell types. ...

SILAC Based Proteomic Characterization of Exosomes from HIV-1 Infected Cells

SILAC القائم [بروتيوميك توصيف Exosomes من HIV-1 الخلايا المصابة

Proteomics is the large-scale analysis of proteins. Proteomic techniques, such as liquid chromatography tandem mass spectroscopy (LC-MS/MS), can ...

Dextran Enhances the Lentiviral Transduction Efficiency of Murine and Human Primary NK Cells

ديكستران يعزز كفاءة توصيل لينتيفيرال الخلايا ناغورني كاراباخ الابتدائي مورين والبشرية

The efficient transduction of specific genes into natural killer (NK) cells has been a major challenge. Successful transductions are critical to defining ...

Induction of Paralysis and Visual System Injury in Mice by T Cells Specific for Neuromyelitis Optica Autoantigen Aquaporin-4

التعريفي للشلل وإصابة النظام المرئي في الفئران التي تي الخلايا المحددة للبصري المياليني أقوابورين أوتوانتيجين-4

While it is recognized that aquaporin-4 (AQP4)-specific T cells and antibodies participate in the pathogenesis of neuromyelitis optica (NMO), a human ...