Name: determining cell number during cell culture using the scepter cell counter
Uploaded: 2010-11-26T18:00:00
Duration: 9 min 33 s
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1. A Importância da contagem de células <ol><li> As células de contagem é um passo necessário, mas tedioso para in vitro de cultura de células. </li><li> Concentrações de células consistente garantir a reprodutibilidade e precisão experimental. </li><li> Contagem de células são importantes para a vigilância da saúde e taxa de proliferação celular, avaliando imortalização ou transformação, para posterior semeadura células experimentos de transfecção, ou infecção, e preparação para celular baseado em ensaios. </li><li> Apesar da necessidade de velocidade e precisão na contagem de células, 71% de 400 pesquisadores entrevistaram contagem de células utilizando um hemocitômetro. Enquanto hemocytometry é barato, é trabalhoso e sujeito a viés de usuário e uso indevido, o que resulta na contagem imprecisa. </li><li> Fontes de erro em hemocytometry incluem: distribuição desigual de células na amostra, muitas ou poucas células na amostra, decisões subjetivas quanto a saber se uma determinada célula cai dentro da área de contagem definido, a contaminação do hemocitômetro, de usuário para usuário variação , variação e da taxa de hemocitômetro de enchimento. </li><li> Para aliviar o tédio associado com a contagem manual, 29% dos pesquisadores contagem de células usando dispositivos de células automatizado de contagem. No entanto, para a maioria dos pesquisadores, o preço associado a essas grandes instrumentos de bancada é uma barreira à sua utilização. </li><li> O contador de células Scepter é um dispositivo automático de mão que oferece a automação e precisão de contagem Coulter, a um custo relativamente baixo. </li><li> O sistema emprega o princípio Coulter de impedância baseado em detecção de partículas em um formato miniaturizado usando uma combinação de hardware analógico e digital para a detecção, processamento de sinais, dados, armazenamento e visualização gráfica. </li><li> O sensor disponível é projetado para receber uma microfabricated, zona de células-sensing que possibilita a discriminação por tamanho de célula e do volume celular em sub-micron e sub-picoliter resolução. </li><li> Reforçada com precisão líquido de manipulação de canais e eletrônica, o contador de células Scepter graficamente exibe estatísticas de população de células como um histograma. </li></ol> 2. Preparação de uma suspensão de células isoladas de Contagem <ol><li> Para usar o contador de células Scepter, comece diluindo uma suspensão única célula de células, em tampão fosfato salino. A concentração de células por mL 10,000-500,000 é o ideal. </li><li> Transferir 100 mL de células diluída para um microtubo de 1,5 mL. </li></ol> 3. Realizar a contagem de células usando o Scepter <ol><li> Ligar o contador de células Scepter pressionando e segurando a alternância na parte de trás do instrumento e aguarde as instruções na tela para aparecer. </li><li> Quando solicitado, conecte um sensor para o fim da unidade Scepter com o painel de eletrodo sensor de virada para a frente do instrumento. </li><li> Sensores cetro consistem em uma câmara de amostragem precisamente modulada, com uma zona de sensoriamento eletrônico e integrado de células-sensing eletrodos. Os sensores permitem discriminar tamanho da célula em sub-micron, resolução e volume de células em sub-picoliter resolução. </li><li> Sensor de engenharia consistente, garante que os volumes de amostra igual são contados e as medições são feitas tamanho exato. </li><li> Uma vez que o sensor é conectado, executar cada passo do processo de contagem de acordo com as instruções na tela da seguinte forma: </li><li> Quando a tela lê &quot;Mantenha o êmbolo para começar&quot;, o êmbolo. A tela, então, ler &quot;submergir o sensor.&quot; Submergir o sensor na solução de suspensão de células e solte o êmbolo para aspirar a suspensão celular para o sensor. </li><li> O êmbolo age como um sinal elétrico e vai chamar a amostra mais o volume morto no sensor. A velocidade ou precisão de mergulhar não importa como faz com pipetagem. Este processo vai demorar vários segundos. Quando estiver pronto, o instrumento emite um sinal sonoro, e &quot;Amostra carregado&quot; será exibido na tela. </li><li> Uma vez que a amostra é carregado no sensor, ela é puxada através da zona de detecção para avaliar o tamanho das células e volume da célula e, em seguida pelos microcanais. Uma vez que 50 mL de amostra é contado o sensor diz ao instrumento para parar a contagem. </li><li> Após a contagem estiver concluída, a tela do instrumento irá ler &quot;contagem completa. Por favor, remova o sensor e descarte.&quot; Siga o prompt, e remover e descartar o sensor. </li><li> O instrumento irá exibir um histograma de tamanho de célula ou de diâmetro em sua tela, bem como a concentração de células por ml. </li></ol> 4. Análise de Dados <ol><li> Após a contagem é completo eo histograma é mostrada no aparelho, aplicar portas pressionando o botão de alternância. Selecione &quot;gating auto&quot; ou &quot;último uso&quot; quer definir automaticamente o portão com base no perfil do histograma, ou para usar as portas a partir da contagem anterior. </li><li> Independentemente da seleção, os portões podem ser movidos manualmente para ajustar os dados. Pressione o botão alternar novamente para selecionar a porta a esquerda e para rolar aggle para mover o portão, como desejado. </li><li> Em seguida, pressione a alternar novamente para ativar a porta à direita e percorrer a alternar para colocar o portão certo. Clique novamente, uma nova célula de concentração, o volume celular médio e diâmetro será exibida. </li><li> A alternância também pode ser movido para qualquer lado para alternar a exibição entre data, hora, a média do tamanho das células, ea média do volume da célula. </li><li> Até 72 histogramas podem ser armazenados no próprio instrumento. Para carregar os dados para um computador pessoal, anexe o instrumento através da porta USB do cabo na tela. </li><li> No PC, clique duas vezes sobre a Aplicação de Software Scepter para o lançamento do software, em seguida, clique em &quot;connect&quot;. Todas as acusações serão automaticamente porta para o software. </li><li> O Software Aplicativo Scepter mostra o histograma detalhando a distribuição da população da cultura em volume ou diâmetro. Arquivos baixados poderão ser exportados para o Microsoft Excel, onde os dados brutos serão exibidos em caixas de diâmetros célula especificada ou volumes de células. </li></ol> 5. Resultados representante <ol><li> Dezenove diferentes linhagens celulares foram preparados para contagem e concentrações de partida teóricos foram determinados utilizando um contador Coulter. Estas suspensões de células foram então diluída para obter suspensões de células em concentrações célula teórica. </li><li> O contador de células Scepter foi então usada para determinar as concentrações de células. A Figura 1 mostra cinco diluições que foram medidos para cinco linhagens de células representante junto com a concentração de células teórica. </li><li> O alto grau de linearidade, conforme indicado pelos valores R2, demonstra que a contagem Scepter é um método confiável para as linhagens celulares testadas, através de uma ampla faixa operacional linear. </li><li> A precisão global relativa de contagem Scepter é demonstrado na Figura 2, em que os dados obtidos da contagem Scepter são comparados com as contagens obtidas Contando Coulter. </li><li> O log da contagem de células Scepter é plotado contra o log da contagem de Coulter, e mostra que, em todas as linhagens, conta Scepter coincidir com contagem de Coulter. </li><li> Contagem de 19 linhas de células foram realizadas usando um Z2 Coulter Counter, o contador de células Scepter, um contador automático baseado em visão, como Vi-Cell ou sistema de incontáveis, e um hemocytemeter. </li><li> As contagens foram realizadas de acordo com as instruções do fabricante, usando a mesma célula de partida de suspensão e diluição idênticos. Os resultados mostrados na Figura 3 demonstram que as concentrações de células medido pela contagem Scepter coincidem com concentrações de células teórica com alta linearidade. </li><li> O percentual de variação, ou CV, foi calculado para cada diluição de cada linha de células para cada sistema de contagem. A Figura 4 mostra os currículos% em média mais de 19 linhagens de células com respeito à concentração de células e método de contagem. </li><li> Dentro da faixa de operação, o contador de células Scepter é mais preciso do que a visão baseada contagem hemocitômetro, exibindo menores desvios-padrão e menores coeficientes médios de variação. </li><li> Contagem cetro é dez vezes mais rápido que hemocytometry e mais rápido que outros contadores automáticos também. Na Figura 5, Sf9, MCF7 e HEK293 células foram contadas utilizando os métodos descritos neste vídeo. </li><li> O tempo médio necessário para medir a concentração de células foi registrada. Note-se que hemocytometry foi realizada apenas uma vez por amostra. </li><li> Cetro faz medições com base no tamanho da célula. Assim, quaisquer alterações na morfologia celular podem ser capturados no histograma. Culturas saudáveis ​​exibir um belo sino distribuição de Gauss em forma, enquanto as células saudáveis, lyse, e causar uma mudança no histograma para a esquerda (Figura 6, painel esquerdo). </li><li> Da mesma forma, quando uma população de 50% de células mortas foram misturados com 50% de células vivas, as mudanças histograma também foram observados (Figura 6, painel direito). </li></ol><img src="/files/ftp_upload/2204/2204fig1.jpg" alt="Figura 1" /><img src="/files/ftp_upload/2204/2204fig2.jpg" alt="Figura 2" /><img src="/files/ftp_upload/2204/2204fig3.jpg" alt="Figura 3" /><img src="/files/ftp_upload/2204/2204fig4.jpg" alt="Figura 4" /><img src="/files/ftp_upload/2204/2204fig5.jpg" alt="Figura 5" /><img src="/files/ftp_upload/2204/2204fig6.jpg" alt="Figura 6" /><img src="/files/ftp_upload/2204/2204fig7.jpg" alt="Figura 7" />

<ol>
	<li>Barghshoon, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Cell Counting Survey. , (2009).</li><li>Tucker, K. G., Chalder, S., al-Rubeai, M., Thomas, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Measurement+of+hybridoma+cell+number,+viability,+and+morphology+using+fully+automated+image+analysis.">Measurement of hybridoma cell number, viability, and morphology using fully automated image analysis.</a> Enzyme Microb Technol. 16 (1), 29-35 (1994).</li><li>Houwen, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Fifty years of hematology innovation: the Coulter principle. , (2003).</li></ol>

Kathleen Ongena, Chandreyee Das, Janet L. Smith, Sónia Gil, e Grace Johnston são empregados por Millipore, que produz os instrumentos utilizados neste artigo.

Comparando o desempenho do contador de células Scepter com resultados de outros métodos de contagem, podemos concluir que este novo handheld, contador de células automatizado oferece contagens de células precisa, rápida e confiável através de uma ampla faixa operacional. A funcionalidade de contagem Scepter é um resultado da tecnologia de engenharia de precisão embutido na ponta do sensor ea instrumentação sofisticada contagem baseada no princípio de Coulter. A qualidade de desempenho sugere Scepter contando como método para aumentar a velocidade e melhorar a reprodutibilidade de ensaios baseados em células. O formato handheld permite tédio rápida direita livre contagem na capa de cultura de células.

<table border="1"><tbody><tr><td> Nome do material </td><td> Companhia </td><td> Número Catálogo </td><td> Comentário </td></tr><tr><td> Cetro 2,0 contador de células automatizado Handheld com 40 sensores Scepter mM </td><td> EMD Millipore </td><td> PHCC20040 </td><td></td></tr><tr><td> Cetro 2,0 contador de células automatizado Handheld com 60 sensores Scepter mM </td><td> EMD Millipore </td><td> PHCC20060 </td><td></td></tr><tr><td> Sensores cetro, 60 mm </td><td> EMD Millipore </td><td> PHCC60050 </td><td> Pacote de 50 de sensores </td></tr><tr><td> Sensores cetro, 40 mM </td><td> EMD Millipore </td><td> PHCC40050 </td><td> Pacote de 50 de sensores </td></tr><tr><td> Universal Power Adapter </td><td> EMD Millipore </td><td> PHCCPOWER </td><td> </td></tr><tr><td> Cetro de O-Ring Kit </td><td> EMD Millipore </td><td> PHCCOCLIP </td><td> 2 O-rings e uma tampa do filtro </td></tr></tbody></table>

determining cell number during cell culture using the scepter cell counter

Contagem de células é muitas vezes um passo necessário, mas tedioso para in vitro de cultura de células. Concentrações de células consistente garantir a reprodutibilidade e precisão experimental. Contagem de células são importantes para a vigilância da saúde e taxa de proliferação celular, avaliando imortalização ou transformação, para posterior semeadura células experimentos de transfecção, ou infecção, e preparação para celular baseado em ensaios. É importante que as contagens de células ser precisa, consistente e rápido, especialmente para medições quantitativas de respostas celulares. Apesar desta necessidade de rapidez e precisão na contagem de células, 71% de 400 pesquisadores entrevistaram uma contagem de células que usando um hemocitômetro. Enquanto hemocytometry é barato, é trabalhoso e sujeito a viés de usuário e uso indevido, o que resulta na contagem imprecisa. Hemocytometers são feitas de vidro óptico especial em que suspensões de células são carregados em volumes especificados e contadas sob um microscópio. Fontes de erros na hemocytometry incluem: distribuição desigual de células na amostra, muitas ou poucas células na amostra, decisões subjetivas quanto a saber se uma determinada célula cai dentro da área de contagem definido, a contaminação do hemocitômetro, de usuário para usuário variação e variação da taxa de enchimento hemocitômetro 2. Para aliviar o tédio associado com a contagem manual, 29% dos pesquisadores contagem de células usando células automatizado de contagem dispositivos, que incluem a visão baseada em contadores, sistemas que detectam as células usando o princípio Coulter, ou citometria de fluxo 1. Para a maioria dos pesquisadores, a principal barreira ao uso de um sistema automatizado é o preço associado a essas grandes instrumentos de bancada 1. O contador de células Scepter é um dispositivo automático de mão que oferece a automação e precisão de contagem Coulter, a um custo relativamente baixo. O sistema emprega o princípio Coulter de impedância baseado em detecção de partículas 3 em um formato miniaturizado usando uma combinação de hardware analógico e digital para a detecção, processamento de sinais, armazenamento de dados e visualização gráfica. A ponteira descartável é projetada com um microfabricated, zona de células-sensing que possibilita a discriminação por tamanho de célula e do volume celular em sub-micron e sub-picoliter resolução. Reforçada com precisão líquido de manipulação de canais e eletrônica, o contador de células Scepter relatórios de estatísticas de células população graficamente como um histograma.

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Determining Cell Number During Cell Culture using the Scepter Cell Counter

O contador de células Scepter é um dispositivo portátil automático que pode ser usado para contagem de células, monitor de diâmetro celular e volume, e ser usado para verificar a saúde e qualidade de populações celulares de uma cultura para outra.

Determinação do Número celular durante Cultura Celular usando o contador de células Scepter

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