Name: determining cell number during cell culture using the scepter cell counter
Uploaded: 2010-11-26T18:00:00
Duration: 9 min 33 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Determining Cell Number During Cell Culture using the Scepter Cell Counter at JoVE.com

1. Vikten av Cell Räkna <ol><li> Räkna celler är en nödvändig men tråkig steg för cellodling in vitro. </li><li> Konsekvent cell koncentrationer se experimentella reproducerbarhet och noggrannhet. </li><li> Blodkroppar viktiga för övervakning cell hälsa och spridning takt, bedömer immortalisering eller omvandling, sådd celler för senare experiment, transfektion eller infektion, och förberedelse för cell-baserade analyser. </li><li> Trots behovet av snabbhet och precision i cell räkna,, 71% av 400 forskare tillfrågade räkna celler med hjälp av en hemocytometer. Medan hemocytometry är billigt, det är mödosamt och under förutsättning att användaren partiskhet och missbruk, vilket resulterar i felaktiga räknas. </li><li> Felkällor i hemocytometry är: ojämn cell fördelning i urvalet, för många eller för få celler i provet, subjektiva beslut om huruvida en viss cell faller inom definierade räkna området, förorening av hemocytometer, användare-till-användare variation och variation av hemocytometer fyllnadsgrad. </li><li> För att lindra den tristess i samband med manuell räkning, 29% av forskarna räkna celler med hjälp av automatiserade cell räknar enheter. Men för de flesta forskare, är priset i samband med dessa stora bänkbaserade instrument som ett hinder för deras användning. </li><li> Spira celltalsräknare är en automatiserad handhållen enhet som erbjuder automatisering och riktigheten av Coulter räkna på en relativt låg kostnad. </li><li> Systemet sysselsätter Coulter principen om impedans-baserade partikel upptäckt i en miniatyriserad format med en kombination av analog och digital hårdvara för avläsning, signalbehandling, datalagring och grafisk display. </li><li> De disponibla sensorn är konstruerad med en mikrofabricerade, cell-sensing zon som möjliggör diskriminering av cellstorlek och cell volym på sub-micron och sub-picoliter upplösning. </li><li> Förbättrad precision vätske-hantering kanaler och elektronik, visar spira celltalsräknare grafiskt statistik cellpopulation som ett histogram. </li></ol> 2. Beredning av en enda cell, suspension Counting <ol><li> För att kunna använda disken Scepter cellen, börja med att späda en enda cell suspension av celler, fosfatbuffrad saltlösning. En koncentration av 10,000-500,000 celler per ml är optimal. </li><li> Överföring 100 mikroliter av utspädd celler till ett 1,5 ml mikrofugrör. </li></ol> 3. Utföra blodkroppar med spiran <ol><li> Slå på spiran celltalsräknare genom att trycka och hålla växla på baksidan av instrumentet och vänta på att instruktionerna på skärmen ska visas. </li><li> När du uppmanas att fästa en sensor i slutet av spira enheten med elektroden avkänning panelen vänd mot framsidan av instrumentet. </li><li> Spira Sensorerna består av en gjuten precision provtagning kammare, med en elektronisk avkänning zon och integrerad cell-avkänning elektroder. Sensorerna gör det möjligt att diskriminera cellstorlek på submikrona upplösning och cellvolym på sub-picoliter upplösning. </li><li> Konsekvent sensor teknik, ser till att lika provvolymer räknas och exakta storlek mätningar görs. </li><li> När givaren är ansluten, utför varje steg i räkna processen enligt instruktionerna på skärmen enligt följande: </li><li> När skärmen lyder &quot;Håll ned kolven för att börja&quot;, tryck in kolven. Skärmen kommer då att läsa &quot;dränka givaren.&quot; Sänk ner sensorn i cellsuspension lösningen och släpp kolven för att aspirera cellsuspension in i sensorn. </li><li> Kolven fungerar som en elektrisk signal och kommer att dra urvalet plus dödvolym in i sensorn. Hastigheten eller riktighet kasta sig spelar ingen roll som det gör med pipettering. Denna process kommer att ta flera sekunder. När du är klar kommer instrumentet pipa och &quot;Sample laddade&quot; visas på skärmen. </li><li> När provet är laddad i sensorn är det dras genom avkänningszonen att bedöma cellstorlek och cellvolym, sedan genom mikrokanaler. När 50 mikroliter av provet räknas sensorn berättar instrument för att sluta räkna. </li><li> När räkningen är klar kommer instrumentets skärm läsa &quot;Räkna Komplett. Ta bort sensorn och kasta.&quot; Följ uppmaningen och ta bort och kasta sensorn. </li><li> Instrumentet kommer då att visa ett histogram över cellens storlek eller diameter på sin skärm samt cellkoncentrationen per ml. </li></ol> 4. Data Analysis <ol><li> När räkningen är klar och histogram visas på instrumentet, applicera portar genom att trycka på strömknappen. Välj &quot;Auto gating&quot; eller &quot;användning sista&quot; att antingen automatiskt ställa in porten utifrån histogrammet profil, eller att använda portar från tidigare räknare. </li><li> Oavsett val, kan portarna manuellt flyttas för att finjustera uppgifterna. Tryck på strömknappen igen för att välja den vänstra porten och rulla tillggle att flytta grinden som önskat. </li><li> Tryck sedan växla igen för att aktivera den högra grinden och rulla växla för att placera rätt gate. Klicka igen, en ny cell koncentration, genomsnittlig cell volym och diameter visas. </li><li> Den växlar också kan flyttas till endera sidan för att växla mellan datum, tid, menar cellstorlek och menar cell volym. </li><li> Upp till 72 histogram kan lagras på själva instrumentet. För att ladda upp data till en dator, bifoga instrumentet via USB-kabeln porten på skärmen. </li><li> På PC, dubbelklicka på spiran programvara för att starta programmet och klicka sedan på &quot;Anslut&quot;. Allt räknas automatiskt port till programmet. </li><li> Spira Application Software visar histogram med uppgifter om befolkningens fördelning av kulturen i antingen volym eller diameter. Nedladdade filer kan sedan exporteras till Microsoft Excel, där rådata visas i soptunnor för angiven cell diameter eller volymer cell. </li></ol> 5. Representativa resultat <ol><li> Nitton olika cellinjer var förberedda på att räkna och teoretiska utgångspunkter koncentrationer bestämmas med hjälp av en Coulter Counter. Dessa cellsuspensioner därefter spädas vidare för att få cellsuspensioner på teoretisk cell koncentrationer. </li><li> Spira celltalsräknare användes sedan för att bestämma cell koncentrationer. Figur 1 visar 5 spädningar som mätts i 5 representativa cellinjer tillsammans med den teoretiska cellkoncentrationen. </li><li> Den höga graden av linjäritet som anges av R2-värden, visar att spira räkna är en tillförlitlig metod för cellinjer testades, över ett brett linjär räckvidd. </li><li> Den totala relativa noggrannhet Scepter räkna visas i figur 2, där data från spira räknar jämförs med räkningar från Coulter räknar. </li><li> Loggen av Scepter blodkroppar plottas mot stocken av Coulter räknas, och visar att, i alla testade cellinjer, spira räknar match Coulter räknas. </li><li> Räknar med 19 cellinjer utfördes med hjälp av en Z2 Coulter Counter, spira celltalsräknare, en automatiserad syn-baserad disk som Vi-cell eller Otaliga system och en hemocytemeter. </li><li> Räknar utfördes enligt tillverkarens anvisningar, med samma cell börjar fjädring och identiska spädningar. Resultaten visas i Figur 3 visar att cellen koncentrationer som uppmätts av Scepter räkna matchar teoretiska cell koncentrationer med hög linjäritet. </li><li> Andelen variationskoefficient, eller CV, beräknades för varje spädning av varje cellinje för varje räknesystem. Figur 4 visar den genomsnittliga% CV drygt 19 cellinjer med avseende på cellkoncentrationen och räknar metod. </li><li> Inom arbetsområdet är spira celltalsräknare mer exakt än vision baserad hemocytometer räkna, visning av små standardavvikelser och mindre genomsnittlig variationskoefficienterna. </li><li> Spira räkna är tio gånger snabbare än hemocytometry och snabbare än andra automatiserade räknare också. I Figur 5, SF9, MCF7 och HEK293 celler räknades med hjälp av de metoder som beskrivs i denna video. </li><li> Den genomsnittliga tid som krävs för att mäta cellkoncentrationen spelades in. Observera att hemocytometry utfördes endast en gång per prov. </li><li> Spira gör mätningar baserade på cellstorlek. Således förändringar i cellulära morfologi kan fångas i histogrammet. Friska kulturer visa en fin klockformad normalfördelning, medan sjuka celler, Lyse, och orsaka en förskjutning i histogrammet åt vänster (Figur 6, till vänster). </li><li> Likaså när en befolkning på 50% döda celler var blandade med 50% levande celler, var histogrammet flyttas också observeras (figur 6, högra panelen). </li></ol><img src="/files/ftp_upload/2204/2204fig1.jpg" alt="Figur 1" /><img src="/files/ftp_upload/2204/2204fig2.jpg" alt="Figur 2" /><img src="/files/ftp_upload/2204/2204fig3.jpg" alt="Figur 3" /><img src="/files/ftp_upload/2204/2204fig4.jpg" alt="Figur 4" /><img src="/files/ftp_upload/2204/2204fig5.jpg" alt="Figur 5" /><img src="/files/ftp_upload/2204/2204fig6.jpg" alt="Figur 6" /><img src="/files/ftp_upload/2204/2204fig7.jpg" alt="Figur 7" />

<ol>
	<li>Barghshoon, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Cell Counting Survey. , (2009).</li><li>Tucker, K. G., Chalder, S., al-Rubeai, M., Thomas, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Measurement+of+hybridoma+cell+number,+viability,+and+morphology+using+fully+automated+image+analysis.">Measurement of hybridoma cell number, viability, and morphology using fully automated image analysis.</a> Enzyme Microb Technol. 16 (1), 29-35 (1994).</li><li>Houwen, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Fifty years of hematology innovation: the Coulter principle. , (2003).</li></ol>

Kathleen Ongena, Chandreyee Das, Janet L. Smith, Sonia Gil, och Grace Johnston är anställda av Millipore, som producerar de instrument som används i denna artikel.

Jämföra prestanda spira celltalsräknare till resultaten från andra räknar metoder kan vi dra slutsatsen att den nya handhållna, automatiserad celltalsräknare ger precis, snabb och pålitlig celltal över ett brett arbetsområde. Funktionaliteten i Scepter räkna är ett resultat av den precision konstruerade tekniken inbäddade i sensorn spets och sofistikerade räknar instrumentering baserad på Coulter principen. Föreställningen kvalitet föreslår Scepter räknas som metod för att öka hastigheten och förbättra reproducerbarheten för cell-baserade analyser. Den handhållna formatet ger snabb tristess fritt räkna höger vid cellodling huven.

<table border="1"><tbody><tr><td> Materialnamn </td><td> Företag </td><td> Katalognummer </td><td> Kommentar </td></tr><tr><td> Spira 2,0 Handheld Automatiserad celltalsräknare med 40 sensorer ìm Scepter </td><td> EMD Millipore </td><td> PHCC20040 </td><td></td></tr><tr><td> Spira 2,0 Handheld Automatiserad celltalsräknare med 60 ìm Scepter Sensorer </td><td> EMD Millipore </td><td> PHCC20060 </td><td></td></tr><tr><td> Spira Sensorer, 60 ìm </td><td> EMD Millipore </td><td> PHCC60050 </td><td> 50 Förpackning med sensorer </td></tr><tr><td> Spira Sensorer, 40 ìm </td><td> EMD Millipore </td><td> PHCC40050 </td><td> 50 Förpackning med sensorer </td></tr><tr><td> Universal Power Adapter </td><td> EMD Millipore </td><td> PHCCPOWER </td><td> </td></tr><tr><td> Spira O-ring sats </td><td> EMD Millipore </td><td> PHCCOCLIP </td><td> 2 O-ringar och en filterlocket </td></tr></tbody></table>

determining cell number during cell culture using the scepter cell counter

Räkna celler är ofta en nödvändig men tråkig steg för cellodling in vitro. Konsekvent cell koncentrationer se experimentella reproducerbarhet och noggrannhet. Blodkroppar viktiga för övervakning cell hälsa och spridning takt, bedömer immortalisering eller omvandling, sådd celler för senare experiment, transfektion eller infektion, och förberedelse för cell-baserade analyser. Det är viktigt att celler vara korrekt, konsekvent och snabbt, särskilt för kvantitativa mätningar av cellulära svar. Trots detta behov av snabbhet och precision i cell räkna tillfrågade 71% av 400 forskare 1 som räknar celler med hjälp av en hemocytometer. Medan hemocytometry är billigt, det är mödosamt och under förutsättning att användaren partiskhet och missbruk, vilket resulterar i felaktiga räknas. Hemocytometers är tillverkade av speciella optiska glas som cellsuspensioner lastas i specificerade volymer och räknas i mikroskop. Felkällor i hemocytometry är: ojämn cell fördelning i urvalet, för många eller för få celler i provet, subjektiva beslut om huruvida en viss cell faller inom definierade räkna området, förorening av hemocytometer, användare-till-användare variation och variation av hemocytometer påfyllningshastigheten 2. För att lindra den tristess i samband med manuell räkning, 29% av forskarna räkna celler med hjälp av automatiserade cell räknar enheter, dessa inkluderar Vision-baserade diskar, system som upptäcker celler med Coulter princip eller flödescytometri 1. För de flesta forskare, är det huvudsakliga hindret för att använda ett automatiserat system priset i samband med dessa stora bänk instrument 1. Spira celltalsräknare är en automatiserad handhållen enhet som erbjuder automatisering och riktigheten av Coulter räkna på en relativt låg kostnad. Systemet sysselsätter Coulter principen om impedans-baserade partikel upptäckt 3 i en miniatyriserad format med en kombination av analog och digital hårdvara för avläsning, signalbehandling, datalagring och grafisk display. De disponibla tips är konstruerad med en mikrofabricerade, cell-sensing zon som möjliggör diskriminering av cellstorlek och cell volym på sub-micron och sub-picoliter upplösning. Förbättrad precision vätske-hantering kanaler och elektronik, rapporterar spira celltalsräknare statistik cellpopulation grafiskt visas som ett histogram.

Watch this Scientific Journal Video about Determining Cell Number During Cell Culture using the Scepter Cell Counter at JoVE.com

Determining Cell Number During Cell Culture using the Scepter Cell Counter

Spira Cell Counter är en handhållen automatisk funktion som kan användas för att räkna celler, övervaka cell diameter och volym, och användas för att kontrollera hälsan och kvaliteten på cellpopulationer från en kultur till nästa.

Bestämma Cell antal under cellodling med Counter Scepter Cell

Counting cells is often a necessary but tedious step for in vitro cell culture. Consistent cell concentrations ensure experimental reproducibility and ...

Research

JoVE Journal

Biology

Monitoring Dynamic Changes In Mitochondrial Calcium Levels During Apoptosis Using A Genetically Encoded Calcium Sensor

Övervakning dynamiska förändringar i mitokondriernas kalciumnivåer under apoptos Använda en genetiskt kodade Kalcium Sensor

Dynamic changes in intracellular calcium concentration in response to various stimuli regulates many cellular processes such as proliferation, ...

Lentiviral-mediated Knockdown During Ex Vivo Erythropoiesis of Human Hematopoietic Stem Cells

Lentiviral-mediated Knockdown During Ex Vivo Erythropoiesis of Human Hematopoietic Stem Cells

Lentiviral-medierad Knockdown Under Ex vivo Erytropoes av mänskliga hematopoetiska stamceller

Erythropoiesis is a commonly used model system to study cell differentiation. During erythropoiesis, pluripotent adult human hematopoietic stem cells ...

Determination of Mammalian Cell Counts, Cell Size and Cell Health Using the Moxi Z Mini Automated Cell Counter

Fastställande av däggdjurscellinjer Räknar och cellstorlek och cell hälsa Använda Moxi Z Mini Automated Cell Counter

Particle and cell counting is used for a variety of applications including routine cell culture, hematological analysis, and industrial controls1-5. A ...

Cell Tracking Using Photoconvertible Proteins During Zebrafish Development

Cell Spårning Med Photoconvertible proteiner under Zebrafish Utveckling

Embryogenesis is a dynamic process that is best studied by using techniques that allow the documentation of developmental changes in vivo. The use of ...

Blastomere Explants to Test for Cell Fate Commitment During Embryonic Development

Blastomer Explantat att testa Cell Fate engagemang under embryonal utveckling

Fate maps, constructed from lineage tracing all of the cells of an embryo, reveal  which tissues descend from each cell of the embryo.  Although fate maps ...

Live Imaging of Apoptotic Cell Clearance during Drosophila Embryogenesis

Live Imaging of Apoptotic Cell Clearance during Drosophila Embryogenesis

Live avbildning av Apoptotic Cell Utförsäljning under<em&gt; Drosophila</em&gt; Embryogenesis

The  proper elimination of unwanted or aberrant cells through apoptosis and  subsequent phagocytosis (apoptotic cell clearance) is crucial for normal  ...

Analyzing Craniofacial Morphogenesis in Zebrafish Using 4D Confocal Microscopy

Analysera Kraniofaciala Morphogenesis i Zebrafish Använda 4D konfokalmikroskopi

Time-lapse imaging is a technique that allows for the direct observation of the process of morphogenesis, or the generation of shape. Due to their optical ...

Comparison of Three Different Methods for Determining Cell Proliferation in Breast Cancer Cell Lines

Jämförelse av tre olika metoder för bestämning av cellproliferation i bröstcancercellinjer

Measuring cell proliferation can be performed by a number of different methods, each with varying levels of sensitivity, reproducibility and compatibility ...

Live Cell Fluorescence Microscopy to Observe Essential Processes During Microbial Cell Growth

Levande cellen fluorescensmikroskopi för att iaktta nödvändiga processer under mikrobiell celltillväxt

Core cellular processes such as DNA replication and segregation, protein synthesis, cell wall biosynthesis, and cell division rely on the function of ...

Analysis of Beta-cell Function Using Single-cell Resolution Calcium Imaging in Zebrafish Islets

Analys av Beta-cell-funktion som använder Single-cell Resolution kalcium Imaging i zebrafiskar holmar

Pancreatic beta-cells respond to increasing blood glucose concentrations by secreting the hormone insulin. The dysfunction of beta-cells leads to ...