Name: isolation of retinal stem cells from the mouse eye
Uploaded: 2010-09-11T17:00:00
Duration: 7 min 22 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Isolation of Retinal Stem Cells from the Mouse Eye at JoVE.com

Vi tackar Laura Clarke för hennes ovärderliga hjälp. Detta arbete stöds av NCE: Stem Cell Network, CIHR och NIH.

1. Förbered Analysera lösningar och lösningar Enzyme <ol><li> Gör Konstgjord cerebrospinalvätska (ACSF) och serumfritt Media förväg och kyla. </li><li> Väg ut kynurensyra (0,2 mg / ml) och lös i 10 ml Hilo ACSF i ett 37 ° C vattenbad i förväg eftersom den inte löses upp lätt. </li><li> Väg ut Trypsin (1,33 mg / ml) och Hyaluronidas (0,67 mg / ml) och placera i en 15 ml tub och hålla det vid -20 ° C tills det behövs. Tillsätt kynurensyra lösningen på detta rör och filter med hjälp av en 22-filter ìm sprutan strax före användning. </li><li> Väg trypsininhibitorerna (Ovamucoid: 1 mg / ml) och lös i varmt serumfritt Media och filtret med 22μm spruta filter. </li><li> Gör plätering media: serumfritt Medier som innehåller FGF2 (10 ng / ml) och Heparin (2 mikrogram / ml). </li></ol> 2. Isolera näthinnan stamceller från mus Eye <ol><li> Isolering av näthinnans stamceller sker i en specifik sterilt rum tillägnat primära kultur experiment. Innan start detta förfarande ställa in dissekera mikroskop och kall-ljuskälla, och sedan lägga ut den sterila dissekera instrument. Varje Huvan har ett hett pärla autoklav för sterilisering av instrumenten mellan stegen. </li><li> Vi kommer att isolera retinala stamceller från ögon som har placerats direkt i en steril petriskål innehåller artificiella cerebrospinalvätska (ACSF) efter de avlägsnas från möss offrade enligt godkänd djuretik protokoll. </li><li> Enligt dissekera mikroskopet, rengör ögat med pincett: bli av med hår och bindväv som är fäst på hornhinnan / skleral gränsen. Sedan överföra ögat till en ny maträtt med ACSF. </li><li> Medan försiktigt hålla ögat stilla med räfflad tång, använda vinklade mikro-dissekera en sax för att ta bort den okulära musklerna. Ta bort synnerven samt om det fortfarande är fäst vid ögat. Försök att inte trycka ihop ögat under denna process. Överför ögonen för en ny maträtt med ACSF. </li><li> Nästa använder böjda mikro-dissekera sax för att klippa ögat i hälften: börja på synnerven och skär genom mitten av hornhinnan, mötet tillbaka på synnerven när den kapade inleddes. Det är idealiskt om de två bitar av ögat är ungefär lika i storlek, eftersom detta kommer att göra nästa steg lättare. </li><li> Håll hornhinnor med två pincett försiktigt skala två ögat halvorna isär. Ta bort och kasta linsen, inälvor, och neurala retinal från ögat skal. Överför skal till en ny maträtt med ACSF. </li><li> Nu är vi redo att isolera ciliära epitelet. Till att börja orientera ögat skalet så att hornhinnan på höger och Retinal Pigmenterad (RPE) är till vänster. Försiktigt stiftet ögat skalet ner med rak pincett på RPE sidan. </li><li> Nästa, använd en skalpell för att skära i hornhinnan och iris bort från ciliära epitelet i ögat genom att försiktigt trycka nedåt på skalpell istället för att använda sågning rörelser. </li><li> Efter det skär ciliära epitelet bort från RPE. Använda icke-tandade pincett för att överföra remsa av ciliära epitelet till en ny 35-mm maträtt som innehåller ACSF. </li><li> På samma sätt isolera ciliära epitelet från det andra ögat skalet. </li><li> När båda ciliär epitelceller band har samlats in, överföra remsorna till en 35-mm maträtt innehållande 2 ml Dispase. Placera skålen med remsor i en 37 ° C inkubator i 10 minuter. </li><li> Efter 10 minuter, överföring remsorna från Dispase i en skål med 2 ml filtrerad trypsin, Hyaluronidas och kynurensyra. Placera skålen vid 37 ° C i 10 minuter. </li><li> Nu tillbaka till dissekera mikroskop. Håll sklera ner med rak pincett, använd botten av böjda icke-tandade pincett för att försiktigt skrapa ciliära epitelet bort från sklera. </li><li> Ta bort sklera från skålen. Allt som bör vara kvar i skålen nu är de celler av intresse och enzymet lösningen. </li><li> Med hjälp av en brand-polerat bomull-ansluten Överför denna lösning till en 14-ml-rör. Mal sönder denna lösning 30 gånger för att bryta isär epitelceller genom att försiktigt tvinga lösningen i och ut ur pipetten. </li><li> Centrifugera röret i 5 minuter vid 1500 rpm. När centrifugeringen är klar, ta bort röret från centrifugen noggrant eftersom cellerna är benägna att komma från botten av röret i detta skede. </li><li> Försiktigt aspirera majoriteten av supernatanten med en brand-polerad pipett och sedan tillsätt 1 ml av trypsin inhibitor i serum-fri media till cellerna. Använd en liten borrhål bomull ansluten pipett till mal sönder provet ungefär 50 gånger tills det är en encelliga suspension. </li><li> Centrifugera röret igen i 5 minuter vid 1500 rpm. </li><li> Avlägsna supernatanten och ersätta den med 1 mL din plätering medium. Kör det försiktigt med en brand-polerat glaspipett att resuspendera cellerna. </li><li> Efter att räknaning av celler, plattan dem på den önskade tätheten i 24-brunnar. Vi plattan vanligen 10 celler / mikroliter genom att fylla varje brunn först med medium och sedan lägga cellsuspensionen att få en slutlig volym på 500 mikroliter av media. </li><li> Placera plattan i ett 37 ° C CO 2 inkubator där den inte flyttas förrän du räkna kulor som uppstår efter 7 dagar. </li></ol> 3. Resultat av Isolera Retinal stamceller <ol><li> När detta förfarande utförs framgångsrikt, bör dissekerade strålkroppen epitelceller se ut så här efter att ha tagit avstånd och pläterade på låg densitet (Figur 1). </li><li> Efter 7 dagar i kultur, är de retinala stamceller sfärer som uppstår räknas. Ett område skall vara över 75 nm i diameter och fritt flytande ska räknas som en stamcell härrör sfär. (Figur 2). Dock kommer vissa celler har begränsad spridning och form spheroids som inte uppfyller storlek kriteriet och kommer inte att räknas som stamceller härstammar cell sfärer, ett exempel på en sådan sfäroid visas här (figur 2). </li></ol> 4. Representativa resultat <img src="/files/ftp_upload/2209/2209fig1.jpg" alt="Figur 1" /> Figur 1. <img src="/files/ftp_upload/2209/2209fig2.jpg" alt="Figur 2" /> Figur 2.

<ol>
	<li>Tropepe, V., Coles, B. L., Chiasson, B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Retinal+stem+cells+in+the+adult+mammalian+eye.">Retinal stem cells in the adult mammalian eye.</a> Science. 287, 2032-2036 (2000).</li><li>Ahmad, I., Tang, L., Pham, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+neural+progenitors+in+the+adult+mammalian+eye.">Identification of neural progenitors in the adult mammalian eye.</a> Biochem Biophys Res Commun. 270, 517-521 (2000).</li><li>Coles, B. L., Angenieux, B., Inoue, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Facile+isolation+and+the+characterization+of+human+retinal+stem+cells.">Facile isolation and the characterization of human retinal stem cells.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 101, 15772-15777 (2004).</li><li>Cicero, S. A., Johnson, D., Reyntjens, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cells+previously+identified+as+retinal+stem+cells+are+pigmented+ciliary+epithelial+cells.">Cells previously identified as retinal stem cells are pigmented ciliary epithelial cells.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 106, 6685-6690 (2009).</li><li>Lamba, D., Karl, M., Reh, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neural+regeneration+and+cell+replacement:+a+view+from+the+eye.">Neural regeneration and cell replacement: a view from the eye.</a> Cell Stem Cell. 2 (6), 538-549 (2008).</li><li>Coles, B. L., Horsford, D. J., McInnes, R. R., van der Kooy, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Loss+of+retinal+progenitor+cells+leads+to+an+increase+in+the+retinal+stem+cell+population+in+vivo.">Loss of retinal progenitor cells leads to an increase in the retinal stem cell population in vivo.</a> Eur J Neurosci. 23, 75-82 (2006).</li><li>Ang&#233;nieux, B., Schorderet, F. D., Arsenijevic, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epidermal+growth+factor+is+a+neuronal+differentiation+factor+for+retinal+stem+cells+in+vitro.">Epidermal growth factor is a neuronal differentiation factor for retinal stem cells in vitro.</a> Stem Cells. 24 (3), 696-706 (2006).</li><li>Xu, S., Sunderland, M. E., Coles, B. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+proliferation+and+expansion+of+retinal+stem+cells+require+functional+Pax6.">The proliferation and expansion of retinal stem cells require functional Pax6.</a> Dev Biol. 304, 713-721 (2007).</li><li>Canola, K., Ang&#233;nieux, B., Tekaya, M., Quiambao, A., Naash, M. I., Munier, F. L., Schorderet, D. F., Arsenijevic, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Retinal+stem+cells+transplanted+into+models+of+late+stages+of+retinitis+pigmentosa+preferentially+adopt+a+glial+or+a+retinal+ganglion+cell+fate.">Retinal stem cells transplanted into models of late stages of retinitis pigmentosa preferentially adopt a glial or a retinal ganglion cell fate.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 48 (1), 446-4454 (2007).</li><li>Canola, K., Arsenijevic, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+cells+committed+towards+the+photoreceptor+fate+for+retinal+transplantation.">Generation of cells committed towards the photoreceptor fate for retinal transplantation.</a> Neuroreport. 18 (9), 851-855 (2007).</li><li>Djojosubroto, M. W., Arsenijevic, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Retinal+stem+cells:+promising+candidates+for+retina+transplantation.">Retinal stem cells: promising candidates for retina transplantation.</a> Cell Tissue Res. 331 (1), 347-357 (2008).</li><li>Inoue, T., Coles, B. L., Dorval, K., Bremner, R., Bessho, Y., Kageyama, R., Hino, S., Matsuoka, M., Craft, C. M., McInnes, R. R., Tremblay, F., Prusky, G. T., van der Kooy, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Maximizing+functional+photoreceptor+differentiation+from+adult+human+retinal+stem+cells.">Maximizing functional photoreceptor differentiation from adult human retinal stem cells.</a> Stem Cells. 28 (3), 489-500 (2010).</li><li>Tropepe, V., Sibilia, M., Ciruna, B. G., Rossant, J., Wagner, E. F., Kooy, D. v. a. n. d. e. r. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Distinct+neural+stem+cells+proliferate+in+response+to+EGF+and+FGF+in+the+developing+mouse+telencephalon.+Dev+Biol.">Distinct neural stem cells proliferate in response to EGF and FGF in the developing mouse telencephalon. Dev Biol.</a> , 208-201 (1999).</li><li>Coles-Takabe, B. L., Brain, I., Purpura, K. A., Karpowicz, P., Zandstra, P. W., Morshead, C. M., van der Kooy, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Don't+look:+growing+clonal+versus+nonclonal+neural+stem+cell+colonies.">Don't look: growing clonal versus nonclonal neural stem cell colonies.</a> Stem Cells. 26 (11), 2938-2944 (2008).</li></ol>

Detta protokoll beskriver hur man isolera näthinnans stamceller från ciliära epitelet av musen ögat 1-3. Metoden för att isolera remsor av ciliära epitelet kan variera, men de enzymer och metodik för att uppnå en encelliga fjädring har optimerats i detta protokoll. Det är också viktigt att remsor av strålkroppen epitel som har isolerats inte innehåller stora mängder RPE eller hornhinna eftersom dessa verkar ha en negativ inverkan på det totala antalet områden som kan isoleras från varje öga. Dessutom är det serumfritt media som vi gör som ursprungligen formulerades för hjärnans neurospheres 13, perfekt för att odla retinal sfärer stamceller. Man bör också se till att cellerna inte störs när de har pläterade och placerats i inkubatorn så att den växande sfären inte samlade ihop 14. När näthinnans stamceller har bildat klonat sfärer, kan de räknas för att få en prospektiv antalet stamceller per öga. Sfärerna då kan sedan skiljas i enskilda celler och passerats för att fastställa självförnyelse funktioner eller differentierade i olika celltyper i neurala näthinnan och RPE med olika kombinationer av tillväxtfaktorer och / eller proteiner.

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Stemi 2000 Microscope</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Zeiss</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Cold Light Source</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Zeiss</td>
<td>KL1500 </td>
<td>dual arm optic light</td>
</tr>
<tr>
<td>Curved Mini Vannas scissors</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>FST</td>
<td>15000-10</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Angled Vannas scissors</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>FST</td>
<td>15005-08</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>#7 Dumont forceps</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>FST</td>
<td>11272-30</td>
<td>non-serrated</td>
</tr>
<tr>
<td>#5 Dumont forceps</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>FST</td>
<td>11251-10</td>
<td>straight</td>
</tr>
<tr>
<td>Fine forceps</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>FST</td>
<td>11051-10</td>
<td>serrated curved</td>
</tr>
<tr>
<td>#3 Scalpel handle</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Almedic</td>
<td>2586-M36-10</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>#10 Scalpel blades</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Almedic</td>
<td>2580-M90-10</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Hot Bead Sterilizer</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>FST</td>
<td>18000-45</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Dispase</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR/BD </td>
<td>CACB354235</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Trypsin</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>T1005</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Hyaluronidase</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>H6254</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Kynurenic Acid</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>K3375</td>
<td>1000 IU</td>
</tr>
<tr>
<td>Trypsin Inhibitor</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Roche</td>
<td>10109878001</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>35 mm dishes</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR/Nunc</td>
<td>CA354235</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>24-well plate</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR/Nunc</td>
<td>CA73521-004</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Cotton-plugged pipettes</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR</td>
<td>14672-400</td>
<td>fire-polish</td>
</tr>
<tr>
<td>14 mL Tubes</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Falcon</td>
<td>352057</td>
<td>Polystyrene</td>
</tr>
<tr>
<td>Serum-free Media</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Ref# 13 for formulation</td>
</tr>
<tr>
<td>FGF2</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>F0291</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Heparin</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>H3149</td>
<td>100 IU</td>
</tr>		</tbody>
		</table>
		</div>

isolation of retinal stem cells from the mouse eye

Den vuxna musen retinala stamceller (RSC) är en sällsynt rofylld cell finns inom ciliära epitelet (CE) av däggdjur ögat 1,2,3. CE består av icke-pigmenterade inre och pigmenterade yttre cellager och klonal RSC kolonier som uppstår från en enda pigmenterad cell från CE består av både pigmenterade och icke-pigmenterade celler som kan differentieras för att bilda alla celltyper av neurala näthinnan och RPE. Det finns en viss kontrovers om huruvida alla celler inom de områden alla innehålla åtminstone några pigment 4, men cellerna finns fortfarande i stånd att bilda olika celltyper som finns inom neurala näthinnan 1-3. Hos vissa arter, såsom groddjur och fiskar, deras ögon kan regeneration efter skada 5, dock, däggdjur ögat visar inga sådana regenerativ egenskaper. Vi strävar efter att identifiera de stamceller in vivo och att förstå de mekanismer som håller däggdjursceller näthinnans stamceller vilande 6-8, även efter skada och använder dem som en potentiell källa av celler för att reparera fysiska eller genetiska modeller av ögonskada genom transplantation 9-12. Här beskriver vi hur du kan isolera strålkroppen epitelceller från mus ögat och odla dem i kultur för att bilda klonal näthinnans sfärerna stamceller. Eftersom det inte finns några kända markörer för stamceller in vivo, dessa områden är de enda kända sättet att prospektivt identifiera befolkningen stamceller inom ciliära epitelet i ögat.

Watch this Scientific Journal Video about Isolation of Retinal Stem Cells from the Mouse Eye at JoVE.com

Isolation of Retinal Stem Cells from the Mouse Eye

I den här videon kommer vi att visa hur man kan isolera näthinnans stamceller från ciliära epitelet av musen ögat och odla dem i kultur för att bilda klonat näthinnan sfärer. De områden som är isolerade har kardinalen egenskaper stamceller: självförnyelse och multipotentiality.

Isolering av näthinnan stamceller från mus Eye

The adult mouse retinal stem cell (RSC) is a rare quiescent cell found within the ciliary epithelium (CE) of the mammalian eye1,2,3. The CE is made up of ...

Research

JoVE Journal

Biology

Isolation and Analysis of Hematopoietic Stem Cells from the Placenta

Isolering och analys av hematopoetiska stamceller från moderkakan

Hematopoietic stem cells (HSCs) have the ability to self-renew and generate all cell types of the blood lineages throughout the lifetime of an individual. ...

Isolation and Derivation of Mouse Embryonic Germinal Cells

Isolering och Härledning av Mouse Embryonala Germinal celler

The ability of embryonic germinal cells (EG) to differentiate into primordial germinal cells (PGCs) and later into gametes during early developmental ...

Isolation of Stem Cells from Human Pancreatic Cancer Xenografts

Isolering av stamceller från mänskliga xenografter Pankreascancer

Cancer stem cells (CSCs) have been identified in a growing number of malignancies and are functionally defined by their ability to undergo self-renewal ...

Isolation of Mouse Salivary Gland Stem Cells

Isolering av Mouse Saliv celler Gland Stem

Mature salivary glands of both human and mouse origin comprise a minimum of five cell types, each of which facilitates the production and excretion of ...

Isolation &#38; Characterization of Hoechstlow CD45negative Mouse Lung Mesenchymal Stem Cells

Isolation & Characterization of Hoechstlow CD45negative Mouse Lung Mesenchymal Stem Cells

Isolering och karakterisering av Hoechst Låg CD45 Negativa Mus Lung mesenkymala stamceller

Tissue resident mesenchymal stem cells (MSC) are important regulators of tissue repair or regeneration, fibrosis, inflammation, angiogenesis and tumor ...

Generation of Mice Derived from Induced Pluripotent Stem Cells

Generering av möss härledda från inducerade pluripotenta stamceller

The production of induced pluripotent stem cells (iPSCs) from somatic cells provides a means to create valuable tools for basic research and may also ...

Isolation and Culture of Dental Epithelial Stem Cells from the Adult Mouse Incisor

Isolering och kultur av Dental epitelceller stamceller från vuxen mus Incisor

Understanding the cellular and molecular mechanisms that underlie tooth regeneration and renewal has become a topic of great interest1-4, and the mouse ...

Trans-inner Cell Mass Injection of Embryonic Stem Cells Leads to Higher Chimerism Rates

Trans-inner Cell Mass injektion av embryonala stamceller leder till högre chimärism

In an effort to increase efficiency in the creation of genetically modified mice via ES Cell methodologies, we present an adaptation to the current ...

Primary Cell Cultures from the Mouse Retinal Pigment Epithelium

Primära cellkulturer från mus Retinal pigmentepitel

The retinal pigment epithelium (RPE) is a highly polarized multi-functional epithelium that is located between the neural retina and the choroid of the ...

Isolation, Characterization, and Differentiation of Cardiac Stem Cells from the Adult Mouse Heart

Isolering, karakterisering och differentiering av hjärt stamceller från vuxna mus hjärtat

Myocardial infarction (MI) is a leading cause of morbidity and mortality around the world. A major goal of regenerative medicine is to replenish the dead ...