Name: profiling of pre-micro rnas and micrornas using quantitative real-time pcr (qpcr) arrays
Uploaded: 2010-12-03T17:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Profiling of Pre-micro RNAs and microRNAs using Quantitative Real-time PCR qPCR Arrays at JoVE.com

<p class="jove_content" style=";text-align:right;direction:rtl"> وأيد هذا العمل من قبل المعاهد الوطنية للصحة منح DE018304 ، R01DE018281. معتمد من قبل KT GM07092 T32 - 34 ومنحة لجامعة ولاية كارولينا الشمالية في تشابل هيل من معهد هوارد هيوز الطبي (HHMI) من خلال مبادرة متوسطية في غراد. معتمد من قبل PC T32 CA009156. </p>

<p class="jove_content" style=";text-align:right;direction:rtl"> يمكن تعيين صفائف qPCR التنميط المسبق على النحو ميرنا مؤتمتة بالكامل مع الروبوت Tecan ايفو الحرية (A) أو باليد مع مصفوفة متعددة ماصة الإلكترونية (B). </p><p class="jove_title" style=";text-align:right;direction:rtl"> 1) تحضير مزيج الرئيسي ، لوحات التمهيدي والعينات. </p><ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:rig...

<ol>
	<li>Bustin, A. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+MIQE+Guidelines:+Minimum+Information+for+Publication+of+Quantitative+Real-Time+PCR+Experiments.">The MIQE Guidelines: Minimum Information for Publication of Quantitative Real-Time PCR Experiments.</a> <em style='font-style: italic'>Clinical Chem</em>. <b>55</b> (4), 611-622 (2009).</li><li>Fr&#233;geau, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Automated+Processing+of+Forensic+Casework+Samples+using+Robotic+Workstations+Equipped+with+Nondisposable+Tips+-+Contamination+Prevention.">Automated Processing of Forensic Casework Samples using Robotic Workstations Equipped with Nondisposable Tips - Contamination Prevention.</a> <em style='font-style: italic'>J. Forensic Sci</em>. <b>53</b> (3), 53-533 (2008).</li><li>O'hara, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pre-micro+RNA+Signatures+Delineate+Stages+of+Endothelial+Cell+Transformation+in+Kaposi+Sarcoma.">Pre-micro RNA Signatures Delineate Stages of Endothelial Cell Transformation in Kaposi Sarcoma.</a> <em style='font-style: italic'>PLoS Pathog</em>. <b>5</b> (4), e1000389-e1000389 (2009).</li></ol>

<p class="jove_content" style=";text-align:right;direction:rtl"> QPCR هو مقايسة حساسة للغاية والتي يمكن استخدامها للمقارنة بين مستويات التعبير الجيني بين العينات في الدراسة ، وكذلك لتحديد بالفيروس في حالة من الفيروسات. الفائدة من استخدام صفائف qPCR هو القدرة على تشغيل العديد من المشارع (في حالتنا ، أزواج التمهيدي 186) لكل عينة في فترة ق...

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Freedom Evo 150</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Tecan</td>
<td>30017587</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Matrix Electronic Multichannel Pipette</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Thermo Scientific</td>
<td>2001-MTX</td>
<td>(or any comparable Thermo Scientific multichannel that can pipette the volumes described above)</td>
</tr>
<tr>
<td>Matrix Integrity Filter Tips, Sterile</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Thermo Scientific</td>
<td>7435</td>
<td>(or comparable tip for multichannel used)</td>
</tr>
<tr>
<td>Lightcycler 480 SYBR Green 1 Master</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Roche</td>
<td>04 707 516 001</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Lightcycler 480 Instrument II</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Roche</td>
<td>05015243001</td>
<td>384-well version</td>
</tr>
<tr>
<td>Lightcycler 480 Multiwell Plate 384, white</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Roche</td>
<td>04729749001</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>LightCycler 480 Sealing Foil</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Roche</td>
<td>04729757001</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>LightCycler 480 Multiple Plate Analysis Software</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Roche</td>
<td>05075122001</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Eliminase Decontaminant</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Decon Laboratories</td>
<td>04-355-31</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>
	

profiling of pre-micro rnas and micrornas using quantitative real-time pcr (qpcr) arrays

<p class="jove_content">وقد برزت الكمي في الوقت الحقيقي PCR (QPCR) كأداة قيمة ودقيقة في توصيف مستويات التعبير الجيني. واحدة من مزاياها العديدة هو الحد الأدنى للكشف بالمقارنة مع غيرها من أساليب التعبير الجيني التنميط أثناء استخدام كميات صغيرة من المدخلات لكل مقايسة. وقد تحسنت الآلي qPCR الإعداد هذا المجال من خلال السماح لمزيد من التكاثر. الإعداد لها مريحة وسريعة تتيح للتجارب التي مرت عالية ، مما مكن من التنميط جينات كثيرة مختلفة في وقت واحد في كل تجربة. هذا الأسلوب مع لوحة التحكم الداخلية يقلل أيضا من المتغيرات التجريبية المشتركة لتقنيات أخرى. قمنا بتطويرها مؤخرا لفحص qPCR التنميط المسبق من microRNAs (ما قبل miRNAs) باستخدام مجموعة من أزواج التمهيدي 186. ظهرت MicroRNAs كطبقة رواية صغيرة ، الرناوات غير الترميز لديهم القدرة على تنظيم العديد من الأهداف مرنا في مرحلة ما بعد النسخي. وكتب أولا هذه الرنا RNA الصغيرة بوليميريز الثاني باعتباره ميرنا الابتدائي (الحزب الثوري المؤسسي ، ميرنا) نسخة ، وهو المشقوق ثم إلى ميرنا السلائف (ما قبل ميرنا). ويتم تصدير ما قبل miRNAs إلى السيتوبلازم حيث يشق المقامر حلقة منعطف حاد لانتاج miRNAs ناضجة. ويمكن ملاحظة زيادة في مستويات ميرنا على السلائف وعلى صعيد ميرنا ناضجة والتنميط من كل من هذه الأشكال يمكن أن تكون مفيدة. هناك عدة فحوصات متوفرة تجاريا للmiRNAs ناضجة ، ولكن تكلفتها العالية قد تردع هذه التقنية الباحثين من التنميط. هنا ، نحن نناقش فعالة من حيث التكلفة وموثوق بها ، وطريقة qPCR SYBR القائمة على التنميط المسبق miRNAs. التغيرات في مستويات ما قبل ميرنا غالبا ما تعكس التغييرات ميرنا ناضجة ويمكن أن تكون مؤشرا مفيدا التعبير ميرنا ناضجة. ومع ذلك ، قد التنميط المتزامن لكلا miRNAs قبل أن تنضج وmiRNAs الأمثل لأنها يمكن أن تساهم المعلومات nonredundant وتوفير نظرة ثاقبة تجهيز microRNA. وعلاوة على ذلك ، يمكن توسيع هذه التقنية وصفها هنا ليشمل مجموعات من التنميط مكتبة أخرى لمسارات محددة أو مسببات الأمراض.</p>

Watch this Scientific Journal Video about Profiling of Pre-micro RNAs and microRNAs using Quantitative Real-time PCR qPCR Arrays at JoVE.com

Profiling of Pre-micro RNAs and microRNAs using Quantitative Real-time PCR qPCR Arrays

<p class="jove_content">وسوف نظهر الإعداد وتحليل microRNA - 96 - جيدا قبل صفائف QPCR باستخدام الروبوت وكذلك جنب مع ماصة العلمية الحرارية الأقنية ماتريكس.</p>

من التنميط المسبق الجزئي الرناوات و microRNAs باستخدام الكمية في الوقت الحقيقي PCR (qPCR) صالحة

Quantitative real-time PCR (QPCR) has emerged as an accurate and valuable tool in profiling gene expression levels.  One of its many advantages is a lower ...

Research

JoVE Journal

Biology

Profiling of Pre-micro RNAs and microRNAs using Quantitative Real-time PCR (qPCR) Arrays

Quantitative Real-Time PCR using the Thermo Scientific Solaris qPCR Assay

الكمية في الوقت الحقيقي باستخدام PCR العلمية الحرارية سولاريس qPCR الفحص

The Solaris qPCR Gene Expression Assay is a novel type of primer/probe set, designed to simplify the qPCR process while maintaining the sensitivity and ...

Analysis of Gene Expression in Emerald Ash Borer (<em>Agrilus planipennis</em>) Using Quantitative Real Time-PCR

Analysis of Gene Expression in Emerald Ash Borer Agrilus planipennis Using Quantitative Real Time-PCR

تحليل التعبير الجيني في الحفار الرماد الزمرد (<em> Agrilus planipennis</em>) عن طريق ريال الكمية من الزمن - PCR

Emerald ash borer (EAB, Agrilus planipennis) is an exotic invasive pest, which has killed millions of ash trees (Fraxinus spp) in North America. EAB ...

Determining Genetic Expression Profiles in <em>C. elegans</em> Using Microarray and Real-time PCR

Determining Genetic Expression Profiles in C. elegans Using Microarray and Real-time PCR

تحديد ملامح التعبير الجيني في<em> C. ايليجانس</em> استخدام ميكروأري وPCR الوقت الحقيقي

Synapses are composed of a presynaptic active zone in the signaling cell and a postsynaptic terminal in the target cell. In the case of chemical synapses, ...

Quantitative, Real-time Analysis of Base Excision Repair Activity in Cell Lysates Utilizing Lesion-specific Molecular Beacons

كمي، في الوقت الحقيقي وتحليل قاعدة الختان في نشاط إصلاح Lysates خلية الاستفادة من الآفات محددة منارات الجزيئية

We describe a method for the quantitative, real-time measurement of DNA glycosylase and AP endonuclease activities in cell nuclear lysates using base ...

Profiling Individual Human Embryonic Stem Cells by Quantitative RT-PCR

التنميط الفردية الخلايا الجذعية الجنينية البشرية من خلال الكمي RT-PCR

Heterogeneity of stem cell population hampers detailed understanding of stem cell biology, such as their differentiation propensity toward different ...

Real Time Measurements of Membrane Protein:Receptor Interactions Using Surface Plasmon Resonance (SPR)

Real Time Measurements of Membrane Protein:Receptor Interactions Using Surface Plasmon Resonance SPR

قياسات الوقت الحقيقي من البروتين غشاء: مستقبلات التفاعلات عن طريق مأكل السطح الرنين (SPR)

Protein-protein interactions are pivotal to most, if not all, physiological processes, and  understanding the nature of such interactions is a central ...

Probe-based Real-time PCR Approaches for Quantitative Measurement of microRNAs

يستند التحقيق، في الوقت الحقيقي PCR مقاربات للقياس الكمي من microRNAs

Probe-based quantitative PCR (qPCR) is a favoured method for measuring transcript abundance, since it is one of the most sensitive detection methods that ...

qPCRTag Analysis - A High Throughput, Real Time PCR Assay for Sc2.0 Genotyping

تحليل qPCRTag - إنتاجية عالية، في الوقت الحقيقي PCR الفحص لSc2.0 التنميط الجيني

The Synthetic Yeast Genome Project (Sc2.0) aims to build 16 designer yeast chromosomes and combine them into a single yeast cell. To date one synthetic ...

Absolute Quantification of Plasma MicroRNA Levels in Cynomolgus Monkeys, Using Quantitative Real-time Reverse Transcription PCR

القياس الكمي المطلق من مستويات البلازما MicroRNA في القرود سينومولوغوس، استخدام النسخ العكسي في الوقت الحقيقي الكمي PCR

RT-qPCR is one of the most common methods to assess individual target miRNAs. MiRNAs levels are generally measured relative to a reference sample. This ...

Real-Time Monitoring of Aurora kinase A Activation using Conformational FRET Biosensors in Live Cells

المراقبة في الوقت الحقيقي لتنشيط Aurora kinase A باستخدام أجهزة الاستشعار الحيوية FRET التوافقية في الخلايا الحية

Epithelial cancers are often hallmarked by the overexpression of the Ser/Thr kinase Aurora A/AURKA. AURKA is a multifunctional protein that activates upon ...