Name: analysis of schwann-astrocyte interactions using in vitro assays
Uploaded: 2011-01-13T23:59:00
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Wir möchten Philippa Warren für ihre freundliche Hilfe danken.

1. Boundary-Test: <ol><li> Grundlegende Zubereitung: Chamber Slides sind mit Poly-D-Lysin über Nacht und sterile Objektträger beschichtet sind, bevor das Experiment vorbereitet. Medium wird hergestellt unter Verwendung Dulbecco modifiziertem Eagle-Medium (DMEM) mit 10% fötalem Kälberserum (FCS) und 1% Penicillin-Streptomycin-Fungizon (PSF). Auch eine Flasche Calcium / Magnesium freie Hanks balanced salt solution (HBSS) hergestellt. </li><li> Primäre Ratten-Schwann-Zellen in Kolben kultiviert werden für 3 Minuten...

<ol>
	<li>Assouline, J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rat+astrocytes+and+Schwann+cells+in+culture+synthesize+nerve+growth+factor-like+neurite-promoting+factors.">Rat astrocytes and Schwann cells in culture synthesize nerve growth factor-like neurite-promoting factors.</a> Brain Res. 428, 103-118 (1987).</li><li>Taylor, J. S., Bampton, E. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Factors+secreted+by+Schwann+cells+stimulate+the+regeneration+of+neonatal+retinal+ganglion+cells.">Factors secreted by Schwann cells stimulate the regeneration of neonatal retinal ganglion cells.</a> J Anat. 204, 25-31 (2004).</li><li>Reichardt, L. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Integrins+and+cell+adhesion+molecules:+neuronal+receptors+that+regulate+axon+growth+on+extracellular+matrices+and+cell+surfaces.">Integrins and cell adhesion molecules: neuronal receptors that regulate axon growth on extracellular matrices and cell surfaces.</a> Dev Neurosci. 11, 332-347 (1989).</li><li>Chiu, A. Y., Monteros, ., Espinosa de los, A., Cole, R. A., Loera, S., de Vellis, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Laminin+and+s-laminin+are+produced+and+released+by+astrocytes,+Schwann+cells,+and+schwannomas+in+culture.">Laminin and s-laminin are produced and released by astrocytes, Schwann cells, and schwannomas in culture.</a> Glia. 4, 11-24 (1991).</li><li>Blakemore, W. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Remyelination+of+CNS+axons+by+Schwann+cells+transplanted+from+the+sciatic+nerve.">Remyelination of CNS axons by Schwann cells transplanted from the sciatic nerve.</a> Nature. 266, 68-69 (1977).</li><li>Andrews, M. R., Stelzner, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+olfactory+ensheathing+and+schwann+cells+after+implantation+into+a+dorsal+injury+of+adult+rat+spinal+cord.">Evaluation of olfactory ensheathing and schwann cells after implantation into a dorsal injury of adult rat spinal cord.</a> J Neurotrauma. 24, 1773-1792 (2007).</li><li>Iwashita, Y., Fawcett, J. W., Crang, A. J., Franklin, R. J., Blakemore, W. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Schwann+cells+transplanted+into+normal+and+X-irradiated+adult+white+matter+do+not+migrate+extensively+and+show+poor+long-term+survival.">Schwann cells transplanted into normal and X-irradiated adult white matter do not migrate extensively and show poor long-term survival.</a> Exp Neurol. 164, 292-302 (2000).</li><li>Lakatos, A., Franklin, R. J., Barnett, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Olfactory+ensheathing+cells+and+Schwann+cells+differ+in+their+in+vitro+interactions+with+astrocytes.">Olfactory ensheathing cells and Schwann cells differ in their in vitro interactions with astrocytes.</a> Glia. 32, 214-225 (2000).</li><li>Lakatos, A., Barnett, S. C., Franklin, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Olfactory+ensheathing+cells+induce+less+host+astrocyte+response+and+chondroitin+sulphate+proteoglycan+expression+than+Schwann+cells+following+transplantation+into+adult+CNS+white+matter.">Olfactory ensheathing cells induce less host astrocyte response and chondroitin sulphate proteoglycan expression than Schwann cells following transplantation into adult CNS white matter.</a> Exp Neurol. 184, 237-246 (2003).</li><li>Ghirnikar, R. S., Eng, L. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Astrocyte-Schwann+cell+interactions+in+culture.">Astrocyte-Schwann cell interactions in culture.</a> Glia. 11, 367-377 (1994).</li><li>Ghirnikar, R. S., Eng, L. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chondroitin+sulfate+proteoglycan+staining+in+astrocyte-Schwann+cell+co-cultures.">Chondroitin sulfate proteoglycan staining in astrocyte-Schwann cell co-cultures.</a> Glia. 14, 145-152 (1995).</li><li>Plant, G. W., Bates, M. L., Bunge, M. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhibitory+proteoglycan+immunoreactivity+is+higher+at+the+caudal+than+the+rostral+Schwann+cell+graft-transected+spinal+cord+interface.">Inhibitory proteoglycan immunoreactivity is higher at the caudal than the rostral Schwann cell graft-transected spinal cord interface.</a> Mol Cell Neurosci. 17, 471-487 (2001).</li><li>Fishman, P. S., Nilaver, G., Kelly, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Astrogliosis+limits+the+integration+of+peripheral+nerve+grafts+into+the+spinal+cord.">Astrogliosis limits the integration of peripheral nerve grafts into the spinal cord.</a> Brain Res. 277, 175-180 (1983).</li><li>Fok-Seang, J., Mathews, G. A., ffrench-Constant, C., Trotter, J., Fawcett, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Migration+of+oligodendrocyte+precursors+on+astrocytes+and+meningeal+cells.">Migration of oligodendrocyte precursors on astrocytes and meningeal cells.</a> Dev Biol. 171, 1-15 (1995).</li><li>Wilby, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=N-Cadherin+inhibits+Schwann+cell+migration+on+astrocytes.">N-Cadherin inhibits Schwann cell migration on astrocytes.</a> Mol Cell Neurosci. 14, 66-84 (1999).</li><li>Grimpe, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+proteoglycans+in+Schwann+cell/astrocyte+interactions+and+in+regeneration+failure+at+PNS/CNS+interfaces.">The role of proteoglycans in Schwann cell/astrocyte interactions and in regeneration failure at PNS/CNS interfaces.</a> Mol Cell Neurosci. 28, 18-29 (2005).</li><li>Afshari, F. T., Kwok, J. C., White, L., Fawcett, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Schwann+cell+migration+is+integrin-dependent+and+inhibited+by+astrocyte-produced.">Schwann cell migration is integrin-dependent and inhibited by astrocyte-produced.</a> Glia. , (2010).</li><li>Santos-Silva, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=FGF/heparin+differentially+regulates+Schwann+cell+and+olfactory+ensheathing+cell+interactions+with+astrocytes:+a+role+in+astrocytosis.">FGF/heparin differentially regulates Schwann cell and olfactory ensheathing cell interactions with astrocytes: a role in astrocytosis.</a> J Neurosci. 27, 7154-7167 (2007).</li><li>Afshari, F. T., Kwok, J. C., Fawcett, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Astrocyte-produced+ephrins+inhibit+schwann+cell+migration+via+VAV2+signaling.">Astrocyte-produced ephrins inhibit schwann cell migration via VAV2 signaling.</a> J Neurosci. 30, 4246-4255 (2007).</li></ol>

Die oben beschriebenen Assays wurden in verschiedenen Studien, die die Rolle der verschiedenen Faktoren in Grenzen Bildung zwischen den Schwann-Astrozyten und begrenzt Schwann Zell-Migration in Astrozyten Umfeld eingebunden worden. Das Verständnis der Mechanismen, die diese Ereignisse ist wichtig, da es erlauben würde, die Entwicklung von Strategien zur Optimierung und Verbesserung der Integration von Schwann-Zellen Transplantate nach der Transplantation und damit erleichtern Sie die Ausfa...

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		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>DMEM</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>41966-029</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>HBSS</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>14170-088</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>FCS</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>10091-148</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>PSF</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>15240-062</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>BPE</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>13028-014</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Forskolin</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Calbiochem</td>
<td>344273</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Coverlips</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR-International</td>
<td>631-0149</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Coverlips(rectangle)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>MENZEL-GLASER (Supplied by Thermo Scientifics)</td>
<td>BB022050A1</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Chamber slides</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Nunc-LabTek </td>
<td>177380</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>4 well plates, 6 well plates</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Nunc</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>4 well plates 
6 well plates</td>
</tr>
<tr>
<td>rat p75 antibody</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Millipore, Temecula,California</td>
<td>MAB365</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>GFAP antibody</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Dako</td>
<td>Z0334</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Secondary antibodies (Alexa-conjugated)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>A-11004 A-11034</td>
<td>Goat anti mouse 568 
Goat anti Rabbit 488</td>
</tr>
<tr>
<td>Secondary biotinylated </td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Vector</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Goat anti mouse</td>
</tr>
<tr>
<td>DAB tablets </td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma-aldrich</td>
<td>D4418</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>ABC elite kit</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Vector</td>
<td>PK-6100</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Fine Forceps </td>
<td>&nbsp;</td>
<td>FST</td>
<td>11295-10</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Paraformaldehyde</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma-Aldrich</td>
<td>P6168</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Fluorosave</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Calbiochem</td>
<td>345789</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

analysis of schwann-astrocyte interactions using in vitro assays

Schwann-Zellen sind eine der häufigsten verwendete in Reparatur befindlichen Zellen Strategien nach Rückenmarksverletzungen. Schwann-Zellen sind in der Lage zu unterstützen axonale Regeneration und Sprossung durch Sekretion Wachstumsfaktoren 1,2 und Bereitstellung von wachstumsfördernden Adhäsionsmoleküle 3 und extrazelluläre Matrix Moleküle 4. Außerdem sind sie myelinisieren der demyelinisierte Axone an der Stelle der Verletzung 5. Doch nach der Transplantation, tun Schwann-Zellen nicht von der Stelle des Implantats zu migrieren und nicht mit dem Host-Astrozyten 6,7 vermischen. Dies führt zur Bildung einer scharfen Grenze zwischen Schwann-Zellen und Astrozyten, wodurch ein Hindernis für den Anbau von Axonen versucht, das Transplantat wieder in das Wirtsgewebe proximal und distal zu verlassen. Astrozyten in Kontakt mit Schwann-Zellen auch zu unterziehen Hypertrophie und Up-Regulierung der hemmenden Moleküle 8-13. In vitro-Untersuchungen haben zu modellieren Schwann-Zell-Interaktionen Astrozyten verwendet worden und wurden in das Verständnis des Mechanismus der zellulären Verhaltens wichtig. Diese in-vitro-Assays gehören Grenze Assay, wo eine Co-Kultur unter Verwendung von zwei verschiedenen Zellen, die mit jedem Zelltyp zu besetzen verschiedene Gebiete mit nur ein kleiner Spalt zwischen den beiden Fronten Zelle ist. Da die Zellen teilen sich und wandern, bekommen die beiden zellulären Fronten einander näher und schließlich kollidieren. Dies ermöglicht dem Verhalten der beiden Zellpopulationen an der Grenze analysiert werden. Eine weitere Variante der gleichen Technik ist es, die beiden Zellpopulationen in der Kultur-Mix und im Laufe der Zeit die beiden Zelltypen mit Schwann-Zellen zu trennen verklumpten als Inseln zwischen Astrozyten zusammen Erstellen mehrerer Schwann-Astrozyten Grenzen. Der zweite Test in der Untersuchung der Interaktion von zwei Zelltypen ist die Migration-Assay, wo zelluläre Bewegung auf der Oberfläche der anderen Zelltyp Monoschicht 14,15 verfolgt werden können. Dieser Test wird im Allgemeinen als umgekehrt Deckglas Test bekannt. Schwann-Zellen werden auf kleine Glassplitter kultiviert und sie sind Gesicht invertiert hinunter auf die Oberfläche der Astrozyten Monoschichten und Migration ist von der Kante des Deckglases beurteilt. Beide Tests wurden bei der Untersuchung der zugrunde liegenden Mechanismen der zellulären Ausgrenzung und Grenzen Bildung beteiligt instrumental. Einige der identifizierten Moleküle mit diesen Techniken gehören N-Cadherine 15, Chondroitinsulfat Proteoglykane (CSPGs) 16,17, FGF / Heparin 18, Eph / Ephrine 19. Dieser Artikel will Grenze Assay und Migration-Assay in schrittweise beschreiben und erläutern die möglichen technischen Probleme, die auftreten könnten.

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Analysis of Schwann-astrocyte Interactions Using In Vitro Assays

Dieser Artikel will in schrittweise beschreiben die gebräuchlichsten<em&gt; In-vitro-</em&gt; Tests in Studium Schwann-Zell-Interaktionen asrtocyte verwendet.

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