Name: feeder-free adaptation, culture and passaging of human ips cells using complete knockout serum replacement feeder-free medium
Uploaded: 2010-07-15T17:00:00
Duration: 8 min 29 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Feeder-Free Adaptation, Culture and Passaging of Human IPS Cells using Complete KnockOut Serum Replacement Feeder-Free Medium at JoVE.com

ملاحظة : للحفاظ على ثقافة ظروف معقمة ، وتتم كافة الإجراءات في هذا البروتوكول على استخدام الممارسات المختبرية التي أجريت معقمة وتحت غطاء تدفق الصفحي. قبل البدء ، تأكد من أن أية وسيلة إعلامية غير المتوازنة إلى 37 درجة مئوية ، وبالغاز بشكل مناسب. إعداد أطباق الثقافة Geltrex المغلفة ملاحظة : انظر الملحق لاستخدام الأطباق CELLstart الثقافة المغلفة <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ذوبان الجليد أنبوب واحد من Geltrex (1 مل) ببطء في 2-8 درجة مئوية ، وتمييع 1:100 في 99 مل من خروج المغلوب D-MEM/F-12. مزيج الحل بلطف. ملاحظة : بعض خطوط الخلايا المحفزة قد يتطلب التخفيف Geltrex مختلفة لتحقيق النمو الأمثل. انظر التذييل لالتخفيفات البديلة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تغطي السطح كله من كل صحن الثقافة مع الحل Geltrex (1 مل عن طبق 35 ملم ، 1.5 مل عن طبق من عيار 60 ملم). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ختم كل طبق مع Parafilm لمنع جفاف واحتضان الأطباق لمدة 1 ساعة عند 37 درجة مئوية. ملاحظة : عند هذه النقطة قد تكون لتخزين الأطباق الثقافة Geltrex المغلفة في 4 درجة مئوية لمدة تصل إلى 1 في الشهر. ختم كل طبق مع Parafilm لمنع Geltrex من الجفاف. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قبل استخدام ونقل الأطباق Geltrex المغلفة إلى غطاء تدفق الصفحي ، والسماح لهم لكي تتوازن إلى درجة حرارة الغرفة (حوالي 1 ساعة). </li></ol> إعداد وحدة تغذية متكاملة خالية من ريال خروج المغلوب متوسطة <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لإعداد 1 مل من 10 ميكروغرام / مل حل جمعية جيل المستقبل الأساسية ، مزيج جو معقم و مطهر المكونات المذكورة أدناه. قسامة الحل وتخزينها في -20 درجة مئوية لمدة تصل إلى 6 أشهر. <table border="0" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> جمعية جيل المستقبل الأساسية </td><td> 10 ميكروغرام </td></tr><tr><td> D - PBS </td><td> 990 ميكرولتر </td></tr><tr><td> جيش صرب البوسنة 10 ٪ </td><td> 10 ميكرولتر </td></tr></tbody></table> ملاحظة : يمكن أن تكون بديلا BSA HSA مع ريال أو خروج المغلوب في نفس التركيز. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> للتحضير 50 ​​مل من 2 الحل Dispase ملغ / مل ، مزيج جو معقم و مطهر المكونات المذكورة أدناه. فلتر تعقيم وتخزين الحل في 4 درجات مئوية لتصل الى 2 أسابيع. <table border="0" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> Dispase </td><td> 100 ملغ </td></tr><tr><td> D - PBS </td><td> 50 مل </td></tr></tbody></table></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لتحضير 100 مل ريال خروج المغلوب كاملة خالية من الطاعم (KSR - FF) الجمع بين المتوسطة جو معقم و مطهر العناصر المدرجة في الجدول أدناه. <table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> مكون </td><td> الأسهم تركيز </td><td> التركيز النهائي </td><td> حجم </td></tr><tr><td> خروج المغلوب DMEM/F12 (الفئة رقم 12660-012) </td><td> -- </td><td> 1X </td><td> 76.8 مل </td></tr><tr><td> GlutaMAX - I (الفئة رقم 35050-061) </td><td> 200 ملي </td><td> 2 ملم </td><td> 1 مل </td></tr><tr><td> خروج المغلوب ريال (لا Cat.. 10828-028) </td><td> -- </td><td> 20 ٪ </td><td> 20 مل </td></tr><tr><td> خروج المغلوب SR - GFC (الفئة رقم A10580 - 01) </td><td> 50X </td><td> 1X </td><td> 2 مل </td></tr><tr><td> bFGF (الفئة رقم PHG0024) </td><td> 10 ميكروغرام / مل </td><td> 20 نانوغرام / مل </td><td> 200 ميكرولتر </td></tr></tbody></table> قد قمت بتخزين المتوسطة KSR - FF في درجة مئوية لمدة تصل إلى 2-8 أسبوع واحد. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قبل لحظات ما قبل equilibrating المتوسط ​​كاملة لدرجة الحرارة والغازات ، إضافة جو معقم و مطهر حجم المطلوب من 2 المركابتويثانول (55 ملي تركيز الأسهم) لتركيز نهائي 0.1 ملم. على سبيل المثال ، لتحضير 100 مل من KSR - FF المتوسطة إضافة ميكرولتر 182 من 55 مم 2 المركابتويثانول (1:550 تمييع) بدلا من ذلك ، قد تضاف 2 المركابتويثانول لإكمال المتوسطة 1X وتخزينها في درجة مئوية ل08/02 تصل إلى أسبوع واحد. </li></ol> تكييف iPSCs إلى KSR - FF متوسطة <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قبل البدء ، قبل يوازن الخاص أطباق Geltrex المغلفة لدرجة حرارة الغرفة في غطاء محرك السيارة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ثقافة iPSCs على الخلايا المغذية MEF حتى أنهم متموجة 70-80 ٪. يرجى الرجوع إلى دليل ماوس GIBCO الليفية الجنينية لبروتوكولات الثقافة MEF مقرا لها. </لى&gt; <li style=";text-align:right;direction:rtl"> قبل الدافئة حجم المطلوب من Dispase في حمام ماء C ° 37. الرجوع الى الجدول 1 أدناه للاطلاع على تفاصيل وحدات التخزين المطلوبة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قبل يوازن حجم المطلوب من KSR - FF في 37 دقيقة for15 ° C حمام الماء. الرجوع الى الجدول 1 أدناه للاطلاع على تفاصيل وحدات التخزين المطلوبة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نضح المتوسط ​​من أطباق والثقافة ، وإضافة مبلغ مناسب من حل Dispase. احتضان الأطباق على 37 درجة مئوية لمدة 3-5 دقائق. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نضح الحل Dispase من كل سفينة الثقافة ويغسل الخلايا المغذية MEF بلطف مع مد برنامج تلفزيوني (2 إلى 3 مرات). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة مبلغ مناسب من اكتمال خروج المغلوب المتوسطة ريال لكل سفينة الثقافة. استخدام مكشطة خلية أو ماصة 5 مل لكشط بلطف خلايا قبالة سطح السفينة الثقافة. ملاحظة : انظر الملحق لبروتوكولات بديلة للتكيف الثابت خطوط الخلايا المحفزة للتكيف ، </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> جمع تعليق خلية من كل صحن الثقافة في أنابيب مخروطية 15 مل منفصلة. شطف كل سفينة الثقافة مع مبلغ مناسب من اكتمال خروج المغلوب المتوسطة ريال ، وإضافة D - PBS شطف المتوسطة في أنابيب مخروطية 15 مل تحتوي على التعليق الخلية. الحرص على عدم كسر كتل الخلايا في الخلايا وحيدة </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> أجهزة الطرد المركزي ال 15 مل في أنابيب مخروطية 200 x ج لمدة 5 دقائق لiPSCs الكرية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ونضح من طاف بيليه iPSC. Resuspend الكرية في مبلغ مناسب من KSR - FF المتوسطة وفقا لنسبة الانقسام (الجدول 1). لا كسر كتل الخلية إلى حجم أصغر ، وذلك لأن أصغر كتل لا نعلق البئر إلى السطح. ملاحظة : نوصي نسبة 01:02 لتقسيم المقاطع 3 الأولى بعد أن تم passaged iPSCs مباشرة من الثقافة iPSC متوسطة MEF إلى KSR - FF المتوسط. عادة ، وهي نسبة تقسيم 1:03 حتي 1:05 من المناسب ، ولكن الركض في 01:02 يضمن أعلى كثافة الخلايا عند الحاجة إلى التكيف مع الثقافة المغذية خالية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قبل الطلاء وiPSCs على أطباق Geltrex المغلفة ، ونضح المتبقية Geltrex حل من الطبق قبل مغلف بالمطاط ، وإضافة ببطء مبلغ مناسب للتعليق على كل خلية طبق الثقافة. ملاحظة : لا شطف الأطباق قبل الطلاء. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تحريك الطبق الثقافة ذهابا وإيابا ، وجنبا إلى جنب عدة مرات لتفريق الخلايا عبر سطح الطبق. بلطف مكان الطبق الثقافة في حاضنة 37 درجة مئوية مع ترطيب جو من ثاني أكسيد الكربون ٪ 04 حتي 06 فبراير في الهواء. استبدال المتوسطة الذي يقضيه مع KSR - FF كل يوم. </li></ol> الركض الإنسان المحفزة باستخدام خلايا KSR - FF <ol start="13" style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مراقبة iPSCs البشرية المتزايدة في إكمال KSR - FF تحت المجهر للتأكد من أن الخلايا هي 70-80 ٪ متكدسة وجاهزة للsubcultured. الرجوع إلى الشكل 1. ملاحظة : إذا أصبحت مستعمرات كثيفة جدا أو كبيرة جدا ، وازدياد التمايز يحدث. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قطع وإزالة أية مستعمرات متباينة iPSC قبل الركض والثقافة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قبل الدافئة حجم المطلوب من Dispase في حمام ماء C ° 37. الرجوع الى الجدول 1 أدناه للاطلاع على تفاصيل وحدات التخزين المطلوبة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قبل يوازن حجم المطلوب من KSR - FF في 37 دقيقة for15 ° C حمام الماء. الرجوع الى الجدول 1 أدناه للاطلاع على تفاصيل وحدات التخزين المطلوبة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نضح المتوسط ​​أمضى من السفينة الثقافة باستخدام ماصة ، وشطف الخلايا مرتين مع مد برنامج تلفزيوني. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة بلطف قبل تحسنت Dispase حل للسفينة الثقافة (على سبيل المثال ، 1 مل من محلول Dispase في صحن الثقافة من عيار 60 ملم). دوامة السفينة الثقافة معطف سطح الخلية بأكملها. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> احتضان سفينة الثقافة على 37 درجة مئوية لمدة 3 دقائق. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة السفينة من الحاضنة ، نضح الحل Dispase ، ويغسل بلطف الخلايا مع مد برنامج تلفزيوني. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> كشط بلطف خلايا قبالة سطح الطبق الثقافة باستخدام مكشطة الخلية ، ونقل الخلايا إلى أنبوب الطرد المركزي 15mL العقيمة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> شطف الأطباق الثقافة مرتين مع KSR - FF ، بلطف &quot;رش قبالة&quot; أي الخلايا التي لم منفصلة. تجمع شطف المتوسطة مع الخلايا في الأنبوب 15mL. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> أنبوب الطرد المركزي في 200 x ج لمدة 5 دقائق في درجة حرارة الغرفة لخلايا بيليه. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نضح بعناية طاف دون الإخلال بيليه الخلية وتخلص منه. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نفض الغبار بلطف أنبوب لإخراج تماما بيليه الخلية من أسفل الأنبوب. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> resuspend بلطف الخلايا في مرحلة ما قبل معايرتها KSR - FF باستخدام ماصة 5mL المصلية. لا يسحن. ملاحظة : من المهم جدا في خطوة لresuspend بلطف الخلايا من دون استخدام القوة لتجنب الضرر. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نقل الخلايا إلى صحن Geltrex الطازجة المغلفة من عيار 60 ملم على نسبة الانقسام والتحرك المطلوب الطبق الثقافة ذهابا وإيابا ، وجنبا إلى جنب عدة مرات لتفريق الخلايا عبر سطحه. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مكان الطبق الثقافة في حاضنة 37 درجة مئوية مع ترطيب جو منثاني أكسيد الكربون 4-6 ٪ 2 في الهواء. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> في اليوم التالي ، استبدل بلطف المتوسطة الذي يقضيه مع KSR - FF لإزالة الحطام الخلية. استبدال المتوسطة ينفق يوميا بعد ذلك. مراقبة خلايا الجذع والمرور عليهم يوميا حسب الحاجة (تقريبا كل 4-5 أيام). ينصح الركض عندما تصل خلايا التقاء 70-80 ٪. عن الحفظ بالتبريد الخلية الجذع وذوبان الجليد ، لدينا تشير إلى بروتوكول بعنوان &quot;Cryopreserving واسترداد خلايا الجذع من استخدام الإنسان الكامل تغذية خالية من خروج المغلوب استبدال مصل المتوسطة&quot;. </li></ol> النتائج المتوقعة <img src="/files/ftp_upload/2236/2236fig1.jpg" alt="الشكل 1" /> الشكل 1. صورة النقيض من المرحلة أدناه iPSCs نمت على أطباق ثقافة Geltrex المغلفة به الطاعم كاملة خالية من خروج المغلوب استبدال المصل المتوسط. ويحمل iPSCs مماثلة لhESCs التشكل ، التي تتميز نواة كبيرة والسيتوبلازم شحيحة. (التكبير 40X) <table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> مكون </td><td> 35mm الطبق </td><td> 60mm الطبق </td><td> 100mm صحن </td></tr><tr valign="top"><td> استكمال خروج المغلوب ريال المتوسطة </td><td> 2 مل </td><td> 4 مل </td><td> 10 مل </td></tr><tr valign="top"><td> Geltrex الحل </td><td> 1 مل </td><td> 1.5 مل </td><td> 4-5 مليلتر </td></tr><tr valign="top"><td> Dispase </td><td> 0.5 مل </td><td> 1 مل </td><td> 3-4 مليلتر </td></tr><tr valign="top"><td> D - PBS للشطف </td><td> 2 مل </td><td> 4 مل </td><td> 10 مل </td></tr></tbody></table> الجدول 1. أوصت مجلدات <a href="http://www.jove.com/files/ftp_upload/2236/2236appendix.pdf">الرجاء انقر هنا للاطلاع على التذييل</a> .

<ol>
	<li>Takahashi, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+pluripotent+stem+cells+from+mouse+embryonic+and+adult+fibroblast+cultures+by+defined+factors.">Induction of pluripotent stem cells from mouse embryonic and adult fibroblast cultures by defined factors.</a> Cell. 126, 663-676 (2006).</li><li>Takahashi, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+pluripotent+stem+cells+from+adult+human+fibroblasts+by+defined+factors.">Induction of pluripotent stem cells from adult human fibroblasts by defined factors.</a> Cell. 131, 861-872 (2007).</li><li>Yu, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induced+pluripotent+stem+cell+lines+derived+from+human+somatic+cells.">Induced pluripotent stem cell lines derived from human somatic cells.</a> Science. 318, 1917-1920 (2007).</li><li>Maherali, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Guidelines+and+techniques+for+the+generation+of+induced+pluripotent+stem+cells.">Guidelines and techniques for the generation of induced pluripotent stem cells.</a> Cell Stem Cell. 3, 595-605 (2008).</li><li>Li, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+rat+and+human+induced+pluripotent+stem+cells+by+combining+genetic+reprogramming+and+chemical+inhibitors.">Generation of rat and human induced pluripotent stem cells by combining genetic reprogramming and chemical inhibitors.</a> Cell Stem Cell. 4, 16-19 (2009).</li><li>Liao, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+induced+pluripotent+stem+cell+lines+from+adult+rat+cells.">Generation of induced pluripotent stem cell lines from adult rat cells.</a> Cell Stem Cell. 4, 11-15 (2009).</li><li>Dimos, J. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induced+pluripotent+stem+cells+generated+from+patients+with+ALS+can+be+differentiated+into+motor+neurons.">Induced pluripotent stem cells generated from patients with ALS can be differentiated into motor neurons.</a> Science. 321, 1218-1221 (2008).</li><li>Aasen, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Efficient+and+rapid+generation+of+induced+pluripotent+stem+cells+from+human+keratinocytes.">Efficient and rapid generation of induced pluripotent stem cells from human keratinocytes.</a> Nat Biotechnli. 26, 1276-1284 (2008).</li><li>Park, I. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+human-induced+pluripotent+stem+cells.">Generation of human-induced pluripotent stem cells.</a> Nat Protoc. 3, 1180-1186 (2008).</li></ol>

ويعمل واضعو هذه المادة التي تنتج تقنيات الحياة الكواشف والأدوات المستخدمة في هذه المقالة.

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Knockout DMEM/F12</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Cat. no. 12660-012</td>
<td>Note: see appendix for the use of alternative DMEM products</td>
</tr>
<tr>
<td>GlutaMAX-I</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Cat. No. 35050-061</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>KnockOut Serum Replacement</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>KnockOut SR, Cat. no. 10828-028</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>KnockOut Serum Replacement Growth Factor Cocktail</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>KnockOut SR-GFC, Cat. no. A10580-01</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>FGF-basic, human recombinant protein, 10 &mu;g</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>bFGF, Cat. no. PHG0024</td>
<td>Note: see appendix for alternative bFGF pack sizes.</td>
</tr>
<tr>
<td>2-Mercaptoethanol</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Cat. no. 21985-023</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Dispase</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Cat. no. 17105-041</td>
<td>Note: see appendix for alternative passaging methods.</td>
</tr>
<tr>
<td>Geltrex hESC-Qualified Reduced Growth Factor Basement Matrix, 1 mL</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Cat. no. A10480-01</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Dulbecco&#x2019;s Phosphate Buffered Saline (D-PBS) without calcium and magnesium </td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Cat. no. 14190-144</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Sterile Tissue Culture Hood</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Incubator set at 37&deg;C</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Pipette-Aid</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Water Bath set at 37&deg;C</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Sterile serological pipettes (5 mL, 10 mL)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Centrifuge</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>15 mL centrifuge tubes</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>60mm Tissue Culture treated dishes</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

feeder-free adaptation, culture and passaging of human ips cells using complete knockout serum replacement feeder-free medium

وقد خلق هذا الاكتشاف في 2006 بأن من الممكن إعادة برمجة الخلايا الليفية الإنسان والفأر على توليد خلايا الجذع 1-3 بصفات متشابهة بشكل ملحوظ على الخلايا الجذعية الجنينية مصدرا قيما جديدة من الخلايا المحفزة لاكتشاف المخدرات ، والعلاج الخلوي ، والبحوث الأساسية. وقد GIBCO سائل الإعلام والكواشف في طليعة أبحاث الخلايا الجذعية المحفزة لسنوات. خروج المغلوب DMEM تستكمل مع تبديل خروج المغلوب المصل هو وسائل الإعلام المفضلة لنمو الخلايا الجذعية الجنينية والثقافة الآن خلية الجذع 3-9. ويمكن الآن هذا الذهب معيار نظام وسائل الاعلام أن تستخدم لتغذية ثقافة حرة مع إضافة ريال خروج المغلوب عامل النمو كوكتيل. ES الإنسان التقليدية وأساليب زراعة الخلايا المحفزة تتطلب استخدام الفأرة أو تغذية طبقات الخلايا الليفية الإنسان ، أو تغذية مكيفة المتوسط. هذه الأساليب هي ثقافة كثيفة العمالة ، من الصعب على نطاق وأنه من الصعب الحفاظ على الوركين خلايا غير متمايزة نظرا للظروف غير معروف. وقد وضعت Invitrogen خروج المغلوب عامل نمو كوكتيل ريال ليسمح لك بسهولة الانتقال الثقافات صومعتك الوركين لتغذية الحرة مع الحفاظ على استخدامك للريال خروج المغلوب.

Watch this Scientific Journal Video about Feeder-Free Adaptation, Culture and Passaging of Human IPS Cells using Complete KnockOut Serum Replacement Feeder-Free Medium at JoVE.com

Feeder-Free Adaptation, Culture and Passaging of Human IPS Cells using Complete KnockOut Serum Replacement Feeder-Free Medium

بروتوكول التالية توفر التعليم للتكيف الإنسان الجذعية المحفزة التي يسببها (آي بي إس) إلى الخلايا المغذية الثقافة الحرة باستخدام وحدة تغذية كاملة خالية من خروج المغلوب استبدال مصل المتوسطة (KSR - FF). تكييفها مرة واحدة ، كما يتم توفير إرشادات لصيانة مستمرة.

التغذية الخالية من التكيف والثقافة والركض للخلايا البشرية باستخدام IPS الطاعم كاملة خالية من خروج المغلوب استبدال المصل متوسطة

The discovery in 2006 that human and mouse fibroblasts could be reprogrammed to generate iPS cells 1-3 with qualities remarkably similar to embryonic stem ...

Research

JoVE Journal

Biology

Passaging HuES Human Embryonic Stem Cell-lines with Trypsin.

الأشكال الركض الجذعية الجنينية البشرية خلية خطوط مع التربسين

In this video we demonstrate how our lab routinely passages HuES human embryonic stem cell lines with trypsin.  Human embryonic stem cells are artifacts ...

Human ES cells: Starting Culture from Frozen Cells

ES خلايا الإنسان : ثقافة ابتداء من خلايا مجمدة

Here we demonstrate how our lab begins a HuES human embryonic stem cell line culture from a frozen stock.  First, a one to two day old ten cm plate of  ...

Predicting the Effectiveness of Population Replacement Strategy Using Mathematical Modeling

توقع فعالية استراتيجية استبدال السكان الذين يستخدمون النمذجة الرياضية

Charles Taylor and John Marshall explain the utility of mathematical modeling for evaluating the effectiveness of population replacement strategy.  ...

Passaging Human Neural Stem Cells

الركض الخلايا الجذعية العصبية البشرية

The ability to manipulate human neural stem/precursor cells (hNSPCs) in vitro provides a means to investigate their utility as cell transplants for ...

Culture and Maintenance of Human Embryonic Stem Cells  

الثقافة والمحافظة على الخلايا الجذعية الجنينية البشرية

Human embryonic stem (hES) cells must be monitored and cared for in order to maintain healthy, undifferentiated cultures. At minimum, the cultures must be ...

Cryopreserving and Recovering of Human iPS Cells using Complete KnockOut Serum Replacement Feeder-Free Medium

Cryopreserving واسترداد خلايا الجذع من الإنسان الكامل باستخدام الضربة القاضية المصل الطاعم خالية استبدال متوسطة

Generation of Human Cardiomyocytes: A Differentiation Protocol from Feeder-free Human Induced Pluripotent Stem Cells

جيل من العضلية الإنسان: البروتوكول التمايز من خالية من الطاعم المستحثة الخلايا الجذعية المحفزة الإنسان

In order to investigate the events driving heart development and to determine the molecular mechanisms leading to myocardial diseases in humans, it is ...

Isolation of Small Noncoding RNAs from Human Serum

عزل الرنا غير المكودة الصغيرة من مصل الإنسان

The analysis of RNA and its expression is a common feature in many laboratories. Of significance is the emergence of small RNAs like microRNAs, which are ...

MicroRNA Expression Profiles of Human iPS Cells, Retinal Pigment Epithelium Derived From iPS, and Fetal Retinal Pigment Epithelium

ملامح التعبير microRNA من خلايا الجذع الإنسان، الشبكية المشتقة من الظهارة الصبغية المحفزة، والجنين الظهارة الصبغية الشبكية

The objective of this report is to describe the protocols for comparing the microRNA (miRNA) profiles of human induced-pluripotent stem (iPS) cells, ...

Preparation of Rat Serum Suitable for Mammalian Whole Embryo Culture

إعداد الجرذ مصل مناسب للالثدييات الجامع الثقافة الأجنة

Mammalian whole embryo culture (WEC) is a widely used technique for examining pharmacological toxicity in developing mouse and rat embryos and for ...