Name: feeder-free adaptation, culture and passaging of human ips cells using complete knockout serum replacement feeder-free medium
Uploaded: 2010-07-15T17:00:00
Duration: 8 min 29 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Feeder-Free Adaptation, Culture and Passaging of Human IPS Cells using Complete KnockOut Serum Replacement Feeder-Free Medium at JoVE.com

Opmerking: Om steriele cultuur voorwaarden te handhaven, zijn alle procedures in dit protocol uitgevoerd met steriele laboratorium-praktijken en uitgevoerd onder een laminaire stroming kap. Voorafgaand aan de start, zorg ervoor dat elk medium is evenwicht gebracht tot 37 ° C en adequaat vergast. Voorbereiden Geltrex-coated Cultuur Gerechten Let op: zie bijlage voor het gebruik van gecoate CELLstart kweekschalen <ol><li> Dooi een tube van Geltrex (1 ml) langzaam bij 2-8 ° C en verdund 1:100 in 99 ml Knockout D-MEM/F-12. Meng de oplossing. Opmerking: Sommige iPS cellijnen kan een andere Geltrex verwatering voor een optimale groei nodig hebben. Zie bijlage voor alternatieve verdunningen. </li><li> Het gehele oppervlak van elke cultuur schotel met de Geltrex oplossing (1 ml voor een 35-mm schaal, 1,5 ml voor een 60-mm schotel). </li><li> Seal ieder gerecht met Parafilm om het drogen te voorkomen en incubeer de gerechten gedurende 1 uur bij 37 ° C. NB: Op dit punt kunt u de Geltrex gecoate cultuur gerechten bewaren bij 4 ° C gedurende maximaal 1 maand. Seal ieder gerecht met Parafilm om de Geltrex niet uitdrogen. </li><li> Voorafgaand aan het gebruiken, de overdracht van de Geltrex-gecoate gerechten tot een laminaire stroming kap en laat ze op kamertemperatuur (ongeveer 1 uur). </li></ol> Voorbereiden Compleet KnockOut SR Feeder-vrij medium <ol><li> Voor te bereiden 1 ml van 10 ug / ml Basic FGF-oplossing aseptisch meng de hieronder genoemde componenten. Aliquot de oplossing en bewaar bij -20 ° C gedurende maximaal 6 maanden. <table border="0"><tbody><tr><td> Basic FGF </td><td> 10 pg </td></tr><tr><td> D-PBS </td><td> 990 uL </td></tr><tr><td> 10% BSA </td><td> 10 pi </td></tr></tbody></table> Opmerking: BSA kan worden vervangen door HSA of Knockout SR bij dezelfde concentratie. </li><li> Ter voorbereiding op 50 ml van 2 mg / ml Dispase oplossing aseptisch meng de hieronder genoemde componenten. Filter steriliseren de oplossing en bewaar bij 4 ° C gedurende maximaal 2 weken. <table border="0"><tbody><tr><td> Dispase </td><td> 100 mg </td></tr><tr><td> D-PBS </td><td> 50 ml </td></tr></tbody></table></li><li> Aan 100 ml van complete KnockOut SR Feeder-Free (KSR-FF) medium aseptisch combineren van de componenten die in de tabel hieronder voor te bereiden. <table border="1"><tbody><tr><td> Bestanddeel </td><td> Concentratie voorraad </td><td> Uiteindelijke concentratie </td><td> Volume </td></tr><tr><td> Knockout DMEM/F12 (Cat. Nr. +12.660-012) </td><td> - </td><td> 1X </td><td> 76,8 mL </td></tr><tr><td> Glutamax-I (Cat. nr. 35050-061) </td><td> 200 mM </td><td> 2 mM </td><td> 1 mL </td></tr><tr><td> SR KnockOut (Cat. Nr. 10,828-028) </td><td> - </td><td> 20% </td><td> 20 ml </td></tr><tr><td> KnockOut SR-GFC (Cat. Nr. A10580-01) </td><td> 50X </td><td> 1X </td><td> 2 mL </td></tr><tr><td> bFGF (Cat. Nr. PHG0024) </td><td> 10 ug / mL </td><td> 20 ng / mL </td><td> 200 pi </td></tr></tbody></table> U mag de KSR-FF medium bij 2-8 ° C gedurende maximaal een week. </li><li> Vlak voor de complete medium pre-equilibreren de temperatuur en gassen, aseptische wijze de vereiste hoeveelheid 2 mercaptoethanol (55 mM voorraad concentratie) voor een 0,1 mM eindconcentratie. Bijvoorbeeld, om 100 ml KSR-FF medium voor te bereiden 182 pi van 55 mM 2-mercapto-ethanol (1:550 verdunning) alternatief toe te voegen, kan de 2-mercapto-ethanol worden toegevoegd aan het 1X voltooide medium en bewaard bij 2-8 ° C voor tot een week. </li></ol> Aanpassing iPSCs naar KSR-FF Medium <ol><li> Voorafgaand aan de start, pre-evenwicht je Geltrex gecoat gerechten op kamertemperatuur in de motorkap. </li><li> Cultuur van de iPSCs op MEF feeder-cellen tot ze 70-80% confluent. Raadpleeg de GIBCO muis embryonale Fibroblast handboek voor MEF-gebaseerde cultuur protocollen. </li&gt; <li> Pre-warm van het vereiste volume Dispase in een 37 ° C waterbad. Zie tabel 1 hieronder voor meer informatie over de vereiste volumes. </li><li> Pre-evenwicht van het vereiste volume KSR-FF in een 37 ° C waterbad for15 min. Zie tabel 1 hieronder voor meer informatie over de vereiste volumes. </li><li> Zuig het medium van de cultuur gerechten, en voeg een juiste hoeveelheid Dispase oplossing. Incubeer de gerechten bij 37 ° C gedurende 3-5 minuten. </li><li> Zuig het Dispase oplossing van elke cultuur schip en afwassen van de MEF feeder cellen voorzichtig met D-PBS (2 tot 3 keer). </li><li> Voeg een passend bedrag van complete KnockOut SR medium om elke cultuur schip. Gebruik een cel krabber of een 5 mL pipet om voorzichtig de cellen schrapen van het oppervlak van de cultuur schip. Let op: zie bijlage voor alternatieve aanpassing protocollen voor moeilijk te iPS passen cellijnen, </li><li> Verzamel de celsuspensie van elke cultuur schotel in aparte 15 ml conische buizen. Spoel elke cultuur schip met een geschikte hoeveelheid van complete KnockOut SR medium, en voeg de D-PBS spoelen medium in de 15 ml conische buizen met daarin de celsuspensie. Wees voorzichtig niet naar de cel klonten te breken in enkele cellen </li><li> Centrifugeer de 15 ml conische buizen op 200 xg gedurende 5 minuten om de pellet iPSCs. </li><li> Zuig het supernatans van de IPSC pellet. Resuspendeer de pellet in een geschikte hoeveelheid van de KSR-FF medium volgens de split ratio (tabel 1). Breken niet de cel klompen naar een kleiner formaat, omdat de kleinere klonters niet goed hechten aan het oppervlak. Opmerking: We raden een splitsing van 1:2 voor de eerste 3 passages na de iPSCs zijn direct passage uit de IPSC MEF Cultuur Middelgrote tot KSR-FF medium. Normaal gesproken, een splitsingsverhouding 1u03-01u05 geschikt is, maar passage op 01:02 zorgt ervoor dat de hogere dichtheid van de cellen die nodig zijn bij de aanpassing in een feeder-vrije cultuur. </li><li> Voorafgaand aan de beplating van de iPSCs op Geltrex gecoat gerechten, zuigen resterende Geltrex oplossing uit de pre-gecoate schaal, en langzaam een ​​gepaste hoeveelheid celsuspensie toe te voegen aan elke cultuur gerecht. Let op: niet voor spoelen gerechten plating. </li><li> Verplaats de cultuur schotel heen en weer en links naar rechts een paar keer naar de cellen over het oppervlak van de schotel te verspreiden. Plaats voorzichtig de cultuur schotel in een 37 ° C incubator met een vochtige atmosfeer van 4 tot 6% CO 2 in de lucht. Vervang de gebruikte medium met KSR-FF elke dag. </li></ol> Passage menselijke iPS cellen met behulp van KSR-FF <ol start="13"><li> Let op de menselijke iPSCs groeien in volledige KSR-FF onder de microscoop te bevestigen dat de cellen 70-80% confluent en klaar om te worden subcultuur. Zie figuur 1. Opmerking: Als kolonies worden te dicht of te groot is, meer differentiatie optreedt. </li><li> Knip en voorafgaande verwijder gedifferentieerde IPSC kolonies op passage van de cultuur. </li><li> Pre-warm van het vereiste volume Dispase in een 37 ° C waterbad. Zie tabel 1 hieronder voor meer informatie over de vereiste volumes. </li><li> Pre-evenwicht van het vereiste volume KSR-FF in een 37 ° C waterbad for15 min. Zie tabel 1 hieronder voor meer informatie over de vereiste volumes. </li><li> Zuig het bestede medium van de cultuur schip met behulp van een pipet, en tweemaal spoelen van de cellen met D-PBS. </li><li> Voorzichtig toe te voegen voorverwarmde Dispase oplossing voor de cultuur vat (bijv. 1 ml Dispase oplossing per 60-mm cultuur schotel). Swirl de cultuur schip voor het coaten van de hele cel oppervlak. </li><li> Incubeer de cultuur vat bij 37 ° C gedurende 3 minuten. </li><li> Verwijder het schip uit de incubator, zuigen de Dispase oplossing, en voorzichtig wassen van de cellen met D-PBS. </li><li> Zachtjes schrapen van de cellen van het oppervlak van de cultuur schotel met behulp van een cel schraper, en breng de cellen om een ​​steriele 15 ml centrifugebuis. </li><li> Twee keer Spoel de cultuur schotel met KSR-FF, zacht &quot;spuiten uit&quot; alle cellen die niet los. Het zwembad van het spoelen medium met de cellen in de 15 ml buis. </li><li> Centrifugeer de buis op 200 xg gedurende 5 minuten bij kamertemperatuur om pellet de cellen. </li><li> Voorzichtig het supernatans aspireren zonder de celpellet en gooi hem weg. </li><li> Tik zachtjes tegen de buis om volledig de cel pellet verjagen uit de tube bodem. </li><li> Voorzichtig resuspendeer de cellen in de pre-evenwicht gebracht KSR-FF met behulp van een serologische pipet 5 ml. Niet vermaal. Let op: het is van cruciaal belang bij de stap om voorzichtig de cellen resuspenderen zonder geweld te gebruiken om schade te voorkomen. </li><li> Overdracht van de cellen om een ​​frisse 60-mm Geltrex-gecoate schaal op de gewenste split ratio en beweeg de cultuur schotel heen en weer en links naar rechts een paar keer naar de cellen over het oppervlak verspreiden. </li><li> Zet de schotel in een cultuur van 37 ° C incubator met een vochtige atmosfeer van4 tot 6% CO 2 in de lucht. </li><li> De volgende dag, zachtjes vervangt de gebruikte medium met KSR-FF naar cel vuil te verwijderen. Daarna vervangen door de gebruikte medium alledaagse. Let op de iPS cellen dagelijks en passage als dat nodig is (ongeveer om de 4-5 dagen). Passage wordt aanbevolen wanneer de cellen 70-80% confluentie bereiken. Voor iPS cellen cryopreservatie en ontdooien, zie ons protocol met de titel &quot;Cryopreserving en herstellen van de Mens iPS cellen met behulp van complete KnockOut Serum Vervangende Feeder-vrij medium&quot;. </li></ol> Verwachte resultaten <img src="/files/ftp_upload/2236/2236fig1.jpg" alt="Figuur 1" /> Figuur 1. De fase contrast afbeelding hieronder toont iPSCs geteeld op Geltrex gecoate cultuur gerechten met complete KnockOut Serum Vervangende Feeder-vrij medium. De iPSCs vertonen morfologie lijken op hESC &#39;s, die wordt gekenmerkt door grote kernen en weinig cytoplasma. (40x vergroting) <table border="1"><tbody><tr><td> Bestanddeel </td><td> 35mm Dish </td><td> 60mm Dish </td><td> 100mm Dish </td></tr><tr valign="top"><td> Compleet KnockOut SR medium </td><td> 2 mL </td><td> 4 mL </td><td> 10 ml </td></tr><tr valign="top"><td> Geltrex Solution </td><td> 1 mL </td><td> 1,5 ml </td><td> 4-5 ml </td></tr><tr valign="top"><td> Dispase </td><td> 0,5 ml </td><td> 1 mL </td><td> 3-4 ml </td></tr><tr valign="top"><td> D-PBS voor het spoelen </td><td> 2 mL </td><td> 4 mL </td><td> 10 ml </td></tr></tbody></table> Tabel 1. Aanbevolen Volumes <a href="http://www.jove.com/files/ftp_upload/2236/2236appendix.pdf">Klik hier om de bijlage te zien</a> .

<ol>
	<li>Takahashi, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+pluripotent+stem+cells+from+mouse+embryonic+and+adult+fibroblast+cultures+by+defined+factors.">Induction of pluripotent stem cells from mouse embryonic and adult fibroblast cultures by defined factors.</a> Cell. 126, 663-676 (2006).</li><li>Takahashi, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+pluripotent+stem+cells+from+adult+human+fibroblasts+by+defined+factors.">Induction of pluripotent stem cells from adult human fibroblasts by defined factors.</a> Cell. 131, 861-872 (2007).</li><li>Yu, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induced+pluripotent+stem+cell+lines+derived+from+human+somatic+cells.">Induced pluripotent stem cell lines derived from human somatic cells.</a> Science. 318, 1917-1920 (2007).</li><li>Maherali, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Guidelines+and+techniques+for+the+generation+of+induced+pluripotent+stem+cells.">Guidelines and techniques for the generation of induced pluripotent stem cells.</a> Cell Stem Cell. 3, 595-605 (2008).</li><li>Li, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+rat+and+human+induced+pluripotent+stem+cells+by+combining+genetic+reprogramming+and+chemical+inhibitors.">Generation of rat and human induced pluripotent stem cells by combining genetic reprogramming and chemical inhibitors.</a> Cell Stem Cell. 4, 16-19 (2009).</li><li>Liao, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+induced+pluripotent+stem+cell+lines+from+adult+rat+cells.">Generation of induced pluripotent stem cell lines from adult rat cells.</a> Cell Stem Cell. 4, 11-15 (2009).</li><li>Dimos, J. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induced+pluripotent+stem+cells+generated+from+patients+with+ALS+can+be+differentiated+into+motor+neurons.">Induced pluripotent stem cells generated from patients with ALS can be differentiated into motor neurons.</a> Science. 321, 1218-1221 (2008).</li><li>Aasen, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Efficient+and+rapid+generation+of+induced+pluripotent+stem+cells+from+human+keratinocytes.">Efficient and rapid generation of induced pluripotent stem cells from human keratinocytes.</a> Nat Biotechnli. 26, 1276-1284 (2008).</li><li>Park, I. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+human-induced+pluripotent+stem+cells.">Generation of human-induced pluripotent stem cells.</a> Nat Protoc. 3, 1180-1186 (2008).</li></ol>

De auteurs van dit artikel zijn werkzaam bij Life Technologies, dat reagentia en instrumenten gebruikt in dit artikel oplevert.

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Knockout DMEM/F12</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Cat. no. 12660-012</td>
<td>Note: see appendix for the use of alternative DMEM products</td>
</tr>
<tr>
<td>GlutaMAX-I</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Cat. No. 35050-061</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>KnockOut Serum Replacement</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>KnockOut SR, Cat. no. 10828-028</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>KnockOut Serum Replacement Growth Factor Cocktail</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>KnockOut SR-GFC, Cat. no. A10580-01</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>FGF-basic, human recombinant protein, 10 &mu;g</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>bFGF, Cat. no. PHG0024</td>
<td>Note: see appendix for alternative bFGF pack sizes.</td>
</tr>
<tr>
<td>2-Mercaptoethanol</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Cat. no. 21985-023</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Dispase</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Cat. no. 17105-041</td>
<td>Note: see appendix for alternative passaging methods.</td>
</tr>
<tr>
<td>Geltrex hESC-Qualified Reduced Growth Factor Basement Matrix, 1 mL</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Cat. no. A10480-01</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Dulbecco&#x2019;s Phosphate Buffered Saline (D-PBS) without calcium and magnesium </td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Cat. no. 14190-144</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Sterile Tissue Culture Hood</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Incubator set at 37&deg;C</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Pipette-Aid</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Water Bath set at 37&deg;C</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Sterile serological pipettes (5 mL, 10 mL)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Centrifuge</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>15 mL centrifuge tubes</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>60mm Tissue Culture treated dishes</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

feeder-free adaptation, culture and passaging of human ips cells using complete knockout serum replacement feeder-free medium

De ontdekking in 2006 dat de mens en muis fibroblasten kunnen worden geherprogrammeerd om iPS cellen 1-3 met kwaliteiten opvallend vergelijkbaar met embryonale stamcellen te genereren heeft een belangrijke nieuwe bron van pluripotente cellen voor drug discovery, celtherapie en fundamenteel onderzoek. GIBCO media en reagentia zijn in de voorhoede van de pluripotente stamcel-onderzoek voor jaren. Knockout DMEM aangevuld met Knockout Serum Vervanging is in de media van de keuze voor embryonale stamcellen de groei en nu iPS celcultuur 3-9. Deze gouden standaard media systeem kan nu worden gebruikt voor feeder-vrije cultuur met de toevoeging van Knockout SR Growth Factor Cocktail. Traditionele menselijke ES en iPS celcultuurmethoden vereisen het gebruik van muis of mens fibroblast feeder lagen, of feeder-geconditioneerd medium. Deze cultuur methoden zijn arbeidsintensief, moeilijk op schaal en het is moeilijk te onderhouden HIPS cellen ongedifferentieerd te wijten aan de undefined voorwaarden. Invitrogen heeft ontwikkeld Knockout SR Growth Factor Cocktail, zodat u gemakkelijk de overgang je heupen celculturen aan feeder-vrij met behoud van uw gebruik van Knockout SR.

Watch this Scientific Journal Video about Feeder-Free Adaptation, Culture and Passaging of Human IPS Cells using Complete KnockOut Serum Replacement Feeder-Free Medium at JoVE.com

Feeder-Free Adaptation, Culture and Passaging of Human IPS Cells using Complete KnockOut Serum Replacement Feeder-Free Medium

Het volgende protocol bevat instructies voor het aanpassen van de mens geïnduceerde pluripotente stamcellen (iPS) cellen aan feeder-vrije cultuur met complete KnockOut Serum Vervangende Feeder-vrij medium (KSR-FF). Een keer aangepast, instructies voor de voortdurende onderhoud zijn ook aanwezig.

Feeder-vrije bewerking, Cultuur en passage van de Mens IPS cellen met behulp van complete KnockOut Serum Vervangende Feeder-vrij medium

The discovery in 2006 that human and mouse fibroblasts could be reprogrammed to generate iPS cells 1-3 with qualities remarkably similar to embryonic stem ...

Research

JoVE Journal

Biology

Passaging HuES Human Embryonic Stem Cell-lines with Trypsin.

Passage TINTEN menselijke embryonale stamcellijnen-lijnen met trypsine

In this video we demonstrate how our lab routinely passages HuES human embryonic stem cell lines with trypsin.  Human embryonic stem cells are artifacts ...

Human ES cells: Starting Culture from Frozen Cells

Menselijke ES-cellen: Vanaf Cultuur van bevroren cellen

Here we demonstrate how our lab begins a HuES human embryonic stem cell line culture from a frozen stock.  First, a one to two day old ten cm plate of  ...

Predicting the Effectiveness of Population Replacement Strategy Using Mathematical Modeling

Het voorspellen van de effectiviteit van de bevolking Replacement strategie met behulp van wiskundige modellering

Charles Taylor and John Marshall explain the utility of mathematical modeling for evaluating the effectiveness of population replacement strategy.  ...

Passaging Human Neural Stem Cells

Passage menselijke neurale stamcellen

The ability to manipulate human neural stem/precursor cells (hNSPCs) in vitro provides a means to investigate their utility as cell transplants for ...

Culture and Maintenance of Human Embryonic Stem Cells  

Cultuur en onderhoud van menselijke embryonale stamcellen

Human embryonic stem (hES) cells must be monitored and cared for in order to maintain healthy, undifferentiated cultures. At minimum, the cultures must be ...

Cryopreserving and Recovering of Human iPS Cells using Complete KnockOut Serum Replacement Feeder-Free Medium

Cryopreserving en herstellen van de Mens iPS cellen met behulp van complete KnockOut Serum Vervangende Feeder-vrij medium

Generation of Human Cardiomyocytes: A Differentiation Protocol from Feeder-free Human Induced Pluripotent Stem Cells

Generatie van Human Cardiomyocytes: Een Differentiatie Protocol van Feeder-vrije Human geïnduceerde pluripotente stamcellen

In order to investigate the events driving heart development and to determine the molecular mechanisms leading to myocardial diseases in humans, it is ...

Isolation of Small Noncoding RNAs from Human Serum

Isolatie van Kleine Noncoding RNA&#39;s uit humaan serum

The analysis of RNA and its expression is a common feature in many laboratories. Of significance is the emergence of small RNAs like microRNAs, which are ...

MicroRNA Expression Profiles of Human iPS Cells, Retinal Pigment Epithelium Derived From iPS, and Fetal Retinal Pigment Epithelium

MicroRNA expressie profielen van de Mens iPS cellen, retinale pigment epitheel Derived From iPS en Foetale retinale pigment epitheel

The objective of this report is to describe the protocols for comparing the microRNA (miRNA) profiles of human induced-pluripotent stem (iPS) cells, ...

Preparation of Rat Serum Suitable for Mammalian Whole Embryo Culture

Voorbereiding van de Rat Serum Geschikt voor zoogdieren Hele Embryo Cultuur

Mammalian whole embryo culture (WEC) is a widely used technique for examining pharmacological toxicity in developing mouse and rat embryos and for ...