Name: feeder-free adaptation, culture and passaging of human ips cells using complete knockout serum replacement feeder-free medium
Uploaded: 2010-07-15T17:00:00
Duration: 8 min 29 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Feeder-Free Adaptation, Culture and Passaging of Human IPS Cells using Complete KnockOut Serum Replacement Feeder-Free Medium at JoVE.com

<ol>
	<li>Takahashi, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+pluripotent+stem+cells+from+mouse+embryonic+and+adult+fibroblast+cultures+by+defined+factors.">Induction of pluripotent stem cells from mouse embryonic and adult fibroblast cultures by defined factors.</a> Cell. 126, 663-676 (2006).</li><li>Takahashi, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+pluripotent+stem+cells+from+adult+human+fibroblasts+by+defined+factors.">Induction of pluripotent stem cells from adult human fibroblasts by defined factors.</a> Cell. 131, 861-872 (2007).</li><li>Yu, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induced+pluripotent+stem+cell+lines+derived+from+human+somatic+cells.">Induced pluripotent stem cell lines derived from human somatic cells.</a> Science. 318, 1917-1920 (2007).</li><li>Maherali, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Guidelines+and+techniques+for+the+generation+of+induced+pluripotent+stem+cells.">Guidelines and techniques for the generation of induced pluripotent stem cells.</a> Cell Stem Cell. 3, 595-605 (2008).</li><li>Li, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+rat+and+human+induced+pluripotent+stem+cells+by+combining+genetic+reprogramming+and+chemical+inhibitors.">Generation of rat and human induced pluripotent stem cells by combining genetic reprogramming and chemical inhibitors.</a> Cell Stem Cell. 4, 16-19 (2009).</li><li>Liao, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+induced+pluripotent+stem+cell+lines+from+adult+rat+cells.">Generation of induced pluripotent stem cell lines from adult rat cells.</a> Cell Stem Cell. 4, 11-15 (2009).</li><li>Dimos, J. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induced+pluripotent+stem+cells+generated+from+patients+with+ALS+can+be+differentiated+into+motor+neurons.">Induced pluripotent stem cells generated from patients with ALS can be differentiated into motor neurons.</a> Science. 321, 1218-1221 (2008).</li><li>Aasen, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Efficient+and+rapid+generation+of+induced+pluripotent+stem+cells+from+human+keratinocytes.">Efficient and rapid generation of induced pluripotent stem cells from human keratinocytes.</a> Nat Biotechnli. 26, 1276-1284 (2008).</li><li>Park, I. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+human-induced+pluripotent+stem+cells.">Generation of human-induced pluripotent stem cells.</a> Nat Protoc. 3, 1180-1186 (2008).</li></ol>

इस लेख के लेखक कि अभिकर्मकों और इस लेख में इस्तेमाल उपकरणों का उत्पादन जीवन टेक्नोलॉजीज द्वारा नियोजित कर रहे हैं.

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Knockout DMEM/F12</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Cat. no. 12660-012</td>
<td>Note: see appendix for the use of alternative DMEM products</td>
</tr>
<tr>
<td>GlutaMAX-I</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Cat. No. 35050-061</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>KnockOut Serum Replacement</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>KnockOut SR, Cat. no. 10828-028</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>KnockOut Serum Replacement Growth Factor Cocktail</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>KnockOut SR-GFC, Cat. no. A10580-01</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>FGF-basic, human recombinant protein, 10 &mu;g</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>bFGF, Cat. no. PHG0024</td>
<td>Note: see appendix for alternative bFGF pack sizes.</td>
</tr>
<tr>
<td>2-Mercaptoethanol</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Cat. no. 21985-023</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Dispase</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Cat. no. 17105-041</td>
<td>Note: see appendix for alternative passaging methods.</td>
</tr>
<tr>
<td>Geltrex hESC-Qualified Reduced Growth Factor Basement Matrix, 1 mL</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Cat. no. A10480-01</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Dulbecco&#x2019;s Phosphate Buffered Saline (D-PBS) without calcium and magnesium </td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Cat. no. 14190-144</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Sterile Tissue Culture Hood</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Incubator set at 37&deg;C</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Pipette-Aid</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Water Bath set at 37&deg;C</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Sterile serological pipettes (5 mL, 10 mL)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Centrifuge</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>15 mL centrifuge tubes</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>60mm Tissue Culture treated dishes</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

feeder-free adaptation, culture and passaging of human ips cells using complete knockout serum replacement feeder-free medium

2006 में खोज की है कि मानव और माउस fibroblasts आईपीएस कोशिकाओं उल्लेखनीय भ्रूण स्टेम कोशिकाओं के समान गुणों के साथ 1-3 उत्पन्न करने के लिए reprogrammed किया जा सकता है सेल थेरेपी, दवाओं की खोज, और बुनियादी अनुसंधान के लिए pluripotent कोशिकाओं की एक मूल्यवान नए स्रोत पैदा कर दी है. GIBCO मीडिया और अभिकर्मकों pluripotent स्टेम सेल अनुसंधान के मामले में सबसे आगे साल के लिए किया गया है. नॉकआउट DMEM नॉकआउट सीरम रिप्लेसमेंट के साथ पूरक पसंद के भ्रूण स्टेम सेल के विकास और अब आईपीएस कोशिका 3-9 संस्कृति के लिए मीडिया है . यह सोने के मानक मीडिया प्रणाली अब नॉकआउट एसआर ग्रोथ फैक्टर कॉकटेल के अलावा के साथ फीडर मुक्त संस्कृति के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है. पारंपरिक मानव ES और आईपीएस सेल संस्कृति तरीके माउस या मानव fibroblast फीडर परतों का उपयोग, या फीडर वातानुकूलित माध्यम की आवश्यकता होती है. ये संस्कृति तरीकों श्रम प्रधान, पैमाने पर करने के लिए मुश्किल कर रहे हैं और यह कूल्हों undifferentiated कोशिकाओं अपरिभाषित शर्तों की वजह से बनाए रखने के लिए मुश्किल है. Invitrogen नॉकआउट एसआर ग्रोथ फैक्टर कॉकटेल विकसित किया गया है आप आसानी से फीडर - मुक्त करने के लिए अपने कूल्हों सेल संस्कृतियों संक्रमण के लिए अनुमति देते हैं, जबकि अभी भी नॉकआउट एसआर के आपके उपयोग को बनाए रखने.

Watch this Scientific Journal Video about Feeder-Free Adaptation, Culture and Passaging of Human IPS Cells using Complete KnockOut Serum Replacement Feeder-Free Medium at JoVE.com

Feeder-Free Adaptation, Culture and Passaging of Human IPS Cells using Complete KnockOut Serum Replacement Feeder-Free Medium

निम्नलिखित प्रोटोकॉल फीडर मुक्त संस्कृति के लिए मानव प्रेरित pluripotent स्टेम सेल (आईपीएस) की आदत डाल पूरा पीटा सीरम रिप्लेसमेंट - फीडर मुफ्त मध्यम (KSR - एफएफ) का उपयोग करने के लिए निर्देश प्रदान करता है. एक बार अनुकूलित, नित्य रखरखाव के लिए निर्देश भी प्रदान की जाती हैं.

फीडर मुफ्त अनुकूलन, और मानव आईपीएस पूरा पीटा सीरम रिप्लेसमेंट फीडर मुफ्त मध्यम का उपयोग कोशिकाओं की संस्कृति passaging

The discovery in 2006 that human and mouse fibroblasts could be reprogrammed to generate iPS cells 1-3 with qualities remarkably similar to embryonic stem ...

Research

JoVE Journal

Biology

Passaging HuES Human Embryonic Stem Cell-lines with Trypsin.

Passaging hues मानव भ्रूणीय स्टेम trypsin के साथ सेल लाइनों

In this video we demonstrate how our lab routinely passages HuES human embryonic stem cell lines with trypsin.  Human embryonic stem cells are artifacts ...

Human ES cells: Starting Culture from Frozen Cells

जमे हुए कक्ष से शुरू संस्कृति: मानव ES कोशिकाओं

Here we demonstrate how our lab begins a HuES human embryonic stem cell line culture from a frozen stock.  First, a one to two day old ten cm plate of  ...

Predicting the Effectiveness of Population Replacement Strategy Using Mathematical Modeling

जनसंख्या रिप्लेसमेंट रणनीति की प्रभावशीलता की भविष्यवाणी गणितीय मॉडलिंग का प्रयोग

Charles Taylor and John Marshall explain the utility of mathematical modeling for evaluating the effectiveness of population replacement strategy.  ...

Passaging Human Neural Stem Cells

मानव तंत्रिका स्टेम कोशिकाओं passaging

The ability to manipulate human neural stem/precursor cells (hNSPCs) in vitro provides a means to investigate their utility as cell transplants for ...

Culture and Maintenance of Human Embryonic Stem Cells  

संस्कृति और मानव भ्रूण स्टेम कोशिकाओं के रखरखाव

Human embryonic stem (hES) cells must be monitored and cared for in order to maintain healthy, undifferentiated cultures. At minimum, the cultures must be ...

Cryopreserving and Recovering of Human iPS Cells using Complete KnockOut Serum Replacement Feeder-Free Medium

Cryopreserving और मानव आईपीएस कोशिकाओं के पुनर्प्राप्त पूरा पीटा सीरम रिप्लेसमेंट फीडर मुफ्त मध्यम का उपयोग

Generation of Human Cardiomyocytes: A Differentiation Protocol from Feeder-free Human Induced Pluripotent Stem Cells

मानव cardiomyocytes की पीढ़ी: फीडर से मुक्त मानव प्रेरित pluripotent स्टेम सेल से एक भेदभाव प्रोटोकॉल

In order to investigate the events driving heart development and to determine the molecular mechanisms leading to myocardial diseases in humans, it is ...

Isolation of Small Noncoding RNAs from Human Serum

मानव सीरम से लघु noncoding RNAs के अलगाव

The analysis of RNA and its expression is a common feature in many laboratories. Of significance is the emergence of small RNAs like microRNAs, which are ...

MicroRNA Expression Profiles of Human iPS Cells, Retinal Pigment Epithelium Derived From iPS, and Fetal Retinal Pigment Epithelium

मानव आईपीएस कोशिकाओं के microRNA अभिव्यक्ति प्रोफाइल, आईपीएस से व्युत्पन्न रेटिना वर्णक उपकला, और भ्रूण रेटिना वर्णक उपकला

The objective of this report is to describe the protocols for comparing the microRNA (miRNA) profiles of human induced-pluripotent stem (iPS) cells, ...

Preparation of Rat Serum Suitable for Mammalian Whole Embryo Culture

स्तनधारी पूरे भ्रूण संस्कृति के लिए उपयुक्त चूहा सीरम की तैयारी

Mammalian whole embryo culture (WEC) is a widely used technique for examining pharmacological toxicity in developing mouse and rat embryos and for ...