Name: cryopreserving and recovering of human ips cells using complete knockout serum replacement feeder-free medium
Uploaded: 2010-07-15T17:00:00
Duration: 6 min 47 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Cryopreserving and Recovering of Human iPS Cells using Complete KnockOut Serum Replacement Feeder-Free Medium at JoVE.com

<p class="jove_content"> Примечание: Для поддержания стерильных условиях культуры, все процедуры в данном протоколе проводятся с использованием стерильной лабораторной практики и проводится в соответствии ламинарном боксе. </p><p class="jove_content"> Перед началом, убедитесь, что любые средства массовой информации находится в равновесии до 37 ° С и надлежащим образом в газовых камерах. </p><p class="jove_title"> Подготовка Geltrex покрытием Блюда культуры </p><p class="jove_content"> Примечание: см. приложение для использования CELLstart покрытием блюда культуры. </p><ol><li> Оттепель одна трубка Geltrex (1 мл) медленно при температуре 2-8 ° С и разбавленных 1:100 она в 99 мл Нокаут D-MEM/F-12. Смешайте раствор нежно. <br /><br /> Примечание: Некоторые линий плюрипотентных клеток могут требовать различные разведения Geltrex для оптимального роста. См. приложение для альтернативного разведения. </li><li> Обложка всей поверхности каждой культуры блюдо с решением Geltrex (1 мл на 35-мм блюдо, 1,5 мл для 60-мм блюдо). </li><li> Печать каждое блюдо с парафильмом для предотвращения высыхания и инкубировать блюда в течение 1 часа при температуре 37 ° C. <br /><br /> Примечание: На данном этапе вы можете хранить Geltrex покрытием блюда культуры при 4 ° С в течение 1 месяца. Печать каждое блюдо с парафильмом для предотвращения Geltrex от высыхания. </li><li> Перед началом использования, передачи Geltrex покрытием блюда ламинарном боксе и позволит им, чтобы уравновесить до комнатной температуры (около 1 часа). </li></ol><p class="jove_title"> Подготовка Полное питатель-Free SR KnockOut среднего </p><ol><li> Для приготовления 1 мл 10 мкг / мл Базовое решение FGF, асептически смесь компонентов, перечисленных ниже. Алиготе решение и хранить при температуре -20 ° С до 6 месяцев. <br /><table border="0"><tbody><tr><td> Основные FGF </td><td> 10 мкг </td></tr><tr><td> D-PBS </td><td> 990μL </td></tr><tr><td> 10% BSA </td><td> 10 мкл </td></tr></tbody></table><br /> Примечание: BSA может быть заменен или HSA Нокаут SR на той же концентрации. </li><li> Для подготовки 50 мл 2 мг / мл Dispase решение, асептически смесь компонентов, перечисленных ниже. Фильтры стерилизации раствора и хранить при 4 ° С в течение 2 недель. <table border="0"><tbody><tr><td> Dispase </td><td> 100 мг </td></tr><tr><td> D-PBS </td><td> 50 мл </td></tr></tbody></table></li><li> Для подготовки 100 мл полной SR KnockOut питатель-Free (КСР-FF) асептически объединить компоненты, перечисленные в таблице ниже. <br /><table border="1"><tbody><tr><td> <strong>Компонент</strong> </td><td> <strong>Концентрация сток</strong> </td><td> <strong>Конечная концентрация</strong> </td><td> <strong>Объем</strong> </td></tr><tr><td> Нокаут DMEM/F12 (кат. нет. 12660-012) </td><td> - </td><td> 1X </td><td> 76,8 мл </td></tr><tr><td> GlutaMAX-I (кат. № 35050-061) </td><td> 200 мМ </td><td> 2 мМ </td><td> 1 мл </td></tr><tr><td> KnockOut SR (кат. нет. 10828-028) </td><td> - </td><td> 20% </td><td> 20 мл </td></tr><tr><td> KnockOut SR-GFC (кат. нет. A10580-01) </td><td> 50X </td><td> 1X </td><td> 2 мл </td></tr><tr><td> bFGF (кат. нет. PHG0024). </td><td> 10 мкг / мл </td><td> 20 нг / мл </td><td> 200 мкл </td></tr></tbody></table><br /> Вы можете хранить KSR-FF среде при температуре 2-8 ° С не более одной недели. </li><li> Перед предварительно уравновешивающая полной среде с температурой и газами, асептически <strong>добавить необходимый объем 2 меркаптоэтанол</strong> (55 мМ фондовом концентрация) для 0,1 ммоль конечной концентрации. Например, чтобы подготовить 100 мл KSR-FF средний добавить 182 мкл 55 мМ 2-меркаптоэтанол (1:550 разведение) Кроме того, 2-меркаптоэтанол могут быть добавлены к 1X завершены средние и хранить при температуре 2-8 ° С не более одной недели. </li></ol><p class="jove_title"> Подготовка Замораживание / Криоконсервация среднего </p><p class="jove_content"> Криоконсервация среда состоит из двух средств массовой информации; Замораживание среднего и морозильные Б. Средний Они будут добавлены к клеткам в разное время и должны оставаться разделены. Каждый из них 50% от общего объема Криоконсервация Средний необходимости. Общий объем Криоконсервация Средний необходимо, так это 1 мл для каждого флакона должны быть заморожены. 90% сливной 60мм блюдо чЭСК могут быть использованы для банка 2 флаконов чЭСК в криоконсервации СМИ. </p><p class="jove_content"> Подготовка достаточного объема каждого Замораживание среды с дополнительными 2-5 мл для обеспечения превышения. </p><table border="1"><tbody><tr><td> Замораживание среднего (50% от конечного объема): </td><td> 50% DMEM/F12 </td><td> 50% КСР </td></tr><tr><td> Замораживание среднего B (50% от конечного объема): </td><td> 80% DMEM/F12 </td><td> 20% ДМСО </td></tr></tbody></table><p class="jove_step"> Пример: </p><p class="jove_content"> Если вы замораживания 20 флаконов клетки, вам необходимо 20 мл Криоконсервация Средний. Добавить 4 мл за превышения в общей сложности 24mL Средний Криоконсервация. Это означает, что вам нужно 12 мл замораживания среднего (50% 24mL) и 12 мл замораживания B среднего (50% 24mL). </p><table border="1"><tbody><tr><td> Замораживание среднего (12 мл): </td><td> 6 мл DMEM/F12 </td><td> 6 мл KSR </td></tr><tr><td> Замораживание среднего B (12 мл): </td><td> 9,6 мл DMEM/F12 </td><td> 2,4 мл ДМСО </td></tr></tbody></table><p class="jove_content"> Окончательный состав Криоконсервация среднего составляет 65% DMEM/F12, 25% КСР, а 10% ДМСО. </p><p class="jove_title"> Cryopreserving iPSCs </p><ol><li> Предварительно теплой необходимый объем Dispase в 37 ° С водяной бане. См. Таблицу 1 ниже для деталей относительно объемов требуется. </li><li> Предварительно равновесие необходимый объем KSR-FF в 37 ° С водяной бане for15 мин. Обратитесь к таблице 1below подробнее об объемах требуется. </li><li> Аспирируйте провел среды из сосуда для культивирования с помощью пипетки, и промойте клетки дважды с D-PBS. </li><li> Аккуратно добавить подогретого Dispase решение культуры судна (например, 1 мл раствора на Dispase 60-мм культуры блюдо). Swirl культуры судна, чтобы покрыть всю поверхность клетки. </li><li> Инкубируйте культуру судна при температуре 37 ° С в течение 3 минут. </li><li> Удалить сосуд из инкубатора, аспирация Dispase решение, и осторожно мыть клетки с D-PBS. </li><li> Аккуратно очистить клетки с поверхности культуры блюдо, используя сотовый скребок и передачи клеткам стерильные 15 мл центрифужную пробирку. </li><li> Промыть культуры блюдо дважды с KSR-FF, мягко &quot;распыления от&quot; любой клетки, которые не отделены. Бассейн промыть среды с клетками в 15 мл трубки. </li><li> Центрифуга трубке при 200 мкг в течение 5 минут при комнатной температуре до гранул клеток. </li><li> Тщательно аспирата супернатант, не нарушая осадок клеток и отбросить его. </li><li> Подготовить достаточное количество криопробирки. Как только клетки находятся в контакте с ДМСО, они должны быть аликвоты и замороженные в течение 2-3 минут. </li><li> Аккуратно вылить содержимое трубки, чтобы полностью вытеснить клеточный осадок из трубки дно и вновь приостановить клеток в Замораживание А. среды [, осторожно пипетирования вверх и вниз с помощью 5-мл серологические пипетки]. После однородной суспензии сгустков, добавляют равный объем Замораживание В средней до этого, в капле мудрым образом, мягко закрученного клеточную суспензию перемешать. <br /><br /> Примечание: На данном этапе клетки находятся в контакте с ДМСО, и работа должна быть выполнена эффективно. Как только клетки находятся в контакте с ДМСО, они должны быть аликвоты и замороженные в течение 2-3 минут. </li><li> Алиготе 1 мл клеточной суспензии в каждый криопробирку. </li><li> Быстро место флаконов в морозный г-н [быстро заморозить] и перенести его на -80 ° С в течение ночи. </li><li> После ночи хранения при температуре -80 ° С, передача клетки резервуар жидкого азота для длительного хранения. </li></ol><p class="jove_title"> IPSC оттепели флакон и восстановления клеток </p><p class="jove_content"> Примечание: KSR-FF может быть заменен KSR-содержащих MEF-кондиционированной среды, или KSR средой для использования с фидеров. См. приложение к инструкции по подготовке средств массовой информации. </p><p class="jove_content"> Предварительно 10 мл теплой KSR-FF среды в 50 мл трубки. </p><ol><li> Уравновесить соответствующим количеством Geltrex покрытием блюд до комнатной температуры и аспирации жидкости из любого блюда непосредственно перед покрытием выГ клеток. </li><li> Осторожно снимите чЭСК (или IPSC) флакон с жидкой резервуар для хранения азота. </li><li> Быстро размораживайте флакон клеток в 37 ° С водяной бане, пока только небольшой кусок замороженного остается во флаконе. </li><li> Спрей флакон с 70% изопропанола для обеззараживания его и перенести его на стерильную капот культуры ткани. </li><li> Асептических условиях передачи все содержимое флакона в 15 мл коническую трубку с помощью 5 мл пипетки. </li><li> Промойте флакон с 1 мл KSR-FF и добавьте к 15 мл центрифужную пробирку. </li><li> Медленно, добавить 4 мл KSR-FF каплям к ячейкам в 15 мл коническую трубку. При добавлении среде, мягко перемещать зонд вперед и назад, чтобы смесь клеток. (Это уменьшает осмотический шок для клеток). </li><li> Центрифуга 15 мл трубки с клеточной суспензии при 1000rpm (200 х <em>г)</em> в течение 2 минут при комнатной температуре. </li><li> Тщательно аспирации и отбросить супернатант, не нарушая клеточный осадок. </li><li> Повторное приостановить осадок клеток в подогретого KSR-FF (например 4mL/60 мм блюдо) с помощью 5 мл пипетки и осторожно пипеткой клетки вверх и вниз, пока осадок клеток полностью рассеялись. Жизнеспособность более 70%, как ожидается, поэтому если жизнеспособность составляет менее 70%, это может занять больше времени для клеток достичь слияния. </li><li> Используя ту же пипетку, передачи клеточной суспензии по каплям к Geltrex покрытием культуры блюдо предварительно доведены до комнатной температуры. </li><li> Место культуры блюдо в 37 ° С инкубатор, с влажной атмосфере от 4 до 6% СО <sub>2</sub> в воздухе. Тщательно водоворот судна в направлении с севера на юг, с востока на запад шаблон, чтобы равномерно распределить клетки. </li><li> Аккуратно жидкостью изменить культуру блюдо 24 часа после оттепели и ежедневно после этого удалить ячейки мусором, а также предоставить свежие питательные вещества, пока блюдо составляет примерно 70-80% вырожденная. Для сохранения культуры и пассажи ваш плюрипотентных клеток, обратитесь к нашему протокол под названием &quot;питатель-Free культуры и пассажи плюрипотентных клеток человека использовании Полное KnockOut сыворотки Замена подачи среды без&quot; </li></ol><p class="jove_title"> Ожидаемые результаты </p><p class="jove_content"> Клетки должна быть примерно 70-80% сливной до криоконсервации. Dispase пищеварения результатов в керлинг и складывания колоний вдоль колонии полей. После сбора урожая клетки они заморожены как маленькие сгустки в криоконсервации СМИ. Как только флакон оттаяли, восстановить клетки и приложить к предварительно покрытых блюдо как небольшие пряди. Они растут быстро, ведущие к сливной блюдо в 5-6 дней. </p><p class="jove_title"> Таблица 1 - Рекомендуемые объемы </p><table border="1"><tbody><tr><td> <strong>Компонент</strong> </td><td> <strong>35 блюд</strong> </td><td> <strong>Блюдо 60 мм</strong> </td><td> <strong>Блюдо 100 мм</strong> </td></tr><tr><td> Полное KnockOut SR среда </td><td> 2 мл </td><td> 4 мл </td><td> 10 мл </td></tr><tr><td> Решение Geltrex </td><td> 1 мл </td><td> 1,5 мл </td><td> 4-5 мл </td></tr><tr><td> Dispase </td><td> 0,5 мл </td><td> 1 мл </td><td> 3-4 мл </td></tr><tr><td> D-PBS для полоскания </td><td> 2 мл </td><td> 4 мл </td><td> 10 мл </td></tr></tbody></table><p class="jove_content"> Пожалуйста, <a href="http://www.jove.com/files/ftp_upload/2237/2237_appendix.pdf">нажмите здесь, чтобы посмотреть приложение</a> . </p>

<ol>
	<li>Takahashi, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+pluripotent+stem+cells+from+mouse+embryonic+and+adult+fibroblast+cultures+by+defined+factors.">Induction of pluripotent stem cells from mouse embryonic and adult fibroblast cultures by defined factors.</a> <em style='font-style: italic'>Cell</em>. <b>126</b>, 663-676 (2006).</li><li>Takahashi, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+pluripotent+stem+cells+from+adult+human+fibroblasts+by+defined+factors.">Induction of pluripotent stem cells from adult human fibroblasts by defined factors.</a> <em style='font-style: italic'>Cell</em>. <b>131</b>, 861-872 (2007).</li><li>Yu, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induced+pluripotent+stem+cell+lines+derived+from+human+somatic+cells.">Induced pluripotent stem cell lines derived from human somatic cells.</a> <em style='font-style: italic'>Science</em>. <b>318</b>, 1917-1920 (2007).</li><li>Maherali, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Guidelines+and+techniques+for+the+generation+of+induced+pluripotent+stem+cells.">Guidelines and techniques for the generation of induced pluripotent stem cells.</a> <em style='font-style: italic'>Cell Stem Cell</em>. <b>3</b>, 595-605 (2008).</li><li>Li, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+rat+and+human+induced+pluripotent+stem+cells+by+combining+genetic+reprogramming+and+chemical+inhibitors.">Generation of rat and human induced pluripotent stem cells by combining genetic reprogramming and chemical inhibitors.</a> <em style='font-style: italic'>Cell Stem Cell</em>. <b>4</b>, 16-19 (2009).</li><li>Liao, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+induced+pluripotent+stem+cell+lines+from+adult+rat+cells.">Generation of induced pluripotent stem cell lines from adult rat cells.</a> <em style='font-style: italic'>Cell Stem Cell</em>. <b>4</b>, 11-15 (2009).</li><li>Dimos, J. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induced+pluripotent+stem+cells+generated+from+patients+with+ALS+can+be+differentiated+into+motor+neurons.">Induced pluripotent stem cells generated from patients with ALS can be differentiated into motor neurons.</a> <em style='font-style: italic'>Science</em>. <b>321</b>, 1218-1221 (2008).</li><li>Aasen, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Efficient+and+rapid+generation+of+induced+pluripotent+stem+cells+from+human+keratinocytes.">Efficient and rapid generation of induced pluripotent stem cells from human keratinocytes.</a> <em style='font-style: italic'>Nat Biotechnli</em>. <b>26</b>, 1276-1284 (2008).</li><li>Park, I. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+human-induced+pluripotent+stem+cells.">Generation of human-induced pluripotent stem cells.</a> <em style='font-style: italic'>Nat Protoc</em>. <b>3</b>, 1180-1186 (2008).</li></ol>

<p class="jove_content"> Авторы этой статьи являются сотрудниками Life Technologies, которая производит реактивы и инструменты, используемые в этой статье. </p>

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Knockout DMEM/F12</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>12660-012</td>
<td>Note: see appendix for the use of alternative DMEM products GlutaMAX-I (Cat. No. 35050-061)</td>
</tr>
<tr>
<td>KnockOut Serum Replacement</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>10828-028</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>KnockOut Serum Replacement Growth Factor Cocktail</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>A10580-01</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>FGF-basic, human recombinant protein, 10 &mu;g</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>PHG0024</td>
<td>Note: see appendix for alternative bFGF pack sizes.</td>
</tr>
<tr>
<td>2-Mercaptoethanol</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>21985-023</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Dispase</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>17105-041</td>
<td>Note: see appendix for alternative passaging methods</td>
</tr>
<tr>
<td>Geltrex hESC-Qualified Reduced Growth Factor Basement Matrix, 1 mL</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>A10480-01</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Dulbecco&#x2019;s Phosphate Buffered Saline (D-PBS) without calcium and magnesium</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>14190-144</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>DMSO, 500mL</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>JT Baker</td>
<td>JT9224-1</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Sterile Tissue Culture Hood</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Incubator set at 37&deg;C</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Pipette-Aid</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Water Bath set at 37&deg;C</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Sterile serological pipettes (5 mL, 10 mL)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Centrifuge</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>15 mL centrifuge tubes</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>60 mm Tissue Culture treated dishes</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Liquid nitrogen storage tank</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Isopropanol freezing containers</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>1.5 mL Cryovials</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>
	

cryopreserving and recovering of human ips cells using complete knockout serum replacement feeder-free medium

<p class="jove_content"> Открытие в 2006 году, что человеческие и мышиных фибробластов может быть перепрограммирован для получения плюрипотентных клетках <sup>1-3</sup> с качествами, удивительно похожи на эмбриональные стволовые клетки создал новую ценную источником плюрипотентных клеток для открытия новых лекарств, клеточная терапия, и фундаментальных исследований. </p><p class="jove_content"> GIBCO СМИ и реагенты были на переднем крае плюрипотентных исследований стволовых клеток в течение многих лет. Нокаут DMEM дополнен Нокаут сыворотки Замена средств по выбору для эмбрионального роста стволовых клеток, а теперь плюрипотентных клеточных культур <sup>3-9.</sup> Это золотой стандарт системы средств массовой информации теперь может быть использован для подачи без культуры с добавлением Knockout SR Коктейль фактор роста. </p><p class="jove_content"> Традиционные человека плюрипотентных ES и методов клеточной культуры требует использования мыши или человека слоев фибробластов подачи или подачи с кондиционером среды. Эти культуры методы трудоемки, трудно масштабировать и трудно поддерживать бедра клетки недифференцированной из-за неопределенных условиях. Invitrogen разработала Нокаут SR фактор роста коктейль, чтобы позволить Вам легко перейти ваши бедра и культур ЭСК ячейки подачи без сохраняя при этом ваше использование Нокаут SR. </p>

Watch this Scientific Journal Video about Cryopreserving and Recovering of Human iPS Cells using Complete KnockOut Serum Replacement Feeder-Free Medium at JoVE.com

Cryopreserving and Recovering of Human iPS Cells using Complete KnockOut Serum Replacement Feeder-Free Medium

<p class="jove_content">Этот протокол описывает подробную процедуру cryopreserving плюрипотентных клеток человека в нокаут среду криоконсервации SR и восстановления этих клеток в полной KnockOut SR подачи Free (КСР-FF), средний или подачи основе KnockOut SR среды.</p>

Cryopreserving и восстановление клеток человека плюрипотентных использованием Полное KnockOut сыворотки питатель-Free Замена среднего

The discovery in 2006 that human and mouse fibroblasts could be reprogrammed to generate iPS cells 1-3 with qualities remarkably similar to embryonic stem ...

Research

JoVE Journal

Biology

Predicting the Effectiveness of Population Replacement Strategy Using Mathematical Modeling

Прогнозирование эффективности населения Стратегия Замена использованием математического моделирования

Charles Taylor and John Marshall explain the utility of mathematical modeling for evaluating the effectiveness of population replacement strategy.  ...

Generating iPS Cells from MEFS through Forced Expression of Sox-2, Oct-4, c-Myc, and Klf4

Создание плюрипотентных Клетки MEFS через принудительный Выражение Sox-2, Oct-4, с-Myc, и Klf4

Pluripotency can be induced in differentiated murine by viral transduction of Oct4, Sox2, Klf4, and c-Myc (Takahashi and Yamanaka, 2006;  Wernig, et al., ...

Isolation and Animal Serum Free Expansion of Human Umbilical Cord Derived Mesenchymal Stromal Cells (MSCs) and Endothelial Colony Forming Progenitor Cells (ECFCs)

Isolation and Animal Serum Free Expansion of Human Umbilical Cord Derived Mesenchymal Stromal Cells MSCs and Endothelial Colony Forming Progenitor Cells ECFCs

Выделение и животных Сыворотка свободного расширения прав пуповины производных мезенхимальных стромальных клеток (МСК) и эндотелиальных колонии Формирование клеток-предшественников (ECFCs)

The umbilical cord is a rich source for progenitor cells with high proliferative potential including mesenchymal stromal cells (also termed mesenchymal ...

Feeder-Free Adaptation, Culture and Passaging of Human IPS Cells using Complete KnockOut Serum Replacement Feeder-Free Medium

Питатель-Free адаптации, культуры и пассажи клеток человека IPS использованием Полное KnockOut сыворотки питатель-Free Замена среднего

Generation of Human Cardiomyocytes: A Differentiation Protocol from Feeder-free Human Induced Pluripotent Stem Cells

Поколению прав кардиомиоцитов: Дифференциация Протокол от Ф-свободной человеческой индуцированных плюрипотентных стволовых клеток

In order to investigate the events driving heart development and to determine the molecular mechanisms leading to myocardial diseases in humans, it is ...

Isolation of Small Noncoding RNAs from Human Serum

Выделение малых некодирующих РНК из сыворотки крови человека

The analysis of RNA and its expression is a common feature in many laboratories. Of significance is the emergence of small RNAs like microRNAs, which are ...

MicroRNA Expression Profiles of Human iPS Cells, Retinal Pigment Epithelium Derived From iPS, and Fetal Retinal Pigment Epithelium

Профили микроРНК выражение человеческой плюрипотентных клеток, пигментного эпителия сетчатки, полученных из IPS, и плода пигментного эпителия сетчатки

The objective of this report is to describe the protocols for comparing the microRNA (miRNA) profiles of human induced-pluripotent stem (iPS) cells, ...

Efficient iPS Cell Generation from Blood Using Episomes and HDAC Inhibitors

Эффективное плюрипотентных клеток поколения от крови Использование эписом и HDAC ингибиторов

This manuscript illustrates a protocol for efficiently creating integration-free human induced pluripotent stem cells (iPSCs) from peripheral blood using ...

Comparative Analysis of Human Growth Hormone in Serum Using SPRi, Nano-SPRi and ELISA Assays

Сравнительный анализ человеческого гормона роста в сыворотке, используя SPRI, Nano-SPRI и ELISA Анализы

Sensitive and selective methods for the detection of human growth hormone (hGH) over a wide range of concentrations (high levels of 50-100 ng ml&#8722;1 ...

In Situ Monitoring of Transiently Formed Molecular Chaperone Assemblies in Bacteria, Yeast, and Human Cells

В Ситу Мониторинг переходно сформированных молекулярных сборок чаперона в бактериях, дрожжах и клетках человека

J-domain proteins (JDPs) form the largest and the most diverse co-chaperone family in eukaryotic cells. Recent findings show that specific members of the ...