Name: dissection of oenocytes from adult drosophila melanogaster
Uploaded: 2010-07-18T17:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Dissection of Oenocytes from Adult Drosophila melanogaster at JoVE.com

Nous tenons à remercier Amsale Belay pour son aide dans le tournage de cet article vidéo. Ce travail a été financé par les IRSC, le CRSNG et les subventions à la CRC JDL.

Partie 1. Filet de préparation de l&#39;abdomen adulte chez la drosophile. La procédure décrite ci-dessous immédiate prépare l&#39;abdomen pour l&#39;élimination ultérieure de l&#39;oenocytes (voir Part2 du protocole). La même procédure peut également être utilisé pour la préparation des autres tissus attachés à la surface interne de la cuticule, y compris le vaisseau dorsal (coeur par exemple) et de graisse corporelle. Notez que dans l&#39;...

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	<li>Wielowiejski, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ueber+das+blutgewebe+der+insekten.">Ueber das blutgewebe der insekten.</a> Zeit. Wiss. Zool. 43, 512-536 .</li><li>Krupp, J. J., Kent, C., Billeter, J. C., Azanchi, R., So, A. K., Schonfeld, J. A., Smith, B. P., Lucas, C., Levine, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Social+experience+modifies+pheromone+expression+and+mating+behavior+in+male+Drosophila+melanogaster.">Social experience modifies pheromone expression and mating behavior in male Drosophila melanogaster.</a> Curr. Biol. 18, 1373-1383 (2008).</li><li>Locke, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Surface+membranes,+Golgi+complexes,+and+vacuolar+systems.">Surface membranes, Golgi complexes, and vacuolar systems.</a> Annu. Rev. Entomol. 48, 1-27 (2003).</li><li>Billeter, J. C., Atallah, J., Krupp, J. J., Millar, J. G., Levine, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Specialized+cells+tag+sexual+and+species+identity+in+Drosophila+melanogaster.">Specialized cells tag sexual and species identity in Drosophila melanogaster.</a> Nature. 461, 987-991 (2009).</li><li>Gould, A. P., Elstob, P. R., Brodu, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Insect+oenocytes:+a+model+system+for+studying+cell-fate+specification+by+Hox+genes.">Insect oenocytes: a model system for studying cell-fate specification by Hox genes.</a> J. Anat. 199, 25-33 (2001).</li><li>Lawrence, P. A., Johnston, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+lineage+of+the+Drosophila+abdomen:+the+epidermis,+oenocytes+and+ventral+muscles.">Cell lineage of the Drosophila abdomen: the epidermis, oenocytes and ventral muscles.</a> J. Embryol. Exp. Morphol. 72, 197-208 (1982).</li><li>Johnson, M. B., Butterworth, F. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Maturation+and+aging+of+adult+fat+body+and+oenocytes+in+Drosophila+as+revealed+by+light+microscopic+morphometry.">Maturation and aging of adult fat body and oenocytes in Drosophila as revealed by light microscopic morphometry.</a> J. Morphol. 184, 51-59 (1985).</li><li>Gutierrez, E., Wiggins, D., Fielding, B., Gould, A. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Specialized+hepatocyte-like+cells+regulate+Drosophila+lipid+metabolism.">Specialized hepatocyte-like cells regulate Drosophila lipid metabolism.</a> Nature. 445, 275-280 (2007).</li><li>Marcillac, F., Bousquet, F., Alabouvette, J., Savarit, F., Ferveur, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+mutation+with+major+effects+on+Drosophila+melanogaster+sex+pheromones.">A mutation with major effects on Drosophila melanogaster sex pheromones.</a> Genetics. 171, 1617-1628 (2005).</li><li>Chertemps, T., Duportets, L., Labeur, C., Ueyama, M., Wicker-Thomas, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+female-specific+desaturase+gene+responsible+for+diene+hydrocarbon+biosynthesis+and+courtship+behaviour+in+Drosophila+melanogaster.">A female-specific desaturase gene responsible for diene hydrocarbon biosynthesis and courtship behaviour in Drosophila melanogaster.</a> Insect Mol. Biol. 15, 465-473 (2006).</li><li>Legendre, A., Miao, X. X., Da Lage, J. L., Wicker-Thomas, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evolution+of+a+desaturase+involved+in+female+pheromonal+cuticular+hydrocarbon+biosynthesis+and+courtship+behavior+in+Drosophila.">Evolution of a desaturase involved in female pheromonal cuticular hydrocarbon biosynthesis and courtship behavior in Drosophila.</a> Insect. Biochem. Mol. Biol. 38, 244-255 (2008).</li><li>Shirangi, T. R., Dufour, H. D., Williams, T. M., Carroll, S. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+evolution+of+sex+pheromone-producing+enzyme+expression+in+Drosophila.">Rapid evolution of sex pheromone-producing enzyme expression in Drosophila.</a> PLoS Biol. 7, e1000168-e1000168 (2009).</li></ol>

Dans cet article nous présentons la vidéo d&#39;un protocole de dissection détaillées pour la préparation de la oenocytes de l&#39;adulte D. melanogaster d&#39;une manière appropriée pour l&#39;analyse moléculaire. Une base de texte abrégé compte de la méthode de dissection a été décrit ailleurs 2, et la préparation obtenue oenocyte a été démontré pour être appropriés pour l&#39;extraction de l&#39;ARN et la protéine 2. Utiliser cette préparation, il peut également ...

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		<div>
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		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Sylgard</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Dow Corning</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Tungsten Wire</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Ted Pella, Inc.</td>
<td>27-11</td>
<td>0.005&#x201D;/20&#x2019;</td>
</tr>
<tr>
<td>Forceps</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Dumont</td>
<td>11252-30</td>
<td>#5</td>
</tr>
<tr>
<td>Shields and Sang M3 Insect Medium</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>S3652</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>RNeasy Micro Kit</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Qiagen</td>
<td>74004</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>qScript cDNA Synthesis Kit</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Quanta Biosciences</td>
<td>95047-100</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Monoject Hypodermic Needle</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Harvard Apparatus</td>
<td>722289</td>
<td>20G1 with aluminum hub</td>
</tr>		</tbody>
		</table>
		</div>

dissection of oenocytes from adult drosophila melanogaster

Dans<em&gt; Drosophila melanogaster</em&gt;, Comme dans d&#39;autres insectes, une couche cireuse sur la surface externe de la cuticule, composée principalement de composés d&#39;hydrocarbures, offre une protection contre la dessiccation et autres défis environnementaux. Plusieurs composés de ces hydrocarbures cuticulaires (CHC) fonctionnent aussi comme des signaux sémiochimiques, et en tant que telle médiation communication phéromonale entre les membres de la même espèce, ou, dans certains cas entre les différentes espèces, et influencer les comportements. Des cellules spécialisées appelées oenocytes sont considérés comme le principal site de synthèse du CCH. Cependant, on sait relativement peu sur l&#39;implication de l&#39;oenocytes dans la régulation de l&#39;biosynthèse, le transport, et les voies de dépôt de contribuer à la sortie du CCH. Étant donné le rôle significatif que jouent les CSC dans plusieurs aspects de la biologie des insectes, y compris la communication chimique, la résistance dessiccation, et l&#39;immunité, il est important d&#39;acquérir une meilleure compréhension de la régulation moléculaire et génétique de la production du CCH au sein de ces cellules spécialisées. Le oenocytes adulte<em&gt; D. melanogaster</em&gt; Sont situés dans le tégument abdominal, et sont disposés en metamerically ruban comme les grappes de rayonnement le long de la surface intérieure de la cuticule chaque segment abdominal. Dans cet article, vidéo, nous démontrer une technique de dissection utilisé pour la préparation de oenocytes de l&#39;adulte<em&gt; D. melanogaster</em&gt;. Plus précisément, nous fournissons une analyse détaillée étape par étape, la démonstration de (1) comment préparer les filets d&#39;un adulte<em&gt; Drosophile</em&gt; Abdomen, (2) comment identifier les oenocytes et les distinguer des autres tissus, et (3) comment faire pour supprimer les grappes intactes oenocyte du tégument abdominal. Une brève illustration expérimentale de la façon dont cette préparation peut être utilisée pour examiner l&#39;expression de gènes impliqués dans la synthèse d&#39;hydrocarbures est inclus. La préparation disséqué démontrée ici permettra l&#39;analyse détaillée moléculaires et génétiques de la fonction oenocyte chez la drosophile adulte.

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Dissection of Oenocytes from Adult Drosophila melanogaster

Chez les insectes, les oenocytes produire des composés d&#39;hydrocarbures cuticulaires. Ces composés se protéger contre le dessèchement et faciliter la communication chimique. Ici nous démontrons une technique de dissection utilisée pour isoler les oenocytes de l&#39;adulte<em&gt; Drosophila melanogaster</em&gt;, Et d&#39;illustrer comment cette préparation peut être utilisée pour étudier les gènes impliqués dans la synthèse d&#39;hydrocarbures.

Dissection de Oenocytes d&#39;adultes Drosophila melanogaster</em

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