Name: antigen specific in vivo killing assay using cfse labeled target cells
Uploaded: 2010-11-09T17:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Antigen Specific In Vivo Killing Assay using CFSE Labeled Target Cells at JoVE.com

وأود أن أشكر بيانكا MOTHE ، Oseroff كارلا ، وDelGuercio ماري فرنسا على عرضه لي أن المقايسات المناعية والتعامل مع الفأرة. ويتم تمويل عمل في مختبر الفاصل GA بواسطة منحة المعاهد الوطنية للصحة 1 - RO1 - AI - 073558 ، GLRCE منح U54 - 1 - AI - 057153 ، وبين الولايات المتحدة وBARD 3829-06.

1. انتزاع محددة الهدف CTLs المستجيب عن طريق التحصين (يوم 0) <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قبل البدء ، أن يقرر بناء على المستجيب معينة : النظام الهدف. في هذا المثال من الكلاسيكية في مقايسة CTL الحية ، وسوف نستخدم التحصين الببتيد المنقى لانتزاع م?...

<ol>
	<li>Blattman, J. N., Wherry, E. J., Ha, S. J., van der Most, R. G., Ahmed, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Impact+of+epitope+escape+on+PD-1+expression+and+CD8+T-cell+exhaustion+during+chronic+infection.">Impact of epitope escape on PD-1 expression and CD8 T-cell exhaustion during chronic infection.</a> J Virol. 83 (9), 4386-4394 (2009).</li><li>Jenkins, M. R., Tsun, A., Stinchcombe, J. C., Griffiths, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+strength+of+T+cell+receptor+signal+controls+the+polarization+of+cytotoxic+machinery+to+the+immunological+synapse.">The strength of T cell receptor signal controls the polarization of cytotoxic machinery to the immunological synapse.</a> Immunity. 31 (4), 621-631 (2009).</li><li>Ingulli, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tracing+tolerance+and+immunity+in+vivo+by+CFSE-labeling+of+administered+cells.">Tracing tolerance and immunity in vivo by CFSE-labeling of administered cells.</a> Methods Mol Biol. 380, 365-376 (2007).</li><li>Durward, M. A., Harms, J., Magnani, D. M., Eskra, L., Splitter, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Discordant+Brucella+melitensis+antigens+yield+cognate+CD8++T+cells+in+vivo.">Discordant Brucella melitensis antigens yield cognate CD8+ T cells in vivo.</a> Infect Immun. 78 (1), 168-176 (2010).</li><li>Lyons, A. B., Parish, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Determination+of+lymphocyte+division+by+flow+cytometry.">Determination of lymphocyte division by flow cytometry.</a> J Immunol Methods. 171 (1), 131-137 (1994).</li><li>Weston, S. A., Parish, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=New+fluorescent+dyes+for+lymphocyte+migration+studies.+Analysis+by+flow+cytometry+and+fluorescence+microscopy.">New fluorescent dyes for lymphocyte migration studies. Analysis by flow cytometry and fluorescence microscopy.</a> J Immunol Methods. 133 (1), 87-97 (1990).</li><li>Akondy, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+yellow+fever+virus+vaccine+induces+a+broad+and+polyfunctional+human+memory+CD8++T+cell+response.">The yellow fever virus vaccine induces a broad and polyfunctional human memory CD8+ T cell response.</a> J Immunol. 183 (12), 7919-7930 (2009).</li><li>Wallace, P. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tracking+antigen-driven+responses+by+flow+cytometry:+monitoring+proliferation+by+dye+dilution.">Tracking antigen-driven responses by flow cytometry: monitoring proliferation by dye dilution.</a> Cytometry A. 73 (11), 1019-1034 (2008).</li><li>Labadi, A., Balogh, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+preferences+in+serosal+homing+and+distribution+of+peritoneal+B-cell+subsets+revealed+by+in+situ+CFSE+labeling.">Differential preferences in serosal homing and distribution of peritoneal B-cell subsets revealed by in situ CFSE labeling.</a> Int Immunol. 21 (9), 1047-1056 (2009).</li><li>Suffner, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dendritic+cells+support+homeostatic+expansion+of+Foxp3++regulatory+T+cells+in+Foxp3.LuciDTR+mice.">Dendritic cells support homeostatic expansion of Foxp3+ regulatory T cells in Foxp3.LuciDTR mice.</a> J Immunol. 184 (4), 1810-1820 .</li></ol>

يمكن تعديل هذا الاختبار للتحقق من قدرة التكاثري من الخلايا ، بما في ذلك التوسع نسيلي ، لأن يقسم بالتساوي CFSE نسبيا بين 10،11 ذرية. ومن الممكن أيضا استخدام العلامات CFSE الهجرة للتحقيق في الخلية 6،12 ، وإن كانت هناك خلية أخرى تتبع الأساليب التي قد تكون أكثر ملائم?...

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>1 mm glass beads</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Biospec Products</td>
<td>11079110</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>70 &mu;m cell strainer</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>BD Falcon</td>
<td>352350</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>96-well plate</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Costar</td>
<td>3799</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Adjulite Incomplete Freund's Adjuvant</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Pacific Immunology</td>
<td>n/a</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>DMSO</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>D-5879</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>FBS</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>GIBCO</td>
<td>16000-077</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>FC 500 Flow Cytometer</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Beckman Coulter</td>
<td>n/a</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Kontes glass tissue grinder</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Kontes</td>
<td>885300-0015</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Mini Beadbeater</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Biospec Products</td>
<td>n/a</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Needle</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>B-D</td>
<td>305175</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Parafilm "M"</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Pechiney Plastic Packaging</td>
<td>PM992</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Paraformaldehyde</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Electron Microscopy Sciences</td>
<td>157-8</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>PBS</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>GIBCO</td>
<td>10010-023</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>PharmLyse lysing reagent</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>BD Biosciences</td>
<td>555899</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>RPMI 1640</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>GIBCO</td>
<td>11875-093</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Syringe</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>B-D</td>
<td>309602</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Vybrant CFSE Kit</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen (Molecular Probes)</td>
<td>V12883</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

antigen specific in vivo killing assay using cfse labeled target cells

ويمكن استخدام Carboxyfluorescein ثنائي الأسيتات succinimidyl استر (CFSE) بسهولة وبسرعة تسمية السكان الخلية التي تهم التحقيق في الجسم الحي. وتقليديا كانت هذه العلامات تستخدم لدراسة انتشار الأسلحة النووية والهجرة. في أسلوب المعروضة هنا ، ونحن تقصير الفترة الزمنية بعد نقل بالتبني للنظر في البقاء على قيد الحياة وقتل الخلايا حاتمة CFSE محددة الهدف المسمى 4-6. يمكن لمستوى معين من قتل استنساخ الخلية CD8 + T تشير إلى نوعية الاستجابة ، وكميتها قد يكون مضللا. محددة CD8 + الخلايا التائية يمكن أن تصبح مع مرور الوقت استنفدت وظيفيا مع انخفاض في الانتاج خلوى وقتل 7،8. أيضا ، قد بعض الخلايا التائية CD8 + لا تقتل الحيوانات المستنسخة فضلا عن غيرهم مع اختلاف الخصائص TCR 9. لفعالية الخلية الحصانة ساطة (CMI) ، يجب تحديد المستضدات التي تنتج ليس فقط أعدادا كافية للاستجابة خلايا تي ، ولكن أيضا قوية وظيفيا خلايا تي الاستجابة. هنا نقيم قتل خلايا محددة في المئة من اثنين من الببتيد محددة استنساخ خلايا تي في BALB / ج الفئران.

Watch this Scientific Journal Video about Antigen Specific In Vivo Killing Assay using CFSE Labeled Target Cells at JoVE.com

Antigen Specific In Vivo Killing Assay using CFSE Labeled Target Cells

العديد من الإصابات استثارة رد فعل قوي CTL ، ولكن في بعض الأحيان ، وكمية من الخلايا لا ترتبط الاستجابة لمكافحة مسببات المرض<sup&gt; 1</sup&gt;. مقياس واحد للجودة CTL هي قدرتها على قتل تحديدا<sup&gt; 2</sup&gt;. ويمكن استخدام العلامات CFSE من الخلايا المستهدفة للتحقيق في هذه النوعية ردا CTL<em&gt; في الجسم الحي</em<sup&gt; 3،4</sup&gt;.

مستضد محددة في فيفو الفحص باستخدام خلايا القتل المستهدف CFSE إعتبر

Carboxyfluorescein diacetate succinimidyl ester (CFSE) can be used to easily and quickly label a cell population of interest for in vivo investigation.  ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Antigen Specific In Vivo Killing Assay using CFSE Labeled Target Cells

HLA-Ig Based Artificial Antigen Presenting Cells for Efficient ex vivo Expansion of Human CTL

HLA-Ig Based Artificial Antigen Presenting Cells for Efficient ex vivo Expansion of Human CTL

HLA - الإيج بناء خلايا مولدة الاصطناعي تقديم الكفء لل خارج الحي توسيع CTL الإنسان

CTL with optimal effector function play critical roles in mediating protection against various intracellular infections and cancer. However, individuals ...

Introducing Shear Stress in the Study of Bacterial Adhesion

إدخال إجهاد القص في دراسة الالتصاق الجرثومي

During bacterial infections a sequence of interactions occur between the pathogen and its host. Bacterial adhesion to the host cell surface is often the ...

Trans-vivo Delayed Type Hypersensitivity Assay for Antigen Specific Regulation

عبر الجسم الحي فرط الحساسية النوع المتأخر الفحص ل Antigen تنظيم محدد

Delayed-type hypersensitivity response (DTH) is a rapid in vivo manifestation of T cell-dependent immune response to a foreign antigen (Ag) that the host ...

Killer Artificial Antigen Presenting Cells (KaAPC) for Efficient In Vitro Depletion of Human Antigen-specific T Cells

Killer Artificial Antigen Presenting Cells KaAPC for Efficient In Vitro Depletion of Human Antigen-specific T Cells

القاتل مستضد تقديم الخلايا الاصطناعي (KaAPC) للكفاءة<em&gt; في المختبر</em&gt; استنفاد خلايا T الإنسان مستضد محددة

Current treatment of T cell mediated autoimmune diseases relies mostly on strategies of global immunosuppression, which, in the long term, is accompanied ...

Development of Stem Cell-derived Antigen-specific Regulatory T Cells Against Autoimmunity

تطوير المستمدة الخلية الجذعية خلايا T التنظيمية مستضد محددة ضد المناعة الذاتية

Autoimmune diseases arise due to the loss of immunological self-tolerance. Regulatory T cells (Tregs) are important mediators of immunologic ...

Detection and Enrichment of Rare Antigen-specific B Cells for Analysis of Phenotype and Function

كشف وإثراء نادر محددة مستضد الخلايا B لتحليل النمط الظاهري وظيفة

B cells reactive with a specific antigen usually occur at a frequency of &lt;0.05% of lymphocytes. For decades researchers have sought methods to isolate ...

In Vivo Assay for Detection of Antigen-specific T-cell Cytolytic Function Using a Vaccination Model

In Vivo Assay for Detection of Antigen-specific T-cell Cytolytic Function Using a Vaccination Model

في فيفو الفحص للكشف عن وظيفة محددة مستضد تي خلية عن استخدام نموذج التطعيم

Current methodologies for antigen-specific killing are limited to in vitro use or utilized in infectious disease models. However, there is not a protocol ...

Generation of Discriminative Human Monoclonal Antibodies from Rare Antigen-specific B Cells Circulating in Blood

جيل من التمييزية مونوكلونل البشرية من خلايا نادرة محددة مستضد ب المتداولة في الدم

Monoclonal antibodies (mAbs) are powerful tools useful for both fundamental research and in biomedicine. Their high specificity is indispensable when the ...

A Protein Microarray Assay for Serological Determination of Antigen-specific Antibody Responses Following Clostridium difficile Infection

A Protein Microarray Assay for Serological Determination of Antigen-specific Antibody Responses Following Clostridium difficile Infection

مقايسة ميكرواري البروتين "تحديد المصلية" محددة مستضد "الضد الردود التالية" المطثيّة العسيرة الإصابة

We provide a detailed overview of a novel high-throughput protein microarray assay for the determination of anti-Clostridium difficile antibody levels in ...

Opsonophagocytic Killing Assay to Assess Immunological Responses Against Bacterial Pathogens

أوبسونوفاجوسيتيك قتل المقايسة لتقييم الاستجابات المناعية ضد مسببات الأمراض البكتيرية

A key aspect of the immune response to bacterial colonization of the host is phagocytosis. An opsonophagocytic killing assay (OPKA) is an experimental ...