Name: antigen specific in vivo killing assay using cfse labeled target cells
Uploaded: 2010-11-09T17:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Antigen Specific In Vivo Killing Assay using CFSE Labeled Target Cells at JoVE.com

אני רוצה להודות ביאנקה Mothé, קרלה Oseroff, ומארי צרפת DelGuercio מציגה לי מבחני החיסוני וטיפול העכבר. העבודה במעבדה של ספליטר GA ממומנת על ידי מענק 1-NIH RO1-AI-073558, GLRCE מענק 1-U54-AI-057153, ובארד ארה&quot;ב 3829-06.

1. לעורר יעד ספציפיות ההרג מפעיל על ידי חיסון (יום 0) <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לפני שמתחילים, להחליט על מבצע ספציפי: מערכת היעד. בדוגמה זו של קלאסית assay CTL vivo, נשתמש חיסון פפטיד מטוהרים לעורר ספציפי CD8 + T לתאים. הפפטיד זהה ישמש הדופק התאים ...

<ol>
	<li>Blattman, J. N., Wherry, E. J., Ha, S. J., van der Most, R. G., Ahmed, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Impact+of+epitope+escape+on+PD-1+expression+and+CD8+T-cell+exhaustion+during+chronic+infection.">Impact of epitope escape on PD-1 expression and CD8 T-cell exhaustion during chronic infection.</a> J Virol. 83 (9), 4386-4394 (2009).</li><li>Jenkins, M. R., Tsun, A., Stinchcombe, J. C., Griffiths, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+strength+of+T+cell+receptor+signal+controls+the+polarization+of+cytotoxic+machinery+to+the+immunological+synapse.">The strength of T cell receptor signal controls the polarization of cytotoxic machinery to the immunological synapse.</a> Immunity. 31 (4), 621-631 (2009).</li><li>Ingulli, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tracing+tolerance+and+immunity+in+vivo+by+CFSE-labeling+of+administered+cells.">Tracing tolerance and immunity in vivo by CFSE-labeling of administered cells.</a> Methods Mol Biol. 380, 365-376 (2007).</li><li>Durward, M. A., Harms, J., Magnani, D. M., Eskra, L., Splitter, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Discordant+Brucella+melitensis+antigens+yield+cognate+CD8++T+cells+in+vivo.">Discordant Brucella melitensis antigens yield cognate CD8+ T cells in vivo.</a> Infect Immun. 78 (1), 168-176 (2010).</li><li>Lyons, A. B., Parish, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Determination+of+lymphocyte+division+by+flow+cytometry.">Determination of lymphocyte division by flow cytometry.</a> J Immunol Methods. 171 (1), 131-137 (1994).</li><li>Weston, S. A., Parish, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=New+fluorescent+dyes+for+lymphocyte+migration+studies.+Analysis+by+flow+cytometry+and+fluorescence+microscopy.">New fluorescent dyes for lymphocyte migration studies. Analysis by flow cytometry and fluorescence microscopy.</a> J Immunol Methods. 133 (1), 87-97 (1990).</li><li>Akondy, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+yellow+fever+virus+vaccine+induces+a+broad+and+polyfunctional+human+memory+CD8++T+cell+response.">The yellow fever virus vaccine induces a broad and polyfunctional human memory CD8+ T cell response.</a> J Immunol. 183 (12), 7919-7930 (2009).</li><li>Wallace, P. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tracking+antigen-driven+responses+by+flow+cytometry:+monitoring+proliferation+by+dye+dilution.">Tracking antigen-driven responses by flow cytometry: monitoring proliferation by dye dilution.</a> Cytometry A. 73 (11), 1019-1034 (2008).</li><li>Labadi, A., Balogh, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+preferences+in+serosal+homing+and+distribution+of+peritoneal+B-cell+subsets+revealed+by+in+situ+CFSE+labeling.">Differential preferences in serosal homing and distribution of peritoneal B-cell subsets revealed by in situ CFSE labeling.</a> Int Immunol. 21 (9), 1047-1056 (2009).</li><li>Suffner, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dendritic+cells+support+homeostatic+expansion+of+Foxp3++regulatory+T+cells+in+Foxp3.LuciDTR+mice.">Dendritic cells support homeostatic expansion of Foxp3+ regulatory T cells in Foxp3.LuciDTR mice.</a> J Immunol. 184 (4), 1810-1820 .</li></ol>

Assay זה יכול להיות שונה כדי לחקור את יכולת שגשוג של תאים, כולל הרחבת המשובטים, כי CFSE מתחלק יחסית שווה בשווה בין הצאצאים 10,11. אפשר גם להשתמש תיוג CFSE לחקור נדידת תאים 6,12, אם כי ישנם תאים אחרים התחקות השיטות עשוי להיות מתאים יותר בהתאם להשערה שלך, tetramers דוגמה פליט...

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>1 mm glass beads</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Biospec Products</td>
<td>11079110</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>70 &mu;m cell strainer</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>BD Falcon</td>
<td>352350</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>96-well plate</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Costar</td>
<td>3799</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Adjulite Incomplete Freund's Adjuvant</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Pacific Immunology</td>
<td>n/a</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>DMSO</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>D-5879</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>FBS</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>GIBCO</td>
<td>16000-077</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>FC 500 Flow Cytometer</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Beckman Coulter</td>
<td>n/a</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Kontes glass tissue grinder</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Kontes</td>
<td>885300-0015</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Mini Beadbeater</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Biospec Products</td>
<td>n/a</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Needle</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>B-D</td>
<td>305175</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Parafilm "M"</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Pechiney Plastic Packaging</td>
<td>PM992</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Paraformaldehyde</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Electron Microscopy Sciences</td>
<td>157-8</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>PBS</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>GIBCO</td>
<td>10010-023</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>PharmLyse lysing reagent</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>BD Biosciences</td>
<td>555899</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>RPMI 1640</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>GIBCO</td>
<td>11875-093</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Syringe</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>B-D</td>
<td>309602</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Vybrant CFSE Kit</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen (Molecular Probes)</td>
<td>V12883</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

antigen specific in vivo killing assay using cfse labeled target cells

Carboxyfluorescein diacetate succinimidyl אסתר (CFSE) יכול לשמש בקלות ובמהירות תווית האוכלוסייה תא עניין של בחקירה vivo. תיוג זה קלאסי שימשו במחקר התפשטות והגירה. בשיטה המוצגת כאן, יש לנו לקצר את ציר הזמן לאחר העברת המאמצת להסתכל הישרדות הרג epitope ספציפי שכותרתו CFSE תאים היעד 4-6. רמת הרג ספציפי של שיבוט CD8 + T תא יכולה להעיד על איכות התגובה, כמו הכמות שלהם עלולה להטעות. ספציפיות CD8 + T תאים יכול להיות מותש מבחינה תפקודית לאורך זמן עם ירידה ייצור ציטוקינים והרג 7,8. כמו כן, בטוח CD8 + T שיבוטים תא לא יכול להרוג, כמו גם עם אחרים שונים ספציפיות TCR 9. לקבלת חסינות מתווכת יעיל תא (CMI), אנטיגנים חייב להיות מזוהה המייצרים לא רק מספרים נאותה להגיב בתאי T, אלא גם חזקים מבחינה פונקציונלית ותאי T להגיב. כאן אנו בוחנים את התא אחוז הרג ספציפי של שני פפטיד ספציפי שיבוטים תא T ב BALB / c עכברים.

Watch this Scientific Journal Video about Antigen Specific In Vivo Killing Assay using CFSE Labeled Target Cells at JoVE.com

Antigen Specific In Vivo Killing Assay using CFSE Labeled Target Cells

זיהומים רבים לתגובה CTL חזק, אבל מדי פעם, כמות התאים להגיב אינו תואם לשליטה של ​​הפתוגן<sup&gt; 1</sup&gt;. אחד המדדים לבחינת איכות CTL הוא היכולת שלהם להרוג במיוחד<sup&gt; 2</sup&gt;. תיוג CFSE של תאים היעד יכול לשמש כדי לחקור את איכות התגובה CTL<em&gt; In vivo</em<sup&gt; 3,4</sup&gt;.

אנטיגן ספציפי In vivo להרוג Assay באמצעות תווית CFSE תאים היעד

Carboxyfluorescein diacetate succinimidyl ester (CFSE) can be used to easily and quickly label a cell population of interest for in vivo investigation.  ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Antigen Specific In Vivo Killing Assay using CFSE Labeled Target Cells

HLA-Ig Based Artificial Antigen Presenting Cells for Efficient ex vivo Expansion of Human CTL

HLA-Ig Based Artificial Antigen Presenting Cells for Efficient ex vivo Expansion of Human CTL

HLA-איג בהתבסס Antigen תאים מלאכותיים הצגת עבור יעיל לשעבר vivo הרחבת CTL האדם

CTL with optimal effector function play critical roles in mediating protection against various intracellular infections and cancer. However, individuals ...

Introducing Shear Stress in the Study of Bacterial Adhesion

היכרות עם מתח שאר בחקר הדבקה חיידקית

During bacterial infections a sequence of interactions occur between the pathogen and its host. Bacterial adhesion to the host cell surface is often the ...

Trans-vivo Delayed Type Hypersensitivity Assay for Antigen Specific Regulation

Assay רגישות יתר מושהה סוג חוצה vivo להסדרת אנטיגן ספציפי

Delayed-type hypersensitivity response (DTH) is a rapid in vivo manifestation of T cell-dependent immune response to a foreign antigen (Ag) that the host ...

Killer Artificial Antigen Presenting Cells (KaAPC) for Efficient In Vitro Depletion of Human Antigen-specific T Cells

Killer Artificial Antigen Presenting Cells KaAPC for Efficient In Vitro Depletion of Human Antigen-specific T Cells

תאי מציגי הרוצח המלאכותי Antigen (KaAPC) ליעיל<em&gt; במבחנה</em&gt; דלדול של תאי T אנושי אנטיגן ספציפי

Current treatment of T cell mediated autoimmune diseases relies mostly on strategies of global immunosuppression, which, in the long term, is accompanied ...

Development of Stem Cell-derived Antigen-specific Regulatory T Cells Against Autoimmunity

פיתוח תאי גזע שמקורם אנטיגן ספציפי תקינים בתאי T נגד אוטואימוניות

Autoimmune diseases arise due to the loss of immunological self-tolerance. Regulatory T cells (Tregs) are important mediators of immunologic ...

Detection and Enrichment of Rare Antigen-specific B Cells for Analysis of Phenotype and Function

איתור והעשרה של נדיר- אנטיגן ספציפי בתאי B עבור ניתוח של הפנוטיפ ותפקוד

B cells reactive with a specific antigen usually occur at a frequency of &lt;0.05% of lymphocytes. For decades researchers have sought methods to isolate ...

In Vivo Assay for Detection of Antigen-specific T-cell Cytolytic Function Using a Vaccination Model

In Vivo Assay for Detection of Antigen-specific T-cell Cytolytic Function Using a Vaccination Model

אין ויוו Assay גילוי של הפונקציה Cytolytic תא T אנטיגן ספציפי באמצעות מודל החיסון

Current methodologies for antigen-specific killing are limited to in vitro use or utilized in infectious disease models. However, there is not a protocol ...

Generation of Discriminative Human Monoclonal Antibodies from Rare Antigen-specific B Cells Circulating in Blood

דור שמסווגת נוגדנים חד-שבטיים אנושי מתאי B אנטיגן ספציפי נדיר במחזור הדם

Monoclonal antibodies (mAbs) are powerful tools useful for both fundamental research and in biomedicine. Their high specificity is indispensable when the ...

A Protein Microarray Assay for Serological Determination of Antigen-specific Antibody Responses Following Clostridium difficile Infection

A Protein Microarray Assay for Serological Determination of Antigen-specific Antibody Responses Following Clostridium difficile Infection

שיטת Microarray לקביעת סרולוגית לזיהום Clostridium difficile נוגדן התגובות הבאות אנטיגן ספציפי

We provide a detailed overview of a novel high-throughput protein microarray assay for the determination of anti-Clostridium difficile antibody levels in ...

Opsonophagocytic Killing Assay to Assess Immunological Responses Against Bacterial Pathogens

Opsonophagocytic הריגה הנועד להעריך תגובות אימונולוגי נגד פתוגנים חיידקיים

A key aspect of the immune response to bacterial colonization of the host is phagocytosis. An opsonophagocytic killing assay (OPKA) is an experimental ...