Name: preparation of neuronal cultures from midgastrula stage drosophila embryos
Uploaded: 2007-07-04T00:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Preparation of Neuronal Cultures from Midgastrula Stage Drosophila Embryos at JoVE.com

Dit werk werd ondersteund door NIH subsidie ​​NS27501 naar DKOD. Extra ondersteuning voor dit werk vanuit een HHMI professor Grant naar DKOD.

I. Drosophila embryo <ol><li> Bereid ei collectie platen <ol><li> Kook 200 ml dH 2 O met 8 g agar </li><li> Afkoelen tot 50 ° C </li><li> Voeg 2 ml EtOH en 2 ml azijnzuur </li><li> Giet het mengsel in 35 mm plastic petrischaaltjes, tops </li><li> Cool en op te slaan in luchtdichte container bij 4 ° C </li><li> Maakt ongeveer 80 platen </li></ol></li><li> Bereid Gist plakken <ol><li> Los Fleishmans bakkersgist in water om vorm te plakken </li><li> Magnetron gedurende 20-30 seconden om gist te doden (pas op ...

<ol>
	<li>Rohrbough, J., O'Dowd, D. K., Baines, R. A., Broadie, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cellular+bases+of+behavioral+plasticity:+Establishing+and+modifying+synaptic+circuits+in+the+Drosophila+Genetic+System.">Cellular bases of behavioral plasticity: Establishing and modifying synaptic circuits in the Drosophila Genetic System.</a> J. Neurobiol. 54, 254-271 (2003).</li><li>O'Dowd, D. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Voltage-gated+currents+and+firing+properties+of+embryonic+Drosophila+neurons+grown+in+a+chemically+defined+medium.">Voltage-gated currents and firing properties of embryonic Drosophila neurons grown in a chemically defined medium.</a> J. Neurobiol. 27, 113-126 (1995).</li><li>Lee, D., O'Dowd, D. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fast+excitatory+synaptic+transmission+mediated+by+nAChR+in+cultured+Drosophila+neurons.">Fast excitatory synaptic transmission mediated by nAChR in cultured Drosophila neurons.</a> J. Neurosci. 19, 5311-5321 (1999).</li><li>Lee, D., O'Dowd, D. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cyclic-AMP-dependent+plasticity+at+excitatory+cholinergic+synapses+in+Drosophila+neurons:+Alterations+in+the+memory+mutant+dunce.">Cyclic-AMP-dependent plasticity at excitatory cholinergic synapses in Drosophila neurons: Alterations in the memory mutant dunce.</a> J. Neurosci. 20, 2104-2111 (2000).</li><li>Hodges, D. D., Lee, D., Boswell, K., Preston, C. F., Hall, L. M., O'Dowd, D. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=tipE+regulates+sodium-dependent+repetitive+firing+in+Drosophila+neurons.">tipE regulates sodium-dependent repetitive firing in Drosophila neurons.</a> Mol. Cell Neurosci. 19, 402-416 (2002).</li><li>Lee, D., Su, H., Dowd, O., K, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=GABA+receptors+containing+Rdl+subunits+mediate+fast+inhibitory+synaptic+transmission+in+Drosophila+neurons.">GABA receptors containing Rdl subunits mediate fast inhibitory synaptic transmission in Drosophila neurons.</a> J. Neurosci. 23, 4625-4634 (2003).</li></ol>

In Drosophila culturen bereid uit midgastrula stadium embryo&#39;s van de neuronen ontstaan ​​uit neuroblast voorlopers, waarvan vele delen voorafgaand aan de differentiatie in vitro. Dit systeem biedt dus een unieke gelegenheid voor de exploratie van genetische en omgevingsfactoren belangrijk in een zeer vroege fase van neuronale ontwikkeling (Rohrbaugh et al.., 2003). We hebben aangetoond dat neuronen gekweekt in een eenvoudige beschreven medium differentiëren in elektrisch prikkelbare neuronen die vormen ook functionele synaptische ...

De culturen die in deze media moeten worden gehandhaafd in een 5% CO2 incubator op ongeveer 22-24 ° C. We maken gebruik van een standaard zoogdieren weefselkweek incubator geplaatst in een koude kamer en verwarmd tot 23 ° C. Altijd gebruikt geautoclaveerd gefilterd water en maken in containers die zijn voorbehouden voor de media en supplementen alleen. Zet nooit een pH-meter of een roerstaafje gebruikt voor andere doeleinden in de media.

preparation of neuronal cultures from midgastrula stage drosophila embryos

Deze video illustreert de procedure voor het maken van de primaire neuronale culturen uit midgastrula podium Drosophila embryo&#39;s. De methoden voor het verzamelen van embryo&#39;s en hun dechorionation met behulp van bleekwater worden gedemonstreerd. Met behulp van een glazen pipet aan een mond zuigbuis, illustreren we de verwijdering van alle cellen van een embryo&#39;s. De methode voor het dispergeren van cellen uit elk embyro in een kleine (5 l) druppel medium op een ongecoat glas dekglaasje is aangetoond. Een blik door de microscoop op 1 uur na plating illustreert de voorkeur celdichtheid. Het merendeel van de cellen die overleven wanneer ze groeien in beschreven medium zijn neuroblasts dat een of meer keer in de cultuur te verdelen voor de uitbreiding neuritische processen 12-24 uur. Een blik door de microscoop illustreert het niveau van de neurietuitgroei en vertakking naar verwachting in een gezonde cultuur in 2 dagen in vitro. De cultures worden gekweekt in een eenvoudige bicarbonaat op basis van beschreven medium, in een 5% CO 2 incubator bij 22-24 ° C. Neuritische processen verder uit te werken over de eerste week in de cultuur en wanneer ze contact maken met de neurieten van naburige cellen die ze vormen vaak functionele synaptische verbindingen. Neuronen in deze culturen te uiten voltage-gated natrium, calcium en kalium kanalen en worden elektrisch opgewonden. Deze cultuur systeem is nuttig voor het bestuderen van moleculaire genetische en omgevingsfactoren die neuronale differentiatie, prikkelbaarheid, en synapsvorming / functie te reguleren.

Watch this Scientific Journal Video about Preparation of Neuronal Cultures from Midgastrula Stage Drosophila Embryos at JoVE.com

Preparation of Neuronal Cultures from Midgastrula Stage Drosophila Embryos

Deze video toont de bereiding van primaire neuronale culturen uit midgastrula podium Drosophila embryo&#39;s. Standpunten van levende culturen tonen cellen 1 uur na de beplating en gedifferentieerde neuronen na 2 dagen van groei in een bicarbonaat-based gedefinieerd medium. De neuronen zijn elektrisch prikkelbaar en vormen synaptische verbindingen.

De voorbereiding van Neuronale Culturen van Midgastrula Stage Drosophila embryo&#39;s

This video illustrates the procedure for making primary neuronal cultures from midgastrula stage Drosophila embryos. The methods for collecting embryos ...

Research

JoVE Journal

Biology

Primary Neuronal Cultures from the Brains of Late Stage Drosophila Pupae

Primaire neuronale culturen uit de hersenen van laat stadium Drosophila Poppen

In this video, we demonstrate the preparation of primary neuronal cultures from the brains of late stage Drosophila pupae. The procedure begins with the ...

Placing Growth Factor-Coated Beads on Early Stage Chicken Embryos

Het plaatsen van Growth Factor-Coated Kralen op Early Stage kippenembryo&#39;s

The neural tube expresses many proteins in specific spatiotemporal patterns during development.   These proteins have been shown to be critical for cell ...

In Ovo Electroporations of HH Stage 10 Chicken Embryos

In Ovo Electroporations van HH Stage 10 kippenembryo&#39;s

Large size and external development of the chicken embryo have long made it a valuable tool in the study of developmental biology.  With the advent of ...

Neuronal Cell Cultures from Aplysia for High-Resolution Imaging of Growth Cones

Neuronale celkweken van Aplysia voor High-Resolution Imaging van Groei Cones

Neuronal growth cones are the highly motile structures at the tip of axons that can detect guidance cues in the environment and transduce this information ...

The Preparation of Drosophila Embryos for Live-Imaging Using the Hanging Drop Protocol

The Preparation of Drosophila Embryos for Live-Imaging Using the Hanging Drop Protocol

De voorbereiding van Drosophila Embryo&#39;s voor Live-Imaging Met behulp van de Opknoping Drop Protocol

Green fluorescent protein (GFP)-based timelapse live-imaging is a powerful technique for studying the genetic regulation of dynamic processes such as ...

Preparation of Aplysia Sensory-motor Neuronal Cell Cultures

Preparation of Aplysia Sensory-motor Neuronal Cell Cultures

De voorbereiding van Aplysia Sensory-motor Neuronale Cell Cultures

The nervous system of the marine mollusk Aplysia californica is relatively simple, consisting of approximately 20,000 neurons.  The neurons are large (up ...

Preparation of embryos for Electron Microscopy of the Drosophila embryonic heart tube

Preparation of embryos for Electron Microscopy of the Drosophila embryonic heart tube

De voorbereiding van embryo&#39;s voor Elektronenmicroscopie van de Drosophila Embryonale hart buis

The morphogenesis of the Drosophila  embryonic heart tube has emerged as a valuable model system for studying cell migration, cell-cell adhesion and cell ...

In-vivo Centrifugation of Drosophila Embryos

In-vivo Centrifugation of Drosophila Embryos

In-vivo Centrifugeren van Drosophila embryo&#39;s

A major strategy for purifying and isolating different types of intracellular organelles is to separate them from each other based on differences in ...

Upright Imaging of Drosophila Embryos

Upright Imaging of Drosophila Embryos

Rechtop beeldvorming van Drosophila Embryo&#39;s

Several well-known morphogenetic gradients and cellular movements occur along the dorsal/ventral axis of the Drosophila embryo. However, the current ...

Primary Cell Cultures from Drosophila Gastrula Embryos

Primary Cell Cultures from Drosophila Gastrula Embryos

Primaire celculturen van Drosophila Gastrula Embryo&#39;s

Here we describe a method for preparing and culturing primary cells dissociated from Drosophila gastrula embryos.   In brief, a large amount of staged ...