Name: preparation of neuronal cultures from midgastrula stage drosophila embryos
Uploaded: 2007-07-04T00:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Preparation of Neuronal Cultures from Midgastrula Stage Drosophila Embryos at JoVE.com

Diese Arbeit wurde vom NIH NS27501 zu DKOD unterstützt. Zusätzliche Unterstützung für diese Arbeiten von einem HHMI Professor Grant zu DKOD.

I. Drosophila Embryo-Entnahme <ol><li> Bereiten Eiersammlung Platten <ol><li> Kochen 200 ml dH 2 O mit 8 g Agar </li><li> Abkühlen auf 50 ° C </li><li> 2 ml EtOH und 2 ml Essigsäure </li><li> Gießen Sie in 35 mm Kunststoff-Petrischalen, Tops </li><li> Cool und speichern in luftdichten Behälter bei 4 ° C </li><li> Ergibt ca. 80 Teller </li></ol></li><li> Bereiten Hefepaste <ol><li> Lösen Sie Fleishmans aktive Backhefe in Wasser zu fügen </li><li> Mikrowelle für 20-30 Sekunden, um Hefe zu töten (acht...

<ol>
	<li>Rohrbough, J., O'Dowd, D. K., Baines, R. A., Broadie, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cellular+bases+of+behavioral+plasticity:+Establishing+and+modifying+synaptic+circuits+in+the+Drosophila+Genetic+System.">Cellular bases of behavioral plasticity: Establishing and modifying synaptic circuits in the Drosophila Genetic System.</a> J. Neurobiol. 54, 254-271 (2003).</li><li>O'Dowd, D. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Voltage-gated+currents+and+firing+properties+of+embryonic+Drosophila+neurons+grown+in+a+chemically+defined+medium.">Voltage-gated currents and firing properties of embryonic Drosophila neurons grown in a chemically defined medium.</a> J. Neurobiol. 27, 113-126 (1995).</li><li>Lee, D., O'Dowd, D. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fast+excitatory+synaptic+transmission+mediated+by+nAChR+in+cultured+Drosophila+neurons.">Fast excitatory synaptic transmission mediated by nAChR in cultured Drosophila neurons.</a> J. Neurosci. 19, 5311-5321 (1999).</li><li>Lee, D., O'Dowd, D. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cyclic-AMP-dependent+plasticity+at+excitatory+cholinergic+synapses+in+Drosophila+neurons:+Alterations+in+the+memory+mutant+dunce.">Cyclic-AMP-dependent plasticity at excitatory cholinergic synapses in Drosophila neurons: Alterations in the memory mutant dunce.</a> J. Neurosci. 20, 2104-2111 (2000).</li><li>Hodges, D. D., Lee, D., Boswell, K., Preston, C. F., Hall, L. M., O'Dowd, D. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=tipE+regulates+sodium-dependent+repetitive+firing+in+Drosophila+neurons.">tipE regulates sodium-dependent repetitive firing in Drosophila neurons.</a> Mol. Cell Neurosci. 19, 402-416 (2002).</li><li>Lee, D., Su, H., Dowd, O., K, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=GABA+receptors+containing+Rdl+subunits+mediate+fast+inhibitory+synaptic+transmission+in+Drosophila+neurons.">GABA receptors containing Rdl subunits mediate fast inhibitory synaptic transmission in Drosophila neurons.</a> J. Neurosci. 23, 4625-4634 (2003).</li></ol>

In Drosophila Kulturen aus midgastrula Embryonen bereitete den Neuronen entstehen aus Neuroblasten Vorläufer, von denen viele vor der Differenzierung in vitro zu teilen. Dieses System bietet somit eine einmalige Gelegenheit für die Exploration von genetischen und umweltbedingten Faktoren wichtig in sehr frühen Phasen der neuronalen Entwicklung (Rohrbaugh et al., 2003). Wir haben gezeigt, dass Neurone in einer einfachen Definition-Medium in elektrisch erregbaren Neuronen, bilden auch funktionelle synaptische Verbindungen (O Dowd, 1995; Le...

Die Kulturen in diesem Medien getroffen werden, sind eine 5% ige CO2-Inkubator bei etwa 22-24 ° C gehalten werden Wir verwenden eine Standard-Säugetier-Zellkultur-Inkubator in einem kalten Raum gebracht und erhitzt, um 23 ° C. Immer verwendet autoklaviert gefiltertem Wasser und machen in Containern, die für Medien und Ergänzungen vorbehalten sind. Niemals ein pH-Meter oder Rührstab für andere Zwecke in den Medien verwendet.

preparation of neuronal cultures from midgastrula stage drosophila embryos

Dieses Video zeigt das Verfahren zur Herstellung von primären neuronalen Kulturen aus midgastrula Bühne Drosophila-Embryos. Die Methoden für die Erhebung Embryonen und ihre dechorionation mit Bleichmittel demonstriert. Mit einer Glaspipette an einem Mund-Saugrohr, illustrieren wir die Entfernung aller Zellen, die aus einzelnen Embryonen. Das Verfahren zum Dispergieren Zellen aus jeder embyro in einen kleinen (5 l) Tropfen Medium auf einer unbeschichteten Deckglas wird demonstriert. Ein Blick durch das Mikroskop bei 1 Stunde nach dem Ausplattieren zeigt die bevorzugte Zelldichte. Die meisten der Zellen, wenn in definierten Medium überleben Neuroblasten, dass ein oder mehrere Male in der Kultur teilen, bevor Erweiterung neuritischen Prozesse durch 12-24 Stunden. Ein Blick durch das Mikroskop zeigt den Grad der Neuritenwachstum und Verzweigung in eine gesunde Kultur in 2 Tage in vitro zu erwarten. Die Kulturen werden in einer einfachen Bicarbonat Basis definiert Medium, in einer 5% CO 2-Inkubator bei 22-24 ° C. Neuritischen Prozesse weiter zu erarbeiten über die erste Woche in der Kultur, und wenn sie in Kontakt mit Neuriten aus dem benachbarten Zellen bilden sie oft funktionelle synaptische Verbindungen. Neuronen in diesen Kulturen auszudrücken spannungsabhängigen Natrium, Kalzium und Kalium-Kanälen und sind elektrisch erregbar. Diese Kultur ist nützlich für die Untersuchung molekularer genetischen und umweltbedingten Faktoren, die neuronale Differenzierung, Erregbarkeit und Synapsenbildung / Funktion zu regulieren.

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Preparation of Neuronal Cultures from Midgastrula Stage Drosophila Embryos

Dieses Video zeigt die Herstellung von primären neuronalen Kulturen aus midgastrula Bühne Drosophila-Embryos. Ansichten von lebenden Kulturen zeigen Zellen 1 Stunde nach dem Ausplattieren und differenzierten Neuronen nach 2 Tagen Wachstum in einem Bicarbonat-basierten definiertem Medium. Die Neuronen sind elektrisch erregbar und bilden synaptische Verbindungen.

Vorbereitung der neuronalen Kulturen aus Midgastrula Bühne Drosophila Embryonen

This video illustrates the procedure for making primary neuronal cultures from midgastrula stage Drosophila embryos. The methods for collecting embryos ...

Research

JoVE Journal

Biology

Primary Neuronal Cultures from the Brains of Late Stage Drosophila Pupae

Primäre neuronale Kulturen aus den Gehirnen von Late Stage Drosophila Puppen

In this video, we demonstrate the preparation of primary neuronal cultures from the brains of late stage Drosophila pupae. The procedure begins with the ...

Forschung

Biologie

Placing Growth Factor-Coated Beads on Early Stage Chicken Embryos

Platzieren Growth Factor-Coated Perlen auf Early Stage Hühnerembryonen

The neural tube expresses many proteins in specific spatiotemporal patterns during development.   These proteins have been shown to be critical for cell ...

In Ovo Electroporations of HH Stage 10 Chicken Embryos

In Ovo Electroporations von HH Stage 10 Hühnerembryonen

Large size and external development of the chicken embryo have long made it a valuable tool in the study of developmental biology.  With the advent of ...

Neuronal Cell Cultures from Aplysia for High-Resolution Imaging of Growth Cones

Neuronalen Zellkulturen von Aplysia für High-Resolution Imaging of Growth Cones

Neuronal growth cones are the highly motile structures at the tip of axons that can detect guidance cues in the environment and transduce this information ...

The Preparation of Drosophila Embryos for Live-Imaging Using the Hanging Drop Protocol

The Preparation of Drosophila Embryos for Live-Imaging Using the Hanging Drop Protocol

Die Herstellung Drosophila Embryonen für Live-Imaging mit dem Hanging-Drop-Protokoll

Green fluorescent protein (GFP)-based timelapse live-imaging is a powerful technique for studying the genetic regulation of dynamic processes such as ...

Preparation of Aplysia Sensory-motor Neuronal Cell Cultures

Preparation of Aplysia Sensory-motor Neuronal Cell Cultures

Vorbereitung der Aplysia Sensory-Motor neuronalen Zellkulturen

The nervous system of the marine mollusk Aplysia californica is relatively simple, consisting of approximately 20,000 neurons.  The neurons are large (up ...

Preparation of embryos for Electron Microscopy of the Drosophila embryonic heart tube

Preparation of embryos for Electron Microscopy of the Drosophila embryonic heart tube

Vorbereitung der Embryonen für Elektronenmikroskopie der Drosophila Embryonale Herz Rohr

The morphogenesis of the Drosophila  embryonic heart tube has emerged as a valuable model system for studying cell migration, cell-cell adhesion and cell ...

In-vivo Centrifugation of Drosophila Embryos

In-vivo Centrifugation of Drosophila Embryos

In-vivo-Zentrifugation von Drosophila Embryonen

A major strategy for purifying and isolating different types of intracellular organelles is to separate them from each other based on differences in ...

Upright Imaging of Drosophila Embryos

Upright Imaging of Drosophila Embryos

Upright Imaging von Drosophila Embryos

Several well-known morphogenetic gradients and cellular movements occur along the dorsal/ventral axis of the Drosophila embryo. However, the current ...

Primary Cell Cultures from Drosophila Gastrula Embryos

Primary Cell Cultures from Drosophila Gastrula Embryos

Primären Zellkulturen aus Drosophila Gastrula Embryonen

Here we describe a method for preparing and culturing primary cells dissociated from Drosophila gastrula embryos.   In brief, a large amount of staged ...