Name: preparation of neuronal cultures from midgastrula stage drosophila embryos
Uploaded: 2007-07-04T00:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Preparation of Neuronal Cultures from Midgastrula Stage Drosophila Embryos at JoVE.com

Questo lavoro è stato sostenuto da NIH concedere NS27501 a DKOD. Supporto aggiuntivo per questo lavoro da un HHMI professor Grant a DKOD.

I. Drosophila di raccolta degli embrioni <ol><li> Preparare piatti raccolta delle uova <ol><li> Fate bollire 200 ml di dH 2 O con 8 g di agar </li><li> Raffreddare a 50 ° C </li><li> Aggiungere 2 ml di EtOH e 2 ml di acido acetico </li><li> Versare in 35 piatti di plastica millimetri Petri, top </li><li> Raffreddare e conservare in un contenitore a tenuta d&#39;aria a 4 ° C </li><li> Fa circa 80 tavole </li></ol></li><li> Preparare pasta lievito <ol><li> Sciogliere il lievito attivo Fleishmans cottura in a...

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	<li>Rohrbough, J., O'Dowd, D. K., Baines, R. A., Broadie, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cellular+bases+of+behavioral+plasticity:+Establishing+and+modifying+synaptic+circuits+in+the+Drosophila+Genetic+System.">Cellular bases of behavioral plasticity: Establishing and modifying synaptic circuits in the Drosophila Genetic System.</a> J. Neurobiol. 54, 254-271 (2003).</li><li>O'Dowd, D. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Voltage-gated+currents+and+firing+properties+of+embryonic+Drosophila+neurons+grown+in+a+chemically+defined+medium.">Voltage-gated currents and firing properties of embryonic Drosophila neurons grown in a chemically defined medium.</a> J. Neurobiol. 27, 113-126 (1995).</li><li>Lee, D., O'Dowd, D. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fast+excitatory+synaptic+transmission+mediated+by+nAChR+in+cultured+Drosophila+neurons.">Fast excitatory synaptic transmission mediated by nAChR in cultured Drosophila neurons.</a> J. Neurosci. 19, 5311-5321 (1999).</li><li>Lee, D., O'Dowd, D. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cyclic-AMP-dependent+plasticity+at+excitatory+cholinergic+synapses+in+Drosophila+neurons:+Alterations+in+the+memory+mutant+dunce.">Cyclic-AMP-dependent plasticity at excitatory cholinergic synapses in Drosophila neurons: Alterations in the memory mutant dunce.</a> J. Neurosci. 20, 2104-2111 (2000).</li><li>Hodges, D. D., Lee, D., Boswell, K., Preston, C. F., Hall, L. M., O'Dowd, D. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=tipE+regulates+sodium-dependent+repetitive+firing+in+Drosophila+neurons.">tipE regulates sodium-dependent repetitive firing in Drosophila neurons.</a> Mol. Cell Neurosci. 19, 402-416 (2002).</li><li>Lee, D., Su, H., Dowd, O., K, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=GABA+receptors+containing+Rdl+subunits+mediate+fast+inhibitory+synaptic+transmission+in+Drosophila+neurons.">GABA receptors containing Rdl subunits mediate fast inhibitory synaptic transmission in Drosophila neurons.</a> J. Neurosci. 23, 4625-4634 (2003).</li></ol>

Nelle culture Drosophila preparati da embrioni fase midgastrula i neuroni derivano da precursori neuroblasti, molte delle quali dividono prima differenziazione in vitro. Questo sistema offre così un&#39;occasione unica per esplorare i fattori genetici e ambientali importanti in fasi molto precoci dello sviluppo neuronale (Rohrbaugh et al., 2003). Abbiamo dimostrato che i neuroni coltivati ​​in un mezzo semplice definito differenziarsi in neuroni elettricamente eccitabili, che formano anche funzionale connessioni sinaptiche (O Dowd, 199...

Le culture fatte in questo mezzo deve essere mantenuta in un 5% di CO2 incubatore a circa 22-24 ° C. Noi usiamo una cultura standard di tessuti di mammiferi incubatore posto in una stanza fredda e riscaldata a 23 ° C. Sempre usato in autoclave acqua filtrata e fare in contenitori che sono riservati per i media e gli integratori solo. Non mettere mai un pHmetro o mescolate a barre utilizzati per altri scopi nei media.

preparation of neuronal cultures from midgastrula stage drosophila embryos

Questo video illustra la procedura per le colture primarie di neuroni da midgastrula fase embrioni di Drosophila. I metodi per la raccolta di embrioni e la loro dechorionation con candeggina sono dimostrati. Utilizzando una pipetta di vetro collegata ad un tubo di aspirazione bocca, ci illustrano la rimozione di tutte le cellule da embrioni singolo. Il metodo per disperdere le cellule di ogni embyro in una piccola (5 l) goccia di media su un vetrino di vetro non rivestito è dimostrata. Una vista attraverso il microscopio a 1 ora dopo placcatura illustra la densità delle cellule preferito. La maggior parte delle cellule che sopravvivono quando coltivate in un terreno specifico sono neuroblasti che dividono una o più volte nella cultura prima di estendere i processi neuritiche da 12-24 ore. Una vista attraverso il microscopio illustra il livello di crescita dei neuriti e la ramificazione prevista una sana cultura a 2 giorni in vitro. Le culture sono cresciute in una semplice base di bicarbonato un terreno specifico, in un 5% di CO 2 incubatore a 22-24 ° C. Processi neuritiche continuare a elaborare oltre la prima settimana di cultura e quando entrare in contatto con neuriti da cellule vicine spesso forma funzionale connessioni sinaptiche. I neuroni in queste culture, si manifestano voltaggio-dipendenti di sodio, calcio e canali del potassio e sono elettricamente eccitabili. Questo sistema di coltura è utile per lo studio molecolare dei fattori genetici e ambientali che regolano il differenziamento neuronale, eccitabilità, e formazione di sinapsi / funzione.

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Preparation of Neuronal Cultures from Midgastrula Stage Drosophila Embryos

Questo video dimostra la preparazione di colture primarie di neuroni da midgastrula fase embrioni di Drosophila. Vedute di colture vive visualizzare le celle 1 ora dopo la placcatura e neuroni differenziati dopo 2 giorni di crescita in un medium a base di bicarbonato definite. I neuroni sono elettricamente eccitabili e formare connessioni sinaptiche.

Preparazione delle Culture neuronale da Midgastrula fase embrioni di Drosophila

This video illustrates the procedure for making primary neuronal cultures from midgastrula stage Drosophila embryos. The methods for collecting embryos ...

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