Name: preparation of neuronal cultures from midgastrula stage drosophila embryos
Uploaded: 2007-07-04T00:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Preparation of Neuronal Cultures from Midgastrula Stage Drosophila Embryos at JoVE.com

この作品は、DKODにNIHの助成金NS27501によってサポートされていました。 HHMI教授グラントからDKODにこの仕事のための追加サポート。

I.ショウジョウバエの胚のコレクション<ol><li>卵のコレクションプレートを準備<ol><li> 8グラムの寒天を加えて200mlのdH 2 Oを沸かす</li><li> 50℃まで冷却</li><li> 2ミリリットルエタノール、2mlの酢酸を追加</li><li>トップス、35mmプラスチックシャーレに注ぐ</li><li>クールと4で気密容器° Cで保管</li><li>約80枚になります</li></ol></li><li>酵母ペーストを準備する<ol><li>貼り形成するために水にFlei...

<ol>
	<li>Rohrbough, J., O'Dowd, D. K., Baines, R. A., Broadie, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cellular+bases+of+behavioral+plasticity:+Establishing+and+modifying+synaptic+circuits+in+the+Drosophila+Genetic+System.">Cellular bases of behavioral plasticity: Establishing and modifying synaptic circuits in the Drosophila Genetic System.</a> J. Neurobiol. 54, 254-271 (2003).</li><li>O'Dowd, D. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Voltage-gated+currents+and+firing+properties+of+embryonic+Drosophila+neurons+grown+in+a+chemically+defined+medium.">Voltage-gated currents and firing properties of embryonic Drosophila neurons grown in a chemically defined medium.</a> J. Neurobiol. 27, 113-126 (1995).</li><li>Lee, D., O'Dowd, D. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fast+excitatory+synaptic+transmission+mediated+by+nAChR+in+cultured+Drosophila+neurons.">Fast excitatory synaptic transmission mediated by nAChR in cultured Drosophila neurons.</a> J. Neurosci. 19, 5311-5321 (1999).</li><li>Lee, D., O'Dowd, D. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cyclic-AMP-dependent+plasticity+at+excitatory+cholinergic+synapses+in+Drosophila+neurons:+Alterations+in+the+memory+mutant+dunce.">Cyclic-AMP-dependent plasticity at excitatory cholinergic synapses in Drosophila neurons: Alterations in the memory mutant dunce.</a> J. Neurosci. 20, 2104-2111 (2000).</li><li>Hodges, D. D., Lee, D., Boswell, K., Preston, C. F., Hall, L. M., O'Dowd, D. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=tipE+regulates+sodium-dependent+repetitive+firing+in+Drosophila+neurons.">tipE regulates sodium-dependent repetitive firing in Drosophila neurons.</a> Mol. Cell Neurosci. 19, 402-416 (2002).</li><li>Lee, D., Su, H., Dowd, O., K, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=GABA+receptors+containing+Rdl+subunits+mediate+fast+inhibitory+synaptic+transmission+in+Drosophila+neurons.">GABA receptors containing Rdl subunits mediate fast inhibitory synaptic transmission in Drosophila neurons.</a> J. Neurosci. 23, 4625-4634 (2003).</li></ol>

midgastrula期胚から調製ショウジョウバエの培養では神経細胞はin vitroで分化に先立って分割しその多くが神経芽細胞の前駆体、から生じる。このシステムは、このように神経発達のごく初期の段階（Rohrbaughら、2003）で重要な遺伝的要因と環境要因の探査のためのユニークな機会を提供します。我々は、単純な定義の培地中で増殖させた神経細胞でも（;リーとOダウド、1999 Oダウド、1995）機能的なシナプス結?...

このメディアに作られた文化は、約22〜24℃、5％CO2インキュベーター内で維持されなければならない我々は、インキュベーターが涼しい部屋に置き、標準の哺乳類の組織培養を使用し、23℃に加熱常に使用されるろ過水をオートクレーブし、メディアやサプリメントだけのために予約されている容器にしてください。 pH計を置いていないか、メディア内の他の目的に使用されるバーをかき混ぜることはありません。

preparation of neuronal cultures from midgastrula stage drosophila embryos

このビデオはmidgastrulaステージショウジョウバエの胚からの主ニューロン培養を行うための手順を示しています。漂白剤を使用して、胚とそのdechorionationを収集するための方法が実証されています。口の吸引管に接続されているガラスピペットを用いて、我々は、単一の胚からのすべてのセルの除去を示しています。コー​​ティングされていないガラスのカバースリップ上で培地の小さな（5リットル）ドロップに各embyroから細胞を分散させるための方法が示されている。めっき後の1時間での顕微鏡を使用してビューには、好ましい細胞密度を示しています。定義された培地中で増殖させた場合、生存細胞のほとんどは12-24時間で神経突起のプロセスを拡張する前に、文化に1回以上の分割神経芽です。顕微鏡を使用してビューには、神経突起伸長のレベルを示し、in vitroで2日間で健全な文化の中で期待分岐を。培養は22〜24℃、5％CO 2インキュベーター中で、定義された培地をベースにシンプルな炭酸で栽培されています神経突起のプロセスは、文化としたとき、彼らはしばしば機能的なシナプス結合を形成する隣接セルからの神経突起と接触するように最初の週にわたって詳しく説明し続ける。これらの培養物における神経細胞は、電位依存性ナトリウム、カルシウム、カリウムチャネルを発現しており、電気的興奮性があります。この培養系は、ニューロンの分化、興奮性、およびシナプス形成/機能を調節する分子遺伝学的要因と環境要因を研究するために有用です。

Watch this Scientific Journal Video about Preparation of Neuronal Cultures from Midgastrula Stage Drosophila Embryos at JoVE.com

Preparation of Neuronal Cultures from Midgastrula Stage Drosophila Embryos

このビデオはmidgastrulaステージショウジョウバエの胚からの一次ニューロン培養の準備を示しています。ライブ文化の景色は、重炭酸塩ベースの定義培地での生育の2日後に細胞を1めっき後の時間と分化した神経細胞を示す。神経細胞は電気的興奮性であり、シナプス結合を形成する。

Midgastrulaステージショウジョウバエの胚からの神経培養の準備

This video illustrates the procedure for making primary neuronal cultures from midgastrula stage Drosophila embryos. The methods for collecting embryos ...

Research

JoVE Journal

Biology

Primary Neuronal Cultures from the Brains of Late Stage Drosophila Pupae

後期ステージショウジョウバエ蛹の脳からの初代神経培養

In this video, we demonstrate the preparation of primary neuronal cultures from the brains of late stage Drosophila pupae. The procedure begins with the ...

Placing Growth Factor-Coated Beads on Early Stage Chicken Embryos

アーリーステージのニワトリ胚に成長因子コートビーズの配置

The neural tube expresses many proteins in specific spatiotemporal patterns during development.   These proteins have been shown to be critical for cell ...

In Ovo Electroporations of HH Stage 10 Chicken Embryos

HHステージ10ニワトリ胚のOVOエレクトロポレーションで

Large size and external development of the chicken embryo have long made it a valuable tool in the study of developmental biology.  With the advent of ...

Neuronal Cell Cultures from Aplysia for High-Resolution Imaging of Growth Cones

成長円錐の高分解能イメージングのためのアメフラシから神経細胞の培養

Neuronal growth cones are the highly motile structures at the tip of axons that can detect guidance cues in the environment and transduce this information ...

The Preparation of Drosophila Embryos for Live-Imaging Using the Hanging Drop Protocol

The Preparation of Drosophila Embryos for Live-Imaging Using the Hanging Drop Protocol

の調製ショウジョウバエ</emハンギングドロッププロトコルを使用してライブイメージングのための>胚

Green fluorescent protein (GFP)-based timelapse live-imaging is a powerful technique for studying the genetic regulation of dynamic processes such as ...

Preparation of Aplysia Sensory-motor Neuronal Cell Cultures

Preparation of Aplysia Sensory-motor Neuronal Cell Cultures

の準備アメフラシ感覚運動神経細胞の培養

The nervous system of the marine mollusk Aplysia californica is relatively simple, consisting of approximately 20,000 neurons.  The neurons are large (up ...

Preparation of embryos for Electron Microscopy of the Drosophila embryonic heart tube

Preparation of embryos for Electron Microscopy of the Drosophila embryonic heart tube

の電子顕微鏡のための胚の調製ショウジョウバエ胎児心臓の管

The morphogenesis of the Drosophila  embryonic heart tube has emerged as a valuable model system for studying cell migration, cell-cell adhesion and cell ...

In-vivo Centrifugation of Drosophila Embryos

In-vivo Centrifugation of Drosophila Embryos

ショウジョウバエの胚の生体内の遠心

A major strategy for purifying and isolating different types of intracellular organelles is to separate them from each other based on differences in ...

Upright Imaging of Drosophila Embryos

Upright Imaging of Drosophila Embryos

の直立イメージングショウジョウバエ胚

Several well-known morphogenetic gradients and cellular movements occur along the dorsal/ventral axis of the Drosophila embryo. However, the current ...

Primary Cell Cultures from Drosophila Gastrula Embryos

Primary Cell Cultures from Drosophila Gastrula Embryos

から初代細胞培養ショウジョウバエ原腸胚

Here we describe a method for preparing and culturing primary cells dissociated from Drosophila gastrula embryos.   In brief, a large amount of staged ...