Name: preparation of neuronal cultures from midgastrula stage drosophila embryos
Uploaded: 2007-07-04T00:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Preparation of Neuronal Cultures from Midgastrula Stage Drosophila Embryos at JoVE.com

Detta arbete stöddes av NIH bidrag NS27501 till DKOD. Ytterligare stöd för detta arbete från en HHMI professor Grant att DKOD.

I. Drosophila embryosamlingsgrupp <ol><li> Förbered plattor insamling av ägg <ol><li> Koka 200 ml dH 2 O med 8 g agar </li><li> Kyl till 50 ° C </li><li> Tillsätt 2 ml EtOH och 2 ml Ättiksyra </li><li> Häll i 35 Petri mm plastskålar, toppar </li><li> Kyl och förvara i lufttät behållare vid 4 ° C </li><li> Gör cirka 80 plattor </li></ol></li><li> Förbered jäst pasta <ol><li> Lös Fleishmans aktiva bakning jästen i vattnet och bildar klistra </li><li> Mikrovågsugn i 20-30 sekunder för att död...

<ol>
	<li>Rohrbough, J., O'Dowd, D. K., Baines, R. A., Broadie, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cellular+bases+of+behavioral+plasticity:+Establishing+and+modifying+synaptic+circuits+in+the+Drosophila+Genetic+System.">Cellular bases of behavioral plasticity: Establishing and modifying synaptic circuits in the Drosophila Genetic System.</a> J. Neurobiol. 54, 254-271 (2003).</li><li>O'Dowd, D. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Voltage-gated+currents+and+firing+properties+of+embryonic+Drosophila+neurons+grown+in+a+chemically+defined+medium.">Voltage-gated currents and firing properties of embryonic Drosophila neurons grown in a chemically defined medium.</a> J. Neurobiol. 27, 113-126 (1995).</li><li>Lee, D., O'Dowd, D. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fast+excitatory+synaptic+transmission+mediated+by+nAChR+in+cultured+Drosophila+neurons.">Fast excitatory synaptic transmission mediated by nAChR in cultured Drosophila neurons.</a> J. Neurosci. 19, 5311-5321 (1999).</li><li>Lee, D., O'Dowd, D. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cyclic-AMP-dependent+plasticity+at+excitatory+cholinergic+synapses+in+Drosophila+neurons:+Alterations+in+the+memory+mutant+dunce.">Cyclic-AMP-dependent plasticity at excitatory cholinergic synapses in Drosophila neurons: Alterations in the memory mutant dunce.</a> J. Neurosci. 20, 2104-2111 (2000).</li><li>Hodges, D. D., Lee, D., Boswell, K., Preston, C. F., Hall, L. M., O'Dowd, D. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=tipE+regulates+sodium-dependent+repetitive+firing+in+Drosophila+neurons.">tipE regulates sodium-dependent repetitive firing in Drosophila neurons.</a> Mol. Cell Neurosci. 19, 402-416 (2002).</li><li>Lee, D., Su, H., Dowd, O., K, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=GABA+receptors+containing+Rdl+subunits+mediate+fast+inhibitory+synaptic+transmission+in+Drosophila+neurons.">GABA receptors containing Rdl subunits mediate fast inhibitory synaptic transmission in Drosophila neurons.</a> J. Neurosci. 23, 4625-4634 (2003).</li></ol>

I Drosophila kulturer beretts av midgastrula stadium embryon nervceller uppstår neuroblast prekursorer, av vilka många delar före differentiering in vitro. Detta system ger alltså en unik möjlighet för utforskning av genetiska och miljömässiga faktorer viktiga i mycket tidiga faser av nervsystemets utveckling (Rohrbaugh et al., 2003). Vi har visat att nervceller som odlats i ett definierat enkla medel differentieras till elektriskt retbara nervceller som utgör också funktionella synapsförbindelser (O Dowd, 1995; Lee och O Dowd, 1...

De kulturer som gjorts i detta medium måste hållas i en 5% CO2 inkubator vid ca 22-24 ° C. Vi använder en standard däggdjur kultur inkubator placeras i ett kylrum och upphettas till 23 ° C. Alltid använt autoklaveras filtrerat vatten och göra i behållare som är reserverade för media och tillägg bara. Placera aldrig en pH-mätare eller omrörare används för andra ändamål i media.

preparation of neuronal cultures from midgastrula stage drosophila embryos

Denna video illustrerar förfarandet för primära neuronala kulturer från midgastrula skede Drosophila embryon. Metoderna för insamling av embryon och deras dechorionation använda blekmedel demonstreras. Använda ett glas pipett bifogas en mun sugrör, illustrerar vi avlägsnandet av alla celler från enstaka embryon. Metoden för spridning celler från varje embyro i en liten (5 l) droppe medium på ett obestruket glas täckglas visas. En vy genom mikroskop på 1 timme efter bordläggning illustrerar föredra celltäthet. De flesta av de celler som överlever när de odlas i definierat medium är neuroblaster som delar en eller flera gånger i kultur innan utvidga neuritic processer 12-24 timmar. En vy i mikroskopet visar nivån på neurite utväxt och förgrening förväntas i en sund kultur på 2 dagar in vitro. Kulturer odlas på ett enkelt bikarbonat baserat definierat medium, i en 5% CO 2 inkubator vid 22-24 ° C. Neuritic processer fortsätter att utveckla under den första veckan i kultur och när de tar kontakt med neurites från närliggande celler som de ofta bildar funktionella synapsförbindelser. Nervceller i dessa kulturer uttrycker spänningskänsliga natriumkanaler, kalcium och kalium kanaler och är elektriskt retbara. Denna kultur-systemet är användbart för att studera molekylära genetiska och miljömässiga faktorer som reglerar neuronala differentiering, upphetsning och synaps bildning / funktion.

Watch this Scientific Journal Video about Preparation of Neuronal Cultures from Midgastrula Stage Drosophila Embryos at JoVE.com

Preparation of Neuronal Cultures from Midgastrula Stage Drosophila Embryos

Denna video visar förberedelserna primära neuronala kulturer från midgastrula skede Drosophila embryon. Utsikt över levande kulturer visar celler 1 timme efter bordläggning och differentierade nervceller efter 2 dagar på tillväxten i ett definierat bikarbonat-baserat medium. Nervceller är elektriskt retbara och form synapsförbindelser.

Beredning av Neuronal kulturer från Midgastrula Stage Drosophila embryon

This video illustrates the procedure for making primary neuronal cultures from midgastrula stage Drosophila embryos. The methods for collecting embryos ...

Research

JoVE Journal

Biology

Primary Neuronal Cultures from the Brains of Late Stage Drosophila Pupae

Primär Neuronal kulturer från hjärnan hos sent stadium Drosophila puppor

In this video, we demonstrate the preparation of primary neuronal cultures from the brains of late stage Drosophila pupae. The procedure begins with the ...

Placing Growth Factor-Coated Beads on Early Stage Chicken Embryos

Placering Growth Factor-Coated Pärlor på tidiga embryon Stage Kyckling

The neural tube expresses many proteins in specific spatiotemporal patterns during development.   These proteins have been shown to be critical for cell ...

In Ovo Electroporations of HH Stage 10 Chicken Embryos

I Ovo Electroporations av HH Stage 10 kycklingembryon

Large size and external development of the chicken embryo have long made it a valuable tool in the study of developmental biology.  With the advent of ...

Neuronal Cell Cultures from Aplysia for High-Resolution Imaging of Growth Cones

Neuronal cellkulturer från Aplysia för högupplöst avbildning av tillväxt Kottar

Neuronal growth cones are the highly motile structures at the tip of axons that can detect guidance cues in the environment and transduce this information ...

The Preparation of Drosophila Embryos for Live-Imaging Using the Hanging Drop Protocol

The Preparation of Drosophila Embryos for Live-Imaging Using the Hanging Drop Protocol

Beredningen av Drosophila Embryon för Live-Imaging Använda droppe protokollet

Green fluorescent protein (GFP)-based timelapse live-imaging is a powerful technique for studying the genetic regulation of dynamic processes such as ...

Preparation of Aplysia Sensory-motor Neuronal Cell Cultures

Preparation of Aplysia Sensory-motor Neuronal Cell Cultures

Beredning av Aplysia Sensomotorisk Neuronal cellkulturer

The nervous system of the marine mollusk Aplysia californica is relatively simple, consisting of approximately 20,000 neurons.  The neurons are large (up ...

Preparation of embryos for Electron Microscopy of the Drosophila embryonic heart tube

Preparation of embryos for Electron Microscopy of the Drosophila embryonic heart tube

Beredning av embryon för elektronmikroskopi av Drosophila Embryonala hjärta tub

The morphogenesis of the Drosophila  embryonic heart tube has emerged as a valuable model system for studying cell migration, cell-cell adhesion and cell ...

In-vivo Centrifugation of Drosophila Embryos

In-vivo Centrifugation of Drosophila Embryos

In vivo Centrifugering av Drosophila embryon

A major strategy for purifying and isolating different types of intracellular organelles is to separate them from each other based on differences in ...

Upright Imaging of Drosophila Embryos

Upright Imaging of Drosophila Embryos

Upprätt Imaging av Drosophila Embryon

Several well-known morphogenetic gradients and cellular movements occur along the dorsal/ventral axis of the Drosophila embryo. However, the current ...

Primary Cell Cultures from Drosophila Gastrula Embryos

Primary Cell Cultures from Drosophila Gastrula Embryos

Primära cellkulturer från Drosophila Gastrula Embryon

Here we describe a method for preparing and culturing primary cells dissociated from Drosophila gastrula embryos.   In brief, a large amount of staged ...