Name: preparation of neuronal cultures from midgastrula stage drosophila embryos
Uploaded: 2007-07-04T00:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Preparation of Neuronal Cultures from Midgastrula Stage Drosophila Embryos at JoVE.com

Bu çalışma, Ulusal Sağlık Enstitüsü, hibe NS27501 tarafından desteklenen DKOD. Bir HHMI Profesör Grant DKOD bu iş için ek destek.

I. Drosophila Embriyo Koleksiyonu <ol><li> Yumurta toplama plakaları hazırlayın <ol><li> 8 g agar ile kaynatın 200 ml dH 2 O </li><li> Soğuk - 50 ° C </li><li> 2 ml EtOH ve 2 ml asetik asit </li><li> 35 mm plastik petri kaplarına, tops dökün </li><li> Serin ve hava geçirmez bir kapta saklayın, 4 ° C </li><li> Yaklaşık 80 plakalar yapar </li></ol></li><li> Maya macun hazırlayın <ol><li> Hamur oluşturmak için Fleishmans aktif pişirme maya su içinde çözülür </li><li> Maya öldürmek içi...

<ol>
	<li>Rohrbough, J., O'Dowd, D. K., Baines, R. A., Broadie, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cellular+bases+of+behavioral+plasticity:+Establishing+and+modifying+synaptic+circuits+in+the+Drosophila+Genetic+System.">Cellular bases of behavioral plasticity: Establishing and modifying synaptic circuits in the Drosophila Genetic System.</a> J. Neurobiol. 54, 254-271 (2003).</li><li>O'Dowd, D. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Voltage-gated+currents+and+firing+properties+of+embryonic+Drosophila+neurons+grown+in+a+chemically+defined+medium.">Voltage-gated currents and firing properties of embryonic Drosophila neurons grown in a chemically defined medium.</a> J. Neurobiol. 27, 113-126 (1995).</li><li>Lee, D., O'Dowd, D. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fast+excitatory+synaptic+transmission+mediated+by+nAChR+in+cultured+Drosophila+neurons.">Fast excitatory synaptic transmission mediated by nAChR in cultured Drosophila neurons.</a> J. Neurosci. 19, 5311-5321 (1999).</li><li>Lee, D., O'Dowd, D. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cyclic-AMP-dependent+plasticity+at+excitatory+cholinergic+synapses+in+Drosophila+neurons:+Alterations+in+the+memory+mutant+dunce.">Cyclic-AMP-dependent plasticity at excitatory cholinergic synapses in Drosophila neurons: Alterations in the memory mutant dunce.</a> J. Neurosci. 20, 2104-2111 (2000).</li><li>Hodges, D. D., Lee, D., Boswell, K., Preston, C. F., Hall, L. M., O'Dowd, D. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=tipE+regulates+sodium-dependent+repetitive+firing+in+Drosophila+neurons.">tipE regulates sodium-dependent repetitive firing in Drosophila neurons.</a> Mol. Cell Neurosci. 19, 402-416 (2002).</li><li>Lee, D., Su, H., Dowd, O., K, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=GABA+receptors+containing+Rdl+subunits+mediate+fast+inhibitory+synaptic+transmission+in+Drosophila+neurons.">GABA receptors containing Rdl subunits mediate fast inhibitory synaptic transmission in Drosophila neurons.</a> J. Neurosci. 23, 4625-4634 (2003).</li></ol>

Midgastrula dönem embriyoların hazırlanan Drosophila kültürlerde nöronlar in vitro farklılaşma önce bölmek çoğu neuroblast öncüleri, ortaya çıkar. Bu sistem, böylece nöronal gelişiminin çok erken evrelerinde (Rohrbaugh ve ark, 2003) önemli genetik ve çevresel faktörlerin araştırılması için eşsiz bir fırsat sağlar. Biz, tanımlanmış basit bir ortamda yetişen nöronların elektriksel olarak uyarılabilen nöronların (Lee ve O Dowd, 1999 O Dowd, 1995) fonksiyonel sinaptik bağlantıları oluşturmak ayrım ol...

Bu medya yapılan kültürler, 22-24 ° C&#39;de% 5 CO2 inkübatör muhafaza edilmelidir Biz kuvöz soğuk bir odaya yerleştirilen bir standart memeli doku kültürü ve 23 ° C&#39;ye kadar ısıtılır Otoklavlanmış filtrelenmiş su ve yalnızca medya ve takviyeleri için ayrılmış kaplarda yapmak her zaman kullanılır. Bir pH metre koymak veya diğer amaçlar için kullanılan medya bar karıştırın.

preparation of neuronal cultures from midgastrula stage drosophila embryos

Bu video midgastrula evre Drosophila embriyolar primer nöronal kültürlerin yapmak için prosedür göstermektedir. Çamaşır suyu kullanarak embriyo ve kendi dechorionation toplama yöntemleri gösterilmektedir. Ağız emme borusu bağlı bir damlalıklı cam kullanarak, tüm hücreleri tek embriyolar kaldırılması göstermektedir. Kaplamasız bir cam lamel, orta (5 lt) küçük bir düşüş içine her embyro hücrelerini dağıtma yöntemi olduğunu göstermiştir. Kaplama 1 saat sonra mikroskop ile bir görünüm için tercih edilen bir hücre yoğunluğu göstermektedir. Tanımlanan orta büyüdüğü zaman hayatta hücrelerinin çoğu 12-24 saat nöritik süreçleri uzanan önce bir kez veya daha fazla kültür bölmek neuroblasts. Mikroskop aracılığıyla bir görünüm neurite akıbet seviyesini gösterir ve in vitro 2 gün sağlıklı bir kültür beklenen dallanma. Kültürleri, 22-24 ° C&#39;de% 5 CO 2 inkübatör tanımlanan orta tabanlı basit bir bikarbonat yetiştirilen Nöritik süreçleri kültürünün ilk haftasında ayrıntılı olarak devam etmek ve komşu hücrelerden genellikle fonksiyonel sinaptik bağlantıları formu neurites ile temas yaparken. Bu kültürlerin Nöronlar voltaj kapılı sodyum, kalsiyum ve potasyum kanalları ifade ve elektriksel olarak uyarılabilen. Bu kültür sistemi nöronal farklılaşma, heyecanlanma, ve sinaps oluşumu / fonksiyon düzenleyen moleküler genetik ve çevresel faktörlerin çalışmak için yararlıdır.

Watch this Scientific Journal Video about Preparation of Neuronal Cultures from Midgastrula Stage Drosophila Embryos at JoVE.com

Preparation of Neuronal Cultures from Midgastrula Stage Drosophila Embryos

Bu video midgastrula evre Drosophila embriyolar primer nöronal kültürlerin hazırlanmasında gösteriyor. Canlı kültürlerin Görüntüleme kaplama 2 gün sonra bir bikarbonat tabanlı tanımlı bir ortamda büyüme ve farklı nöronlar sonra hücreler 1 saat gösteriyor. Nöronların elektriksel olarak uyarılabilen ve sinaptik bağlantıları formu.

Nöronal Kültürler Midgastrula Sahne Drosophila Embriyolar hazırlanması

This video illustrates the procedure for making primary neuronal cultures from midgastrula stage Drosophila embryos. The methods for collecting embryos ...

Research

JoVE Journal

Biology

Primary Neuronal Cultures from the Brains of Late Stage Drosophila Pupae

Geç Stage Drosophila pupa Brain İlköğretim Nöronal Kültürler

In this video, we demonstrate the preparation of primary neuronal cultures from the brains of late stage Drosophila pupae. The procedure begins with the ...

Placing Growth Factor-Coated Beads on Early Stage Chicken Embryos

Erken Evre Tavuk Embriyolar Büyüme Faktörü-Kaplı Boncuk yerleştirme

The neural tube expresses many proteins in specific spatiotemporal patterns during development.   These proteins have been shown to be critical for cell ...

In Ovo Electroporations of HH Stage 10 Chicken Embryos

HH Sahne 10 Tavuk Embriyolar Ovo Electroporations

Large size and external development of the chicken embryo have long made it a valuable tool in the study of developmental biology.  With the advent of ...

Neuronal Cell Cultures from Aplysia for High-Resolution Imaging of Growth Cones

Büyüme Konileri Yüksek Çözünürlüklü Görüntüleme için Aplysia Nöronal Hücre Kültürleri

Neuronal growth cones are the highly motile structures at the tip of axons that can detect guidance cues in the environment and transduce this information ...

The Preparation of Drosophila Embryos for Live-Imaging Using the Hanging Drop Protocol

The Preparation of Drosophila Embryos for Live-Imaging Using the Hanging Drop Protocol

Hazırlanması Drosophila</emAsma Bırak Protokolü kullanarak Canlı Görüntüleme> Embriyolar

Green fluorescent protein (GFP)-based timelapse live-imaging is a powerful technique for studying the genetic regulation of dynamic processes such as ...

Preparation of Aplysia Sensory-motor Neuronal Cell Cultures

Preparation of Aplysia Sensory-motor Neuronal Cell Cultures

Hazırlanması Aplysia Duyusal-motor Nöronal Hücre Kültürleri

The nervous system of the marine mollusk Aplysia californica is relatively simple, consisting of approximately 20,000 neurons.  The neurons are large (up ...

Preparation of embryos for Electron Microscopy of the Drosophila embryonic heart tube

Preparation of embryos for Electron Microscopy of the Drosophila embryonic heart tube

Elektron Mikroskobu için embriyo Hazırlık Drosophila Embriyonik kalp tüpü

The morphogenesis of the Drosophila  embryonic heart tube has emerged as a valuable model system for studying cell migration, cell-cell adhesion and cell ...

In-vivo Centrifugation of Drosophila Embryos

In-vivo Centrifugation of Drosophila Embryos

In-vivo Drosophila Embriyolar Santrifüj

A major strategy for purifying and isolating different types of intracellular organelles is to separate them from each other based on differences in ...

Upright Imaging of Drosophila Embryos

Upright Imaging of Drosophila Embryos

VE Dik Görüntüleme Drosophila Embriyolar

Several well-known morphogenetic gradients and cellular movements occur along the dorsal/ventral axis of the Drosophila embryo. However, the current ...

Primary Cell Cultures from Drosophila Gastrula Embryos

Primary Cell Cultures from Drosophila Gastrula Embryos

Birincil Hücre Kültürleri Drosophila Gastrula Embriyolar

Here we describe a method for preparing and culturing primary cells dissociated from Drosophila gastrula embryos.   In brief, a large amount of staged ...