Name: an introduction to worm lab: from culturing worms to mutagenesis
Uploaded: 2011-01-11T22:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about An Introduction to Worm Lab: from Culturing Worms to Mutagenesis at JoVE.com

Dit werk werd gefinancierd door NSF subsidie ​​IOB # 0615996.

Deel 1: Voorbereiding van nematoden groei media (NGM) Petri platen Experimentele nematoden, zoals C. elegans en P. pacificus worden meestal gekweekt in het laboratorium op 6 cm Petri platen met Nematode groeimedium (NGM) 1. Wormen zijn bewaard bij 20 ° C, maar kan worden geïncubeerd bij een bereik van temperaturen (tussen 4 ° C - 25 ° C), afhankelijk van de nematode soort en de experimentele opzet. Voor te bereiden platen met NGM, standaard steriele technieken ...

<ol>
	<li>Brenner, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Genetics. 77 (1), 71-71 (1974).</li><li>Anderson, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Methods Cell Biol. 48, 31-31 (1995).</li><li>Yandell, M. D., Edgar, L. G., Wood, W. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 91 (4), 1381-1381 (1994).</li><li>Pires-daSilva, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> WormBook. , 1-1 (2005).</li><li>Kenning, C., Kipping, I., Sommer, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> J. Genesis. 40 (3), 176-176 (2004).</li><li>Sommer, R. J., Carta, L. K., Kim, S. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Fundamental and Applied Nematology. 19 (6), 511-511 (1996).</li><li>Pires-daSilva, A., Sommer, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Genes &#38; development. 18 (10), 1198-1198 (2004).</li><li>Wei, A., Yuan, A., Fawcett, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Nucleic acids research. 30 (20), 110-110 (2002).</li><li>Jorgensen, E. M., Mango, S. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Nat Rev Genet. 3 (5), 356-356 (2002).</li></ol>

Mutagenese is een grote schaal wordt toegepast techniek voor genetische studies in verschillende experimentele model organismen. Mutagenese experimenten worden vaak gebruikt om de functie van een gen twee te identificeren. De mutagenese hier beschreven procedures kan worden gebruikt, niet alleen voor P. pacificus, maar ook voor C. elegans en andere verwante soorten aaltjes. Hier beschrijven we twee methodes, EMS en TMP / UV mutagenese. EMS is een chemische stof d...

an introduction to worm lab: from culturing worms to mutagenesis

Dit protocol beschrijft procedures voor het onderhouden nematoden in het laboratorium en hoe je ze mutagenize met behulp van twee alternatieve methoden: ethylmethaansulfonaat (EMS) en 4, 5 &#39;, 8-trimethylpsoralen in combinatie met ultraviolet licht (TMP / UV). Nematoden zijn krachtige biologische systemen voor genetische studies omwille van hun eenvoudige bouwplan en de paring systeem, dat bestaat uit zelf-bemesting hermafrodieten en mannetjes die kan genereren honderden nakomelingen per dier. Nematoden worden onderhouden in agar platen met een gazon van bacteriën en kan gemakkelijk worden overgedragen van de ene plaat naar de andere met behulp van een pick. EMS is een alkylerend middel vaak gebruikt om puntmutaties en kleine deleties veroorzaken, terwijl de TMP / UV voornamelijk veroorzaakt verwijderingen. Afhankelijk van de soort nematode wordt gebruikt, zal de concentratie van EMS en TMP moeten worden geoptimaliseerd. Te isoleren recessieve mutaties van de nematode Pristionchus pacificus, werden de dieren van de F2-generatie visueel gescreend fenotypes. Ter illustratie van deze methoden, we gemutageniseerd wormen en zocht naar Ongecoördineerde (UNC), Dumpy (dpy) en de transformator (Tra) mutanten.

Watch this Scientific Journal Video about An Introduction to Worm Lab: from Culturing Worms to Mutagenesis at JoVE.com

An Introduction to Worm Lab: from Culturing Worms to Mutagenesis

Screening voor mutanten met fenotypische afwijkingen is een eenvoudige methode voor het identificeren van genen die functie in een bepaald biologisch proces. In dit artikel beschrijven we hoe u de cultuur vrij levende wormen (bv.<em&gt; Pristionchus pacificus</em&gt;) In het laboratorium en tonen twee verschillende mutagenese methoden, EMS en TMP / UV.

Een inleiding tot Worm Lab: van kweken van Worms naar Mutagenesis

This protocol describes procedures to maintain nematodes in the laboratory and how to mutagenize them using two alternative methods: ethyl methane ...

Research

JoVE Journal

Biology

Homemade Site Directed Mutagenesis of Whole Plasmids

Homemade plaatsgerichte mutagenese van Whole Plasmids

Site directed mutagenesis of whole plasmids is a simple way to create slightly different variations of an original plasmid. With this method the cloned ...

Single Oocyte Bisulfite Mutagenesis

Single Eicel bisulfiet Mutagenese

Epigenetics encompasses all heritable and reversible modifications to chromatin that alter gene accessibility, and thus are the primary mechanisms for ...

Regular Care and Maintenance of a Zebrafish (Danio rerio) Laboratory: An Introduction

Regular Care and Maintenance of a Zebrafish Danio rerio Laboratory: An Introduction

Regelmatige verzorging en onderhoud van een zebravis (<em&gt; Danio rerio</em&gt;) Laboratorium: Een inleiding

This protocol describes regular care and maintenance of a zebrafish laboratory. Zebrafish are now gaining popularity in genetics, pharmacological and ...

Introduction to Solid Supported Membrane Based Electrophysiology

Inleiding tot de vaste Ondersteunde Membrane Gebaseerd Electrofysiologie

The electrophysiological method we present is based on a solid supported membrane (SSM) composed of an octadecanethiol layer chemisorbed on a gold coated ...

In vivo Reprogramming of Adult Somatic Cells to Pluripotency by Overexpression of Yamanaka Factors

In vivo Reprogramming of Adult Somatic Cells to Pluripotency by Overexpression of Yamanaka Factors

In vivo herprogrammeren van volwassen lichaamscellen te Pluripotentie door overexpressie van Yamanaka Factors

Induced pluripotent stem (iPS) cells that result from the reprogramming of somatic cells to a pluripotent state by forced expression of defined factors ...

An in vivo Crosslinking Approach to Isolate Protein Complexes From Drosophila Embryos

An in vivo Crosslinking Approach to Isolate Protein Complexes From Drosophila Embryos

Een In vivo Crosslinking Aanpak eiwitcomplexen te isoleren van Drosophila Embryo&#39;s

Many cellular processes are controlled by multisubunit protein complexes. Frequently these complexes form transiently and require native environment to ...

Culturing Caenorhabditis elegans in Axenic Liquid Media and Creation of Transgenic Worms by Microparticle Bombardment

Culturing Caenorhabditis elegans in Axenic Liquid Media and Creation of Transgenic Worms by Microparticle Bombardment

Kweken<em&gt; Caenorhabditis elegans</em &gt; In Axenische Liquid Media en Creatie van transgene Worms door bombardement met microdeeltjes

In this protocol, we present the required materials, and the procedure for making modified&#160;C. elegans&#160;Habituation and Reproduction media ...

Using Mouse Mammary Tumor Cells to Teach Core Biology Concepts: A Simple Lab Module

Met behulp van de muis Mammary tumorcellen Core Biology Begrippen les te geven: A Simple Lab Module

Undergraduate biology students are required to learn, understand and apply a variety of cellular and molecular biology concepts and techniques in ...

Measuring Lactase Enzymatic Activity in the Teaching Lab

Meten van Lactase enzymatische activiteit in het onderwijs Lab

Understanding how enzymes work, and relating this to real life examples, is critical to a wide range of undergraduate degrees in the biological and ...

Magnetic-Activated Cell Sorting Strategies to Isolate and Purify Synovial Fluid-Derived Mesenchymal Stem Cells from a Rabbit Model

Magnetische-geactiveerde cel sorteren van strategieën om te isoleren en zuiveren van de synoviale vloeistof afkomstige mesenchymale stamcellen uit het Model van een konijn

Mesenchymal stem cells (MSCs) are the main cell source for cell-based therapy. MSCs from articular cavity synovial fluid could potentially be used for ...