Name: organotypic slice culture of gfp-expressing mouse embryos for real-time imaging of peripheral nerve outgrowth
Uploaded: 2011-03-29T11:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Organotypic Slice Culture of GFP-expressing Mouse Embryos for Real-time Imaging of Peripheral Nerve Outgrowth at JoVE.com

저자는 마우스 배아 5시 슬라이스 문화를 수행할 수있는 아이디어의 원본 소스를 인정합니다. 우리는 촬영하는 동안 우리의 심부름꾼 역할에 대한 관대한 과학 지원과 안나 Degen에 대한 요아킴 커쉬을 인정하고 싶습니다. 그리고 하이 델베르크 (우수 클러스터 셀룰러 네트워크)의 대학이 작품은 독일 연구 재단 (Sonderforschungsbereich 488, Teilprojekt B7/B9 도이치 Forschungsgemeinschaft)에 의해 재정 지원되었다.

1 부 : 깔끔히 및 culturing 준비. <ol><li> 매체 (DMEM, 25 % 1X HBSS, 25 % 태아 소 혈청, 0.5 % 포도당, 1 ㎜의 글루타민, 2.5 MM HEPES, 산도 7.3) 및 3 - cm Millicell - CM 0.4 - μm의 문화를 깔끔히 10 - cm 조직 문화 플레이트 준비 멤브레인 삽입하고 37 인큐베이터에 보관 ° C와 5% CO 2. </li><li> 그것이 약 37 숙박 있도록 전자렌지에 PBS에 4% 낮은 용융 점 아가로 오스를 가열하고 가열 접시에 보관 ° C. </li><li> PBS (140 MM...

<ol>
	<li>Tucker, K. L., Meyer, M., Barde, Y. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neurotrophins+are+required+for+nerve+growth+during+development.">Neurotrophins are required for nerve growth during development.</a> Nat Neurosci. 4, 29-37 (2001).</li><li>Brachmann, I., Jakubick, V. C., Shaked, M., Unsicker, K., Tucker, K. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simple+slice+culture+system+for+the+imaging+of+nerve+development+in+embryonic+mouse.">A simple slice culture system for the imaging of nerve development in embryonic mouse.</a> Dev Dyn. 236, 3514-3523 (2007).</li><li>Collingridge, G. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+brain+slice+preparation:+a+tribute+to+the+pioneer+Henry+McIlwain.">The brain slice preparation: a tribute to the pioneer Henry McIlwain.</a> Journal of neuroscience methods. 59, 5-9 (1995).</li><li>Katz, L. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Local+circuitry+of+identified+projection+neurons+in+cat+visual+cortex+brain+slices.">Local circuitry of identified projection neurons in cat visual cortex brain slices.</a> J Neurosci. 7, 1223-1249 (1987).</li><li>Hotary, K. B., Landmesser, L. T., Tosney, K. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Embryo+slices.">Embryo slices.</a> Methods Cell Biol. 51, 109-124 (1996).</li></ol>

중간 회임 마우스 배아의 배아 슬라이스 문화 (E10 - E12)를 준비하는 방법의 광범위한 비교에서, 우리는 vibratome가 문제없이 문화의 전반적인 생존과 재현성 모두와 관련하여 가장 신뢰할 수있는 결과를 생산하는 것을 관찰했습니다 신경 가지 패턴. 반대로, 조각이 맥일웨인 조직 헬기 3 완전히 inviable 것으로 판명을 사용하여 준비 하였다. 우리는 원래 배아의 전체 쓰레기가 동시에 400 μm의 ...

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		<div>
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		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>HBSS 10x</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>GIBCO</td>
<td>14180</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Dissection tools</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>FST</td>
<td>various</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>L.M.P. agarose</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>15517-022</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Whatmann paper</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Whatman Int.</td>
<td>3030917</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Shortened firepolished pipettes</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>DMEM</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>GIBCO</td>
<td>41966</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>FBS</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>GIBCO</td>
<td>10270-106</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Pen Strep</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>GIBCO</td>
<td>15140</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>L-glutamine 100x</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>GIBCO</td>
<td>25030</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Vibratome</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Microm International GmbH</td>
<td>HM 650 V</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Fluorescent microscope</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Olympus</td>
<td>BX61WI</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>analySIS</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Soft Imaging System</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Millicell-CM inserts</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Millipore</td>
<td>PICMORG 50</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>10 cm culture plates</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Greiner Bio-One</td>
<td>633171</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>LOCTITE 406</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Henkel</td>
<td>142580</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Razor blades</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Thermo Fisher</td>
<td>none</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Dissecting microscope</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Nikon</td>
<td>SMZ800</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>HEPES</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Roth</td>
<td>9105.2</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Glucose</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>G7021</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>x4 objective</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Olympus</td>
<td>PL series</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>x10 objective</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Olympus</td>
<td>UPLFL &#x2013;PH series</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Filter</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Olympus</td>
<td>U-MNIBA2</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>CCD camera</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Soft Imaging System</td>
<td>SIS F-View II</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Equipment for heated chamber</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Leica</td>
<td>CTI-Controller 3700 and incubator S #11531171</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

organotypic slice culture of gfp-expressing mouse embryos for real-time imaging of peripheral nerve outgrowth

다양한 목적을 위해, organotypic 조각으로 마우스 배아의 전의 생체내의 재배가 바람직합니다. 예를 들어, 우리는 모두 영화의 innervation에 가능성을 허용, 녹색 형광 단백질 (EGFP)의 향상된 버전이 독점적으로 개발 중심과 주변 신경계 하나의 뉴런에서 표현되는 유전자 변형 마우스 라인 (tauGFP)를 채택 forelimb가와 약리과 유전 기법이이 과정을 조작합니다. 이러한 슬라이스 문화의 성공적인 재배에서 가장 중요한 매개 변수는 조각을 준비하는 방법입니다. 다양한 방법의 광범위한 테스트 후, 우리가 vibratome들이 일상적으로 몇 일 동안 생존하고, 가장 중요한을 보여 문화에 따라서 그러한 배아를 슬라이스하는 최선의 장치는 것을 발견, 시대에 발전 특정 방식. 중반에 태동하고 배아의 경우, 이것은 척수와 지느러미 루트 신경의 주변과 골격 및 근육 조직의 적절한 판단에 자신의 목표에 척수 신경의 정상적인 파생물이 포함되어 있습니다. 슬라이스 준비 후 2 일을 위해 공부를 할 수있는 표준 조직 문화 인큐베이터에서 재배 400 마이크로 미터 조각 -이 작품에서 우리는 300로 (E) E10 E12에 배아 일 전체 배아를 처리하는 방법을 제시. 이 방법의 성공을 위해 중요 각각의 아가로 오스 - 임베디드의 배아를 슬라이스하는 vibratome의 사용입니다. 이 인터페이스 문화 기술에서 발생하는 중간의 작은 볼륨에 배치 Millicell 문화 막 삽입,시 조각의 재배옵니다. 7 배아의 평균 한 쓰레기는 정기적으로 인해 태아의 나이뿐만 아니라, 조각의 두께에 약간 차이가 최소 14 조각 (태아 당 forelimb 영역로부터 2-3 조각)을 생산하고 있습니다. 교양 조각의 80 % 정도는 culturing 기간 2 througout 측정할 수 신경 가지를 보여줍니다. tauGFP 마우스 라인을 사용하는 대표적인 결과가 증명하고 있습니다.

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Organotypic Slice Culture of GFP-expressing Mouse Embryos for Real-time Imaging of Peripheral Nerve Outgrowth

우리는 주변 신경 가지의 재배와 시간 경과 영상을위한 중간 회임 마우스 배아의 organotypic 조각을 준비하는 방법을 제시한다.

의 Organotypic 슬라이스 문화 GFP - 표현 주변 신경 가지의 실시간 이미징을위한 마우스 배아를

For many purposes, the cultivation of mouse embryos ex vivo as organotypic slices is desirable. For example, we employ a transgenic mouse line (tauGFP) in ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

The Organotypic Hippocampal Slice Culture Model for Examining Neuronal Injury

의 연결을 부상을 검사에 대한 Organotypic Hippocampal 슬라이스 문화 모델

Organotypic hippocampal slice culture is an in vitro method to examine mechanisms of neuronal injury in which the basic architecture and composition of ...

연구

신경과학

Organotypic Hippocampal Slice Cultures

Organotypic Hippocampal 슬라이스 문화

The hippocampus, a component of the limbic system, plays important roles in long-term memory and spatial navigation 1. Hippocampal neurons can modify the ...

An Organotypic Slice Assay for High-Resolution Time-Lapse Imaging of Neuronal Migration in the Postnatal Brain

출생 후의 두뇌에의 연결을 마이 그 레이션의 고해상도 시간 경과 이미징을위한 Organotypic 슬라이스 분석

Neurogenesis in the postnatal brain depends on maintenance of three biological events: proliferation of progenitor cells, migration of neuroblasts, as ...

Multiple-mouse Neuroanatomical Magnetic Resonance Imaging

여러 마우스 Neuroanatomical 자기 공명 영상

The field of mouse phenotyping with magnetic resonance imaging (MRI) is rapidly growing, motivated by the need for improved tools for characterizing and ...

Whole Cell Recording from an Organotypic Slice Preparation of Neocortex

네크로 텍스의 Organotypic 슬라이스 준비에서 전체 셀 녹음

We have been studying the expression and functional roles of voltage-gated potassium channels in pyramidal neurons from rat neocortex.  Because of the ...

Electrophysiological Characterization of GFP-Expressing Cell Populations in the Intact Retina

손상 망막의 특성 Electrophysiological GFP - 표현 세포 집단

Studying the physiological properties and synaptic connections of specific neurons in the intact tissue is a challenge for those cells that lack ...

The Analysis of Purkinje Cell Dendritic Morphology in Organotypic Slice Cultures

Organotypic 슬라이스 문화의 Purkinje 세포 수지상의 형태학의 분석

Purkinje cells are an attractive model system for studying dendritic development, because they have an impressive dendritic tree which is strictly ...

A Protocol for the Administration of Real-Time fMRI Neurofeedback Training

관리의 실시간 fMRI Neurofeedback 훈련에 대 한 프로토콜

Neurologic disorders are characterized by abnormal cellular-, molecular-, and circuit-level functions in the brain. New methods to induce and control ...

Time-lapse Confocal Imaging of Migrating Neurons in Organotypic Slice Culture of Embryonic Mouse Brain Using In Utero Electroporation

Time-lapse Confocal Imaging of Migrating Neurons in Organotypic Slice Culture of Embryonic Mouse Brain Using In Utero Electroporation

배아 마우스 두뇌의 organotypic 슬라이스 문화에서 마이 그 레이션 뉴런의 저속 공 촛점 이미징<em&gt; Utero에서</em&gt; 일렉트로 포 레이션

In utero electroporation is a rapid and powerful approach to study the process of radial migration in the cerebral cortex of developing mouse embryos. It ...

Ex Utero Electroporation and Organotypic Slice Cultures of Embryonic Mouse Brains for Live-Imaging of Migrating GABAergic Interneurons

Ex Utero Electroporation and Organotypic Slice Cultures of Embryonic Mouse Brains for Live-Imaging of Migrating GABAergic Interneurons

전 Utero Electroporation 및 마이그레이션 GABAergic 수의 라이브 이미징 배아 마우스 두뇌의 Organotypic 조각 문화

GABAergic interneurons (INs) are critical components of neuronal networks that drive cognition and behavior. INs destined to populate the cortex migrate ...