Name: preparation of acute hippocampal slices from rats and transgenic mice for the study of synaptic alterations during aging and amyloid pathology
Uploaded: 2011-03-23T14:15:00
Duration: 14 min 57 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Preparation of Acute Hippocampal Slices from Rats and Transgenic Mice for the Study of Synaptic Alterations during Aging and Amyloid Pathology at JoVE.com

העבודה נתמכת על ידי NIH AG027297 מענק, פרס מחוט השדרה קנטאקי ואת פגיעת ראש אמון המחקר, מתנת קרן Kleberg.

<ol>
	<li>Norris, C. M., Halpain, S., Foster, T. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alterations+in+the+balance+of+protein+kinase/phosphatase+activities+parallel+reduced+synaptic+strength+during+aging.">Alterations in the balance of protein kinase/phosphatase activities parallel reduced synaptic strength during aging.</a> J Neurophysiol. 80, 1567-1570 (1998).</li><li>Norris, C. M., Korol, D. L., Foster, T. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Increased+susceptibility+to+induction+of+long-term+depression+and+long-term+potentiation+reversal+during+aging.">Increased susceptibility to induction of long-term depression and long-term potentiation reversal during aging.</a> J Neurosci. 16, 5382-5392 (1996).</li><li>Norris, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hippocampal+'zipper'+slice+studies+reveal+a+necessary+role+for+calcineurin+in+the+increased+activity+of+L-type+Ca(2+)+channels+with+aging.">Hippocampal 'zipper' slice studies reveal a necessary role for calcineurin in the increased activity of L-type Ca(2+) channels with aging.</a> Neurobiol Aging. 31, 328-338 (2010).</li><li>Burke, S. N., Barnes, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Senescent+synapses+and+hippocampal+circuit+dynamics.">Senescent synapses and hippocampal circuit dynamics.</a> Trends Neurosci. 33, 153-161 (2010).</li><li>Foster, T. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Calcium+homeostasis+and+modulation+of+synaptic+plasticity+in+the+aged+brain.">Calcium homeostasis and modulation of synaptic plasticity in the aged brain.</a> Aging Cell. 6, 319-325 (2007).</li><li>Foster, T. C., Norris, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Age-associated+changes+in+Ca(2+)-dependent+processes:+relation+to+hippocampal+synaptic+plasticity.">Age-associated changes in Ca(2+)-dependent processes: relation to hippocampal synaptic plasticity.</a> Hippocampus. 7, 602-612 (1997).</li><li>Thibault, O., Gant, J. C., Landfield, P. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Expansion+of+the+calcium+hypothesis+of+brain+aging+and+Alzheimer's+disease:+minding+the+store.">Expansion of the calcium hypothesis of brain aging and Alzheimer's disease: minding the store.</a> Aging Cell. 6, 307-317 (2007).</li><li>Demuro, A., Parker, I., Stutzmann, G. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Calcium+signaling+and+amyloid+toxicity+in+Alzheimer+disease.">Calcium signaling and amyloid toxicity in Alzheimer disease.</a> J Biol Chem. 285, 12463-12468 (2010).</li><li>Green, K. N., LaFerla, F. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Linking+calcium+to+Abeta+and+Alzheimer's+disease.">Linking calcium to Abeta and Alzheimer's disease.</a> Neuron. 59, 190-194 (2008).</li><li>Kumar, A., Thinschmidt, J. S., Foster, T. C., King, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aging+effects+on+the+limits+and+stability+of+long-term+synaptic+potentiation+and+depression+in+rat+hippocampal+area+CA1.">Aging effects on the limits and stability of long-term synaptic potentiation and depression in rat hippocampal area CA1.</a> J Neurophysiol. 98, 594-601 (2007).</li><li>Norris, C. M., Halpain, S., Foster, T. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reversal+of+age-related+alterations+in+synaptic+plasticity+by+blockade+of+L-type+Ca2++channels.">Reversal of age-related alterations in synaptic plasticity by blockade of L-type Ca2+ channels.</a> J Neurosci. 18, 3171-3179 (1998).</li><li>Norris, C. M., Scheff, S. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recovery+of+afferent+function+and+synaptic+strength+in+hippocampal+CA1+following+traumatic+brain+injury.">Recovery of afferent function and synaptic strength in hippocampal CA1 following traumatic brain injury.</a> J Neurotrauma. 26, 2269-2278 (2009).</li><li>Sama, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interleukin-1beta-dependent+signaling+between+astrocytes+and+neurons+depends+critically+on+astrocytic+calcineurin/NFAT+activity.">Interleukin-1beta-dependent signaling between astrocytes and neurons depends critically on astrocytic calcineurin/NFAT activity.</a> J Biol Chem. 283, 21953-21964 (2008).</li><li>Ye, H., Jalini, S., Mylvaganam, S., Carlen, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activation+of+large-conductance+Ca(2+)-activated+K(+)+channels+depresses+basal+synaptic+transmission+in+the+hippocampal+CA1+area+in+APP+(swe/ind)+TgCRND8+mice.">Activation of large-conductance Ca(2+)-activated K(+) channels depresses basal synaptic transmission in the hippocampal CA1 area in APP (swe/ind) TgCRND8 mice.</a> Neurobiol Aging. 31, 591-604 (2010).</li><li>Bear, M. F., Malenka, R. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synaptic+plasticity:+LTP+and+LTD.">Synaptic plasticity: LTP and LTD.</a> Curr Opin Neurobiol. 4, 389-399 (1994).</li><li>Foster, T. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Involvement+of+hippocampal+synaptic+plasticity+in+age-related+memory+decline.">Involvement of hippocampal synaptic plasticity in age-related memory decline.</a> Brain Res Brain Res Rev. 30, 236-249 (1999).</li><li>Foster, T. C., Kumar, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Susceptibility+to+induction+of+long-term+depression+is+associated+with+impaired+memory+in+aged+Fischer+344+rats.">Susceptibility to induction of long-term depression is associated with impaired memory in aged Fischer 344 rats.</a> Neurobiol Learn Mem. 87, 522-535 (2007).</li><li>Hsu, K. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alterations+in+the+balance+of+protein+kinase+and+phosphatase+activities+and+age-related+impairments+of+synaptic+transmission+and+long-term+potentiation.">Alterations in the balance of protein kinase and phosphatase activities and age-related impairments of synaptic transmission and long-term potentiation.</a> Hippocampus. 12, 787-802 (2002).</li><li>Vouimba, R. M., Foy, M. R., Foy, J. G., Thompson, R. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=17beta-estradiol+suppresses+expression+of+long-term+depression+in+aged+rats.">17beta-estradiol suppresses expression of long-term depression in aged rats.</a> Brain Res Bull. 53, 783-787 (2000).</li><li>Abdul, H. M., Furman, J. L., Sama, M. A., Mathis, D. M., Norris, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NFATs+and+Alzheimer's+Disease.">NFATs and Alzheimer's Disease.</a> Mol Cell Pharmacol. 2, 7-14 (2010).</li><li>Abdul, H. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cognitive+decline+in+Alzheimer's+disease+is+associated+with+selective+changes+in+calcineurin/NFAT+signaling.">Cognitive decline in Alzheimer's disease is associated with selective changes in calcineurin/NFAT signaling.</a> J Neurosci. 29, 12957-12969 (2009).</li><li>Anantharaman, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Beta-amyloid+mediated+nitration+of+manganese+superoxide+dismutase:+implication+for+oxidative+stress+in+a+APPNLH/NLH+X+PS-1P264L/P264L+double+knock-in+mouse+model+of+Alzheimer's+disease.">Beta-amyloid mediated nitration of manganese superoxide dismutase: implication for oxidative stress in a APPNLH/NLH X PS-1P264L/P264L double knock-in mouse model of Alzheimer's disease.</a> Am J Pathol. 168, 1608-1618 (2006).</li><li>Gengler, S., Hamilton, A., Holscher, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synaptic+plasticity+in+the+hippocampus+of+a+APP/PS1+mouse+model+of+Alzheimer's+disease+is+impaired+in+old+but+not+young+mice.">Synaptic plasticity in the hippocampus of a APP/PS1 mouse model of Alzheimer's disease is impaired in old but not young mice.</a> PLoS One. 5, e9764-e9764 (2010).</li><li>Stringer, J. L., Lothman, E. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+effects+of+extracellular+calcium+concentrations+on+hippocampal+pyramidal+cell+responses.">In vitro effects of extracellular calcium concentrations on hippocampal pyramidal cell responses.</a> Exp Neurol. 101, 132-146 (1988).</li><li>Landfield, P. W., Pitler, T. A., Applegate, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effects+of+high+Mg2+-to-Ca2++ratios+on+frequency+potentiation+in+hippocampal+slices+of+young+and+aged+rats.">The effects of high Mg2+-to-Ca2+ ratios on frequency potentiation in hippocampal slices of young and aged rats.</a> J Neurophysiol. 56, 797-811 (1986).</li><li>Ames, A., Sakanoue, M., Endo, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NA,+K,+CA,+MG,+AND+C1+CONCENTRATIONS+IN+CHOROID+PLEXUS+FLUID+AND+CISTERNAL+FLUID+COMPARED+WITH+PLASMA+ULTRAFILTRATE.">NA, K, CA, MG, AND C1 CONCENTRATIONS IN CHOROID PLEXUS FLUID AND CISTERNAL FLUID COMPARED WITH PLASMA ULTRAFILTRATE.</a> J Neurophysiol. 27, 672-681 (1964).</li><li>Gant, J. C., Sama, M. M., Landfield, P. W., Thibault, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Early+and+simultaneous+emergence+of+multiple+hippocampal+biomarkers+of+aging+is+mediated+by+Ca2+-induced+Ca2++release.">Early and simultaneous emergence of multiple hippocampal biomarkers of aging is mediated by Ca2+-induced Ca2+ release.</a> J Neurosci. 26, 3482-3490 (2006).</li><li>Thibault, O., Hadley, R., Landfield, P. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Elevated+postsynaptic+[Ca2+]i+and+L-type+calcium+channel+activity+in+aged+hippocampal+neurons:+relationship+to+impaired+synaptic+plasticity.">Elevated postsynaptic [Ca2+]i and L-type calcium channel activity in aged hippocampal neurons: relationship to impaired synaptic plasticity.</a> J Neurosci. 21, 9744-9756 (2001).</li><li>Thibault, O., Landfield, P. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Increase+in+single+L-type+calcium+channels+in+hippocampal+neurons+during+aging.">Increase in single L-type calcium channels in hippocampal neurons during aging.</a> Science. 272, 1017-1020 (1996).</li><li>Stutzmann, G. E., Caccamo, A., LaFerla, F. M., Parker, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dysregulated+IP3+signaling+in+cortical+neurons+of+knock-in+mice+expressing+an+Alzheimer's-linked+mutation+in+presenilin1+results+in+exaggerated+Ca2++signals+and+altered+membrane+excitability.">Dysregulated IP3 signaling in cortical neurons of knock-in mice expressing an Alzheimer's-linked mutation in presenilin1 results in exaggerated Ca2+ signals and altered membrane excitability.</a> J Neurosci. 24, 508-513 (2004).</li><li>Stutzmann, G. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enhanced+ryanodine+receptor+recruitment+contributes+to+Ca2++disruptions+in+young,+adult,+and+aged+Alzheimer's+disease+mice.">Enhanced ryanodine receptor recruitment contributes to Ca2+ disruptions in young, adult, and aged Alzheimer's disease mice.</a> J Neurosci. 26, 5180-5189 (2006).</li><li>Lee, H. K., Min, S. S., Gallagher, M., Kirkwood, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NMDA+receptor-independent+long-term+depression+correlates+with+successful+aging+in+rats.">NMDA receptor-independent long-term depression correlates with successful aging in rats.</a> Nat Neurosci. 8, 1657-1659 (2005).</li><li>McNaughton, B. L., Douglas, R. M., Goddard, G. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synaptic+enhancement+in+fascia+dentata:+cooperativity+among+coactive+afferents.">Synaptic enhancement in fascia dentata: cooperativity among coactive afferents.</a> Brain Res. 157, 277-293 (1978).</li></ol>

ההפקה של המאמר וידאו זה היה בחסות Leica Microsystems.

הצעדים המפורטים בפרוטוקול זה יעזור להבטיח כי והניתוחים המוח מתבצעות לפחות במהירות וביעילות בגיל, כמו חולדות מבוגרים צעירים. כמו כן אנו מספקים פירוט מספיק המתחיל להקים מחקרים משלהם פרוסה על LTP ו LTD. אם חקירה נוספת של הזדקנות לספירה שינויים בתפקוד הפלסטיות הסינפטית הוא אחד היעדים שלך, יש לפחות שתי בעיות מתודולוגיות אחרות, שנאמר לעיל, כי מגיע שיקול נוסף. ראשית, מספר מעבדות הראו כי Ca 2 +: Mg2 + יחס הקלטה ACSF יכולה להיות השפעה ניכרת על הפלסטיות הסינפטית אינדוקציה בתוך פרוסות בהיפוקמפוס 2,10,24,25. ב CSF היונקים, Ca 2 +: Mg2 יחס + הוא בערך (למשל לראות 26). עם זאת, ACSF Ca 2 +: Mg2 + יחס קרוב 2 משמשים בדרך כלל מחקרים פרוסה של הפונקציה ואת הפלסטיות הסינפטית. במחקרים הראשונים, הנוהג הזה היה מותאם כנראה כדי לייעל את האינדוקציה של LTP, אז לאחר מכן הפכו לדבר שבשגרה עבור כל המחקרים הפלסטיות. עם זאת, בפועל זה יכול להיות בעייתי במחקרים הזדקנות לספירה בגלל הבדלים היטב מאופיין ב Ca העצבית תקנה 2 +. באופן ספציפי, Ca 2 + ו - זרם / או Ca 2 +-Induced Ca 2 + שחרור מוגבה בחולדות בגיל ו / או מודל עכברים לספירה במהלך ההפעלה העצבית 3,27-31. אינדוקציה של בע&quot;מ הוא רגיש במיוחד שינויים עדינים ACSF Ca 2 + רמות. שלנו פרוטוקול, אשר משתמשת 2mm Ca 2 + ו - 2 מ&quot;מ Mg2 +, בדרך כלל תוצאות בע&quot;מ עבור בני, אבל לא צעירים בעלי חיים מבוגר 2, ואילו מחקרים באמצעות Ca 2 +: Mg2 + יחס קרוב יותר לשני, הבחינו בע&quot;מ חזקים מבוגרים העדר הבדל גיל 2,10 או בשילוב עם בע&quot;מ מופחת בחולדות בגיל 32. תצפיות אלו מדגישים את הצורך לשקול היטב ACSF Ca 2 + ו - Mg2 + רמות כאשר משווים Ca 2 + תלויי פלסטיות בבעלי חיים מבוגרים בגילאים צעירים. הבעיה המתודולוגית השנייה נוגעת תלות חזקה של LTP על שלילת קוטביות postsynaptic 33 ואפשרי הזדקנות / גנוטיפ הבדלי חוזק סינפטי. בניסוי LTP הבסיס טיפוסי, עוצמת הגירוי LTP מותאם בדרך כלל לייצר וחצי מקסימלי (או שלושה רבעים מקסימלית) משרעת EPSP. הבעיה היא כי פוטנציאל חולדות ומעלה APP/PS1 עכברים בדרך כלל מופחת להראות חוזק סינפטי יחסית עמיתיהם הצעירים ו / או פרא שלהם סוג, כלומר EPSP ערכי הבסיס יהיה גם קטן יותר אצל חולדות ומעלה APP/PS1 עכברים. EPSPs קטנים עשויים לתרגם שלילת קוטביות פחות במהלך גירוי LTP, וכתוצאה מכך ההסתברות מופחת עבור גרימת LTP 33. בגלל לבלבל את הפוטנציאל הזה, קשה לקבוע אם החיות האלה התערוכה גירעון התפוקה, גירעון פלסטיות או שניהם. כלומר, מנגנונים אינדוקציה ב-LTP בגיל ו / או APP/PS1 עכברים עשויה להיות שלם פונקציונלי (אין הגירעון הפלסטיות), אך מגורה מספיק (גירעון התפוקה) בתנאים אלה. הבחנה זו היא קריטית, כמו מנגנונים התפוקה מנגנונים פלסטיות עשויים להגיב בצורה שונה לטיפול תרופתי ספציפי. אנחנו מנסים למזער את ההשפעה של הפחתת התפוקה על ידי אינדוקציה LTP נרמול את המשרעת EPSP באותה רמה (למשל 1 mV) פרוסות על פני כל גירוי לפני LTP. אסטרטגיות אחרות עשויות להיות יעילות גם כן (למשל, שימוש של מתח או מהדק הנוכחית להשוות את פוטנציאל הממברנה בקבוצות במהלך גירוי LTP), וכן יש לשקול כאשר חוקרים LTP אלה במודלים של בעלי חיים.

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> שם מגיב </td><td> חברה </td><td> מספר קטלוגי </td></tr><tr><td> NaCl </td><td> דיג </td><td> BP358-1 </td></tr><tr><td> KCl </td><td> דיג </td><td> BP366-500 </td></tr><tr><td> KH 2 PO 4 (monobasic) </td><td> סיגמא </td><td> P5379-100 גרם </td></tr><tr><td> MgSO 4 </td><td> סיגמא </td><td> M2643-500 גרם </td></tr><tr><td> CaCl 2 (dihydrate) </td><td> סיגמא </td><td> C3306-250 </td></tr><tr><td> NaHCO 3 </td><td> דיג </td><td> S233-500 </td></tr><tr><td> C 6 H 12 O 6 (דקסטרוז) </td><td> דיג </td><td> BP350-1 </td></tr></tbody></table> ריאגנטים טבלה 1. הנדרש <table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> שם הציוד </td><td> חברה </td><td> מספר קטלוגי </td><td> תגובות </td></tr><tr><td> Erlenmeyer צלוחיות </td><td> דיג </td><td> FB-500-2000 FB-500-1000 </td><td></td></tr><tr><td> אקווריום Bubbler </td><td></td><td></td><td> משמש עבור התקשורת oxygenating. ניתן להשיג בחנויות לחיות מחמד ביותר </td></tr><tr><td> 50 מ&quot;ל כוס זכוכית </td><td> דיג </td><td> 02-540G </td><td> עבור storarge המוח ACSF </td></tr><tr><td> Parafilm </td><td> דיג </td><td> 13-374-10 </td><td></td></tr><tr><td> בעלי חיים קטנים גיליוטינה </td><td> העולם Precision מכשירים (WPI) </td><td> DCAP-M </td><td></td></tr><tr><td> מגבת נייר שטוח </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> # 11 נוצה להב כירורגי </td><td> דיג </td><td> 08-916-5B </td><td></td></tr><tr><td> Beebee עצם מספריים </td><td> המדע כלים פיין (FST) </td><td> 16044-10 </td><td></td></tr><tr><td> Lempert Rongeurs </td><td> Roboz </td><td> RS-8321 </td><td> השתמש לחולדות </td></tr><tr><td> פרידמן, פירסון Rongeurs </td><td> FST </td><td> 16020-14 </td><td> השתמש עבור עכברים או חולדות </td></tr><tr><td> ההיפוקמפוס כלי </td><td> FST </td><td> 10099-15 </td><td></td></tr><tr><td> כפית </td><td></td><td></td><td> כפית פלסטיק יעשה </td></tr><tr><td> מרית </td><td> דיג </td><td> 21-401-25A </td><td> מרית </td></tr><tr><td> איריס כירורגי מספריים </td><td> FST </td><td> 14058-09 </td><td></td></tr><tr><td> העברת pipets פלסטיק </td><td> דיג </td><td> 13-711-43 </td><td></td></tr><tr><td> 110mm Whatman נייר הסינון </td><td> דיג </td><td> 09-805E </td><td> חתול Whatman. 1001-110 </td></tr><tr><td> זכוכית צלחת פטרי </td><td> דיג </td><td></td><td></td></tr><tr><td> לייקה VT1000P ידני רטט Microtome </td><td> Vibratome </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 0.1mm FA-10 נוצה S להב </td><td> טד פלה </td><td> 121-9 </td><td> 0.1mm FA-10 נוצה S להב </td></tr><tr><td> בורוסיליקט זכוכית Pipet פסטר (עם הנורה גומי) </td><td> דיג </td><td> 13-678-20A </td><td> להעברת פרוסות: עצה שבור לסירוגין חום מלוטש לפתיחת גדול </td></tr><tr><td> 35 מ&quot;מ תרבות Polysterine צלחת </td><td> קורנינג </td><td> 430588 </td><td> משמש לאיסוף פרוסות לאחר דיסקציה </td></tr></tbody></table> טבלה 2. כלים וחומרים לנתיחה <table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> ציוד / חומרים </td><td> חברה </td><td> הערות (אופציונלי) </td></tr><tr><td> אחזקות קאמרית </td><td> Custom Built </td><td></td></tr><tr><td> P-97 אופקי פיפטה פולר </td><td> סאטר Instrument ושות </td><td></td></tr><tr><td> בידוד רעידות השולחן </td><td> טכני ייצור Corporation (TMC) </td><td></td></tr><tr><td> כלוב פאראדיי </td><td> מותאמים אישית, שנבנו </td><td></td></tr><tr><td> פיירקס Aspirator בקבוק עם אקדח התחתונה (מוצר # 1220-1L) </td><td> קורנינג </td><td></td></tr><tr><td> Gravity-contolled להגדיר IV עם הרגולטור (מוצר # 2C8891) </td><td> בקסטר </td><td></td></tr><tr><td> שואב אבק מרכזי הקו </td><td></td><td> זמין במעבדות המודרניות ביותר </td></tr><tr><td> 95% O 2 / 5% CO 2 מערבבים גז </td><td> אגרהt-גרוס ושות&#39; </td><td></td></tr><tr><td> TygonTM צינורות מעבדה עבור O 2 / CO 2 משלוח </td><td> פישר סיינטיפיק </td><td> אינו רעיל, ללא חמצון, מגיע במגוון גדלים. </td></tr><tr><td> Eclipse מיקרוסקופ E600FN </td><td> ניקון </td><td> עם יעדים 10x ו 40X, ליד מסנן infared, ו-GFP, DS-Red2 מסננים </td></tr><tr><td> מגניב הצמד ES מצלמה דיגיטלית </td><td> Photometrics </td><td> מגניב הצמד ES מצלמה דיגיטלית </td></tr><tr><td> X-Cite הפנס פלורסנט </td><td> EXFO </td><td> X-Cite הפנס פלורסנט </td></tr><tr><td> מיקרוסקופ רציף </td><td> Siskiyou </td><td> אישית התאספו </td></tr><tr><td> RC-22 הצוללת הקלטה קאמרית (מוצר # 64-0228) </td><td> וורנר מכשירים (WI) </td><td> דורש P-1 ו פלטפורמה הבמה מתאם (מוצר # 64-0277 מ וורנר) </td></tr><tr><td> TC2BIP 2/3Ch בקר טמפרטורה </td><td> תא Microcontrols </td><td> TC2BIP 2/3Ch בקר טמפרטורה </td></tr><tr><td> 4 ידני ציר מיניאטורות מניפולטור </td><td> Siskiyou </td><td></td></tr><tr><td> אירידיום פלטינום Wire (0.002 ב) (פריט # PTT0203) </td><td> WPI </td><td></td></tr><tr><td> A365 Stimulus אייסולטור </td><td> WPI </td><td> A365 Stimulus אייסולטור </td></tr><tr><td> Multiclamp מגבר 700b </td><td> אקסון מכשירים </td><td></td></tr><tr><td> Digidata 1322A-A / D ממיר </td><td> אקסון מכשירים </td><td></td></tr><tr><td> PClamp תוכנה </td><td> אקסון מכשירים </td><td></td></tr><tr><td> מחשב אישי (פנטיום 4) </td><td> Dell </td><td></td></tr></tbody></table> 3. טבלת Electrophysiology ציוד וחומרים

preparation of acute hippocampal slices from rats and transgenic mice for the study of synaptic alterations during aging and amyloid pathology

הכנת בהיפוקמפוס מכרסם פרוסה היא אולי הכלי הנמצא בשימוש הנרחב ביותר על חקירת פונקציה הפלסטיות הסינפטית יונקים. ההיפוקמפוס ניתן לחלץ בקלות ובמהירות מן חולדות ועכברים ופרוסות להישאר קיימא עבור שעות בנוזל השדרתי מחומצן מלאכותית. יתר על כן, טכניקות בסיסיות electrophysisologic מוחלים בקלות החקירה של תפקוד סינפטי של פרוסות בהיפוקמפוס סיפקו כמה סמנים הטוב ביותר עבור ליקויים קוגניטיביים. פרוסה בהיפוקמפוס פופולרי במיוחד עבור המחקר של מנגנוני הפלסטיות הסינפטית המעורבים בלמידה ובזיכרון. שינויים אינדוקציה של potentiation לטווח ארוך ודיכאון (LTP ו LTD) יעילות הסינפטית בתוך פרוסות בהיפוקמפוס (או חוסר שלה) משמשים לעתים קרובות כדי לתאר את הפנוטיפ נוירולוגית של חיות קוגניטיבית ראייה ו / או להעריך את מנגנון הפעולה של nootropic תרכובות. מאמר זה מתאר את ההליכים בהם אנו משתמשים להכנת פרוסות בהיפוקמפוס של חולדות העכברים הטרנסגניים לחקר שינויים סינפטיים הקשורים להזדקנות המוח לבין מחלת האלצהיימר (AD) 1-3. שימוש של חולדות בגילאים מודל עכברים לספירה יכול להציג קבוצה ייחודית של אתגרים החוקרים רגילים להשתמש חולדות צעירות ו / או עכברים המחקר שלהם. חולדות גיל יש גולגלות עבה רקמת חיבור קשה יותר מאשר חולדות ועכברים הצעיר, אשר יכול לעכב מיצוי המוח ו / או דיסקציה וכתוצאה מכך לשלול או להגזים אמיתי גיל הבדלים בתפקוד הפלסטיות הסינפטית ו. הזדקנות עמילואיד הפתולוגיה אף עלולה להחמיר פגיעה בהיפוקמפוס מתמשכת במהלך ההליך לנתיחה, שוב סיבוך כלשהו להסיק מסקנות הערכה פיזיולוגית. כאן, אנו דנים הצעדים שננקטו במהלך ההליך לנתיחה כדי למזער את הבעיות הללו. דוגמאות של תגובות הסינפטי שנרכש &quot;בריא&quot; או &quot;לא בריא&quot; פרוסות של חולדות ועכברים מסופקים, וכן נציג ניסויים הפלסטיות הסינפטית. ההשפעה האפשרית של גורמים מתודולוגיים אחרים על תפקוד סינפטי אלה במודלים של בעלי חיים (למשל פתרון הקלטה הרכיבים, הפרמטרים גירוי) הם דנו גם. למרות ההתמקדות של מאמר זה היא על השימוש של חולדות ומעלה העכברים הטרנסגניים, מתחילים לחתוך הפיזיולוגיה צריך למצוא את הפרטים כאן מספיק כדי להתחיל לעבוד על מחקרים משלהם, באמצעות מגוון של מודלים מכרסם.

Watch this Scientific Journal Video about Preparation of Acute Hippocampal Slices from Rats and Transgenic Mice for the Study of Synaptic Alterations during Aging and Amyloid Pathology at JoVE.com

Preparation of Acute Hippocampal Slices from Rats and Transgenic Mice for the Study of Synaptic Alterations during Aging and Amyloid Pathology

מאמר זה מתאר פרוצדורות להכנת פרוסות בהיפוקמפוס של חולדות העכברים הטרנסגניים לחקר שינויים סינפטיים הקשורים להזדקנות המוח הקשורים לגיל מחלות ניווניות כגון מחלת אלצהיימר.

הכנת פרוסות בהיפוקמפוס של חולדות חריפה העכברים הטרנסגניים לחקר שינויים Synaptic במהלך ההזדקנות עמילואיד פתולוגיה

The rodent hippocampal slice preparation is perhaps the most broadly used tool for investigating mammalian synaptic function and plasticity. The ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Preparation of Oligomeric &beta;-amyloid1-42 and Induction of Synaptic Plasticity Impairment on Hippocampal Slices

Preparation of Oligomeric ÃƒÅ½Ã‚Â²-amyloid1-42 and Induction of Synaptic Plasticity Impairment on Hippocampal Slices

הכנת Oligomeric β עמילואיד 1-42 ו אינדוקציה של ירידת ערך הפלסטיות הסינפטית על Slices בהיפוקמפוס

Impairment of synaptic connections is likely to underlie the subtle amnesic changes occurring at the early stages of Alzheimer s Disease (AD). ...

Vibrodissociation of Neurons from Rodent Brain Slices to Study Synaptic Transmission and Image Presynaptic Terminals

Vibrodissociation של נוירונים בין פרוסות המוח מכרסמים לחקר הילוכים Synaptic ותמונה מסופי Presynaptic

Mechanical dissociation of neurons from the central nervous system has the advantage that presynaptic boutons remain attached to the isolated neuron of ...

Preparation of Acute Subventricular Zone Slices for Calcium Imaging

הכנת Slices האזור Subventricular החריף להדמית סיד

The subventricular zone (SVZ) is one of the two neurogenic zones in the postnatal brain. The SVZ contains densely packed cells, including neural ...

Dual Electrophysiological Recordings of Synaptically-evoked Astroglial and Neuronal Responses in Acute Hippocampal Slices

קלטות אלקטרו כפולות של תגובות Astroglial ועצביות עוררו-synaptically בפרוסות ביפוקמפוס חריפות

Astrocytes form together with neurons tripartite synapses, where they integrate and modulate neuronal activity. Indeed, astrocytes sense neuronal inputs ...

Stereotaxic Infusion of Oligomeric Amyloid-beta into the Mouse Hippocampus

עירוי stereotaxic של Oligomeric עמילואיד-ביתא להיפוקמפוס העכבר

Alzheimer&#8217;s disease is a neurodegenerative disease affecting the aging population. A key neuropathological feature of the disease is the ...

Investigation of Synaptic Tagging/Capture and Cross-capture using Acute Hippocampal Slices from Rodents

חקירה של Synaptic תיוג / לכידה וצלב-לכידה באמצעות חריפות בהיפוקמפוס פרוסות ממכרסמים

Synaptic tagging and capture (STC) and cross-tagging are two important mechanisms at cellular level that explain how synapse-specificity and associativity ...

Preparation of Acute Brain Slices Using an Optimized N-Methyl-D-glucamine Protective Recovery Method

Preparation of Acute Brain Slices Using an Optimized N-Methyl-D-glucamine Protective Recovery Method

הכנת פרוסות המוח חריפה באמצעות אופטימיזציה N-מתיל-D-שיטת שחזור מגן glucamine

This protocol is a practical guide to the N-methyl-D-glucamine (NMDG) protective recovery method of brain slice preparation. Numerous recent studies have ...

Recording Synaptic Plasticity in Acute Hippocampal Slices Maintained in a Small-volume Recycling-, Perfusion-, and Submersion-type Chamber System

הקלטה הפלסטיות הסינפטית בפרוסות בהיפוקמפוס חריפה, בהשתתפות של מיחזור - בנפח מצומצם, זלוף- ומערכת ועלייתו-סוג תא

Even though experiments on brain slices have been in use since 1951, problems remain that reduce the probability of achieving a stable and successful ...

Single Synapse Indicators of Glutamate Release and Uptake in Acute Brain Slices from Normal and Huntington Mice

בודד סינפסה אינדיקטורים של גלוטמט שחרור ספיגה בפרוסות המוח חריפה מעכברים נורמלי הנטינגטון

Synapses are highly compartmentalized functional units that operate independently on each other. In Huntington&#39;s disease (HD) and other ...

Preparation of Acute Human Hippocampal Slices for Electrophysiological Recordings

הכנת פרוסות היפוקמפוס אנושיות חריפות להקלטות אלקטרופיזיולוגיות

Epilepsy affects about 1% of the world population and leads to a severe decrease in quality of life due to ongoing seizures as well as high risk for ...