Name: preparation of acute hippocampal slices from rats and transgenic mice for the study of synaptic alterations during aging and amyloid pathology
Uploaded: 2011-03-23T14:15:00
Duration: 14 min 57 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Preparation of Acute Hippocampal Slices from Rats and Transgenic Mice for the Study of Synaptic Alterations during Aging and Amyloid Pathology at JoVE.com

Работа выполнена при поддержке гранта NIH AG027297, награду от штата Кентукки спинного мозга и травма головы Research Trust, и подарок от Клберг Foundation.

<ol>
	<li>Norris, C. M., Halpain, S., Foster, T. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alterations+in+the+balance+of+protein+kinase/phosphatase+activities+parallel+reduced+synaptic+strength+during+aging.">Alterations in the balance of protein kinase/phosphatase activities parallel reduced synaptic strength during aging.</a> J Neurophysiol. 80, 1567-1570 (1998).</li><li>Norris, C. M., Korol, D. L., Foster, T. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Increased+susceptibility+to+induction+of+long-term+depression+and+long-term+potentiation+reversal+during+aging.">Increased susceptibility to induction of long-term depression and long-term potentiation reversal during aging.</a> J Neurosci. 16, 5382-5392 (1996).</li><li>Norris, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hippocampal+'zipper'+slice+studies+reveal+a+necessary+role+for+calcineurin+in+the+increased+activity+of+L-type+Ca(2+)+channels+with+aging.">Hippocampal 'zipper' slice studies reveal a necessary role for calcineurin in the increased activity of L-type Ca(2+) channels with aging.</a> Neurobiol Aging. 31, 328-338 (2010).</li><li>Burke, S. N., Barnes, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Senescent+synapses+and+hippocampal+circuit+dynamics.">Senescent synapses and hippocampal circuit dynamics.</a> Trends Neurosci. 33, 153-161 (2010).</li><li>Foster, T. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Calcium+homeostasis+and+modulation+of+synaptic+plasticity+in+the+aged+brain.">Calcium homeostasis and modulation of synaptic plasticity in the aged brain.</a> Aging Cell. 6, 319-325 (2007).</li><li>Foster, T. C., Norris, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Age-associated+changes+in+Ca(2+)-dependent+processes:+relation+to+hippocampal+synaptic+plasticity.">Age-associated changes in Ca(2+)-dependent processes: relation to hippocampal synaptic plasticity.</a> Hippocampus. 7, 602-612 (1997).</li><li>Thibault, O., Gant, J. C., Landfield, P. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Expansion+of+the+calcium+hypothesis+of+brain+aging+and+Alzheimer's+disease:+minding+the+store.">Expansion of the calcium hypothesis of brain aging and Alzheimer's disease: minding the store.</a> Aging Cell. 6, 307-317 (2007).</li><li>Demuro, A., Parker, I., Stutzmann, G. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Calcium+signaling+and+amyloid+toxicity+in+Alzheimer+disease.">Calcium signaling and amyloid toxicity in Alzheimer disease.</a> J Biol Chem. 285, 12463-12468 (2010).</li><li>Green, K. N., LaFerla, F. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Linking+calcium+to+Abeta+and+Alzheimer's+disease.">Linking calcium to Abeta and Alzheimer's disease.</a> Neuron. 59, 190-194 (2008).</li><li>Kumar, A., Thinschmidt, J. S., Foster, T. C., King, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aging+effects+on+the+limits+and+stability+of+long-term+synaptic+potentiation+and+depression+in+rat+hippocampal+area+CA1.">Aging effects on the limits and stability of long-term synaptic potentiation and depression in rat hippocampal area CA1.</a> J Neurophysiol. 98, 594-601 (2007).</li><li>Norris, C. M., Halpain, S., Foster, T. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reversal+of+age-related+alterations+in+synaptic+plasticity+by+blockade+of+L-type+Ca2++channels.">Reversal of age-related alterations in synaptic plasticity by blockade of L-type Ca2+ channels.</a> J Neurosci. 18, 3171-3179 (1998).</li><li>Norris, C. M., Scheff, S. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recovery+of+afferent+function+and+synaptic+strength+in+hippocampal+CA1+following+traumatic+brain+injury.">Recovery of afferent function and synaptic strength in hippocampal CA1 following traumatic brain injury.</a> J Neurotrauma. 26, 2269-2278 (2009).</li><li>Sama, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interleukin-1beta-dependent+signaling+between+astrocytes+and+neurons+depends+critically+on+astrocytic+calcineurin/NFAT+activity.">Interleukin-1beta-dependent signaling between astrocytes and neurons depends critically on astrocytic calcineurin/NFAT activity.</a> J Biol Chem. 283, 21953-21964 (2008).</li><li>Ye, H., Jalini, S., Mylvaganam, S., Carlen, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activation+of+large-conductance+Ca(2+)-activated+K(+)+channels+depresses+basal+synaptic+transmission+in+the+hippocampal+CA1+area+in+APP+(swe/ind)+TgCRND8+mice.">Activation of large-conductance Ca(2+)-activated K(+) channels depresses basal synaptic transmission in the hippocampal CA1 area in APP (swe/ind) TgCRND8 mice.</a> Neurobiol Aging. 31, 591-604 (2010).</li><li>Bear, M. F., Malenka, R. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synaptic+plasticity:+LTP+and+LTD.">Synaptic plasticity: LTP and LTD.</a> Curr Opin Neurobiol. 4, 389-399 (1994).</li><li>Foster, T. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Involvement+of+hippocampal+synaptic+plasticity+in+age-related+memory+decline.">Involvement of hippocampal synaptic plasticity in age-related memory decline.</a> Brain Res Brain Res Rev. 30, 236-249 (1999).</li><li>Foster, T. C., Kumar, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Susceptibility+to+induction+of+long-term+depression+is+associated+with+impaired+memory+in+aged+Fischer+344+rats.">Susceptibility to induction of long-term depression is associated with impaired memory in aged Fischer 344 rats.</a> Neurobiol Learn Mem. 87, 522-535 (2007).</li><li>Hsu, K. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alterations+in+the+balance+of+protein+kinase+and+phosphatase+activities+and+age-related+impairments+of+synaptic+transmission+and+long-term+potentiation.">Alterations in the balance of protein kinase and phosphatase activities and age-related impairments of synaptic transmission and long-term potentiation.</a> Hippocampus. 12, 787-802 (2002).</li><li>Vouimba, R. M., Foy, M. R., Foy, J. G., Thompson, R. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=17beta-estradiol+suppresses+expression+of+long-term+depression+in+aged+rats.">17beta-estradiol suppresses expression of long-term depression in aged rats.</a> Brain Res Bull. 53, 783-787 (2000).</li><li>Abdul, H. M., Furman, J. L., Sama, M. A., Mathis, D. M., Norris, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NFATs+and+Alzheimer's+Disease.">NFATs and Alzheimer's Disease.</a> Mol Cell Pharmacol. 2, 7-14 (2010).</li><li>Abdul, H. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cognitive+decline+in+Alzheimer's+disease+is+associated+with+selective+changes+in+calcineurin/NFAT+signaling.">Cognitive decline in Alzheimer's disease is associated with selective changes in calcineurin/NFAT signaling.</a> J Neurosci. 29, 12957-12969 (2009).</li><li>Anantharaman, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Beta-amyloid+mediated+nitration+of+manganese+superoxide+dismutase:+implication+for+oxidative+stress+in+a+APPNLH/NLH+X+PS-1P264L/P264L+double+knock-in+mouse+model+of+Alzheimer's+disease.">Beta-amyloid mediated nitration of manganese superoxide dismutase: implication for oxidative stress in a APPNLH/NLH X PS-1P264L/P264L double knock-in mouse model of Alzheimer's disease.</a> Am J Pathol. 168, 1608-1618 (2006).</li><li>Gengler, S., Hamilton, A., Holscher, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synaptic+plasticity+in+the+hippocampus+of+a+APP/PS1+mouse+model+of+Alzheimer's+disease+is+impaired+in+old+but+not+young+mice.">Synaptic plasticity in the hippocampus of a APP/PS1 mouse model of Alzheimer's disease is impaired in old but not young mice.</a> PLoS One. 5, e9764-e9764 (2010).</li><li>Stringer, J. L., Lothman, E. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+effects+of+extracellular+calcium+concentrations+on+hippocampal+pyramidal+cell+responses.">In vitro effects of extracellular calcium concentrations on hippocampal pyramidal cell responses.</a> Exp Neurol. 101, 132-146 (1988).</li><li>Landfield, P. W., Pitler, T. A., Applegate, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effects+of+high+Mg2+-to-Ca2++ratios+on+frequency+potentiation+in+hippocampal+slices+of+young+and+aged+rats.">The effects of high Mg2+-to-Ca2+ ratios on frequency potentiation in hippocampal slices of young and aged rats.</a> J Neurophysiol. 56, 797-811 (1986).</li><li>Ames, A., Sakanoue, M., Endo, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NA,+K,+CA,+MG,+AND+C1+CONCENTRATIONS+IN+CHOROID+PLEXUS+FLUID+AND+CISTERNAL+FLUID+COMPARED+WITH+PLASMA+ULTRAFILTRATE.">NA, K, CA, MG, AND C1 CONCENTRATIONS IN CHOROID PLEXUS FLUID AND CISTERNAL FLUID COMPARED WITH PLASMA ULTRAFILTRATE.</a> J Neurophysiol. 27, 672-681 (1964).</li><li>Gant, J. C., Sama, M. M., Landfield, P. W., Thibault, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Early+and+simultaneous+emergence+of+multiple+hippocampal+biomarkers+of+aging+is+mediated+by+Ca2+-induced+Ca2++release.">Early and simultaneous emergence of multiple hippocampal biomarkers of aging is mediated by Ca2+-induced Ca2+ release.</a> J Neurosci. 26, 3482-3490 (2006).</li><li>Thibault, O., Hadley, R., Landfield, P. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Elevated+postsynaptic+[Ca2+]i+and+L-type+calcium+channel+activity+in+aged+hippocampal+neurons:+relationship+to+impaired+synaptic+plasticity.">Elevated postsynaptic [Ca2+]i and L-type calcium channel activity in aged hippocampal neurons: relationship to impaired synaptic plasticity.</a> J Neurosci. 21, 9744-9756 (2001).</li><li>Thibault, O., Landfield, P. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Increase+in+single+L-type+calcium+channels+in+hippocampal+neurons+during+aging.">Increase in single L-type calcium channels in hippocampal neurons during aging.</a> Science. 272, 1017-1020 (1996).</li><li>Stutzmann, G. E., Caccamo, A., LaFerla, F. M., Parker, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dysregulated+IP3+signaling+in+cortical+neurons+of+knock-in+mice+expressing+an+Alzheimer's-linked+mutation+in+presenilin1+results+in+exaggerated+Ca2++signals+and+altered+membrane+excitability.">Dysregulated IP3 signaling in cortical neurons of knock-in mice expressing an Alzheimer's-linked mutation in presenilin1 results in exaggerated Ca2+ signals and altered membrane excitability.</a> J Neurosci. 24, 508-513 (2004).</li><li>Stutzmann, G. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enhanced+ryanodine+receptor+recruitment+contributes+to+Ca2++disruptions+in+young,+adult,+and+aged+Alzheimer's+disease+mice.">Enhanced ryanodine receptor recruitment contributes to Ca2+ disruptions in young, adult, and aged Alzheimer's disease mice.</a> J Neurosci. 26, 5180-5189 (2006).</li><li>Lee, H. K., Min, S. S., Gallagher, M., Kirkwood, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NMDA+receptor-independent+long-term+depression+correlates+with+successful+aging+in+rats.">NMDA receptor-independent long-term depression correlates with successful aging in rats.</a> Nat Neurosci. 8, 1657-1659 (2005).</li><li>McNaughton, B. L., Douglas, R. M., Goddard, G. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synaptic+enhancement+in+fascia+dentata:+cooperativity+among+coactive+afferents.">Synaptic enhancement in fascia dentata: cooperativity among coactive afferents.</a> Brain Res. 157, 277-293 (1978).</li></ol>

Производство видео-статья была организована Leica Microsystems.

Действия, описанные в этом протоколе поможет гарантировать, что мозг вскрытия проводятся по крайней мере так же быстро и эффективно в возрасте, как у молодых взрослых крыс. Мы также предоставляем достаточно подробно для начинающих создавать свои собственные исследования слайса на LTP и LTD. Если дальнейшие исследования старения и AD изменения в синаптической пластичности функции и является одной из ваших целей, Есть по крайней мере, два других методологических вопросов, было указано выше, которые заслуживают дальнейшего рассмотрения. Во-первых, несколько лабораторий, показали, что Са 2 +: Mg 2 + отношение в записи ACSF может иметь заметное влияние на индукции синаптической пластичности в срезах гиппокампа 2,10,24,25. В млекопитающих CSF, Ca 2 +: Mg 2 + соотношение примерно один (см., например, 26). Тем не менее, ACSF Ca 2 +: Mg 2 + отношения ближе к 2 обычно используются в часть исследования синаптической функции и пластичности. В ранних исследованиях, эта практика, вероятно, приспособлена для оптимизации индукции LTP, то впоследствии стали обычным делом для всех пластичности исследований. Однако эта практика может быть проблематичным в процессе старения и AD исследованиям, потому что хорошо характеризуется различиями в нейронных Са 2 + регулирования. В частности, Са 2 + притока и / или Са 2 +-индуцированной Са 2 +-релиз повышен у старых крыс и / или мыши во время нашей эры модель нейронной активации 3,27-31. Индукция ООО особенно чувствительны к тонким изменениям в ACSF Са 2 + уровня. Наш протокол, который использует 2 мМ Са 2 + и 2 мМ Mg 2 +, который обычно приводит к ООО для престарелых, но не молодых взрослых животных 2, в то время как исследования с использованием Ca 2 +: Mg 2 + соотношение ближе к двум, наблюдали надежный LTD у взрослых в отсутствие разницы в возрасте 2,10 или в сочетании с пониженным LTD в старых крыс 32. Эти наблюдения указывают на необходимость внимательно рассмотреть ACSF Са 2 + и Mg 2 + при сравнении уровней Са 2 +-зависимой пластичности в возрасте и молодых взрослых животных. Вторая методологическая проблема касается сильной зависимости от LTP на постсинаптической деполяризации 33 и возможно старения / генотип различия в синаптической силы. В типичном эксперименте LTP, исходные и LTP интенсивности стимуляции, как правило, отрегулированным для половины максимального (или три четверти максимального) ВПСП амплитудой. Потенциальной проблемой является то, что в возрасте крыс и мышей APP/PS1 обычно показывают снижение синаптической силы по отношению к своим младшим и / или диких коллегами типа, что означает, что значения базовой ВПСП также будет меньше старых крыс и мышей APP/PS1. Меньшие ВПСП могут перевести на менее деполяризации во время стимуляции LTP, в результате чего снижается вероятность для стимуляции LTP 33. Из-за этого потенциальные тупик, трудно определить, являются ли эти животные обладают пропускной дефицита, пластичности дефицита или то и другое. То есть, LTP механизмы индукции в возрасте и / или APP/PS1 мышей могут быть частично без изменений (не пластичности дефицит), но недостаточно стимулировал (пропускная дефицит) в этих условиях. Это различие имеет решающее значение, как механизмы пропускной способности и механизмов пластичности может работать очень по-разному для специфического лечения фармакологическими. Мы стараемся свести к минимуму воздействие снижается пропускная способность по индукции LTP нормализации ВПСП амплитудой до того же уровня (например, 1 мВ) во всех ломтиков до стимуляции LTP. Другие стратегии могут быть эффективными, а также (например, использование напряжения или тока зажим для выравнивания мембранного потенциала всей группы во время стимуляции LTP), и должны быть рассмотрены при исследовании ЛТП в этих моделях на животных.

<table border="1"><tbody><tr><td> Название реагента </td><td> Компания </td><td> Номер в каталоге </td></tr><tr><td> NaCl </td><td> Рыболов </td><td> BP358-1 </td></tr><tr><td> KCl </td><td> Рыболов </td><td> BP366-500 </td></tr><tr><td> KH 2 PO 4 (одноосновная) </td><td> Сигма </td><td> P5379-100G </td></tr><tr><td> MgSO 4 </td><td> Сигма </td><td> M2643-500G </td></tr><tr><td> CaCl 2 (дигидрат) </td><td> Сигма </td><td> C3306-250G </td></tr><tr><td> NaHCO 3 </td><td> Рыболов </td><td> S233-500 </td></tr><tr><td> C 6 H 12 O 6 (глюкоза) </td><td> Рыболов </td><td> BP350-1 </td></tr></tbody></table> Таблица 1. Реагенты <table border="1"><tbody><tr><td> Наименование оборудования </td><td> Компания </td><td> Номер в каталоге </td><td> Комментарии </td></tr><tr><td> Колбы Эрленмейера </td><td> Рыболов </td><td> FB-500-2000 FB-500-1000 </td><td></td></tr><tr><td> Аквариум Bubbler </td><td></td><td></td><td> Используется для кислородом СМИ. Доступные в большинстве зоомагазинов </td></tr><tr><td> 50 мл стеклянный стакан, </td><td> Рыболов </td><td> 02-540г </td><td> Для мозга storarge в ACSF </td></tr><tr><td> Парафильмом </td><td> Рыболов </td><td> 13-374-10 </td><td></td></tr><tr><td> Малый Гильотина животных </td><td> Всемирный точных приборов (WPI) </td><td> DCAP-М </td><td></td></tr><tr><td> Плоские бумажным полотенцем </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> # 11 Перо хирургические лезвия </td><td> Рыболов </td><td> 08-916-5B </td><td></td></tr><tr><td> Beebee кости ножницы </td><td> Инструменты изобразительных наук (ФСТ) </td><td> 16044-10 </td><td></td></tr><tr><td> Лемперт Rongeurs </td><td> Roboz </td><td> RS-8321 </td><td> Используйте для крыс </td></tr><tr><td> Фридман-Пирсона Rongeurs </td><td> FST </td><td> 16020-14 </td><td> Используйте для мышей и крыс </td></tr><tr><td> Гиппокамп инструмент </td><td> FST </td><td> 10099-15 </td><td></td></tr><tr><td> Ложка </td><td></td><td></td><td> Пластиковые чайной ложки сделает </td></tr><tr><td> Шпатель </td><td> Рыболов </td><td> 21-401-25A </td><td> Шпатель </td></tr><tr><td> Хирургические ножницы диафрагмой </td><td> FST </td><td> 14058-09 </td><td></td></tr><tr><td> пластиковые пипец передачи </td><td> Рыболов </td><td> 13-711-43 </td><td></td></tr><tr><td> 110 мм Whatman фильтровальной бумаги </td><td> Рыболов </td><td> 09-805E </td><td> Ватман кошки. 1001-110 </td></tr><tr><td> Стекло Петри </td><td> Рыболов </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Leica VT1000P Руководство вибрационный Микротом </td><td> Vibratome </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 0,1 мм FA-10 S перо лезвием </td><td> Тед Пелла </td><td> 121-9 </td><td> 0,1 мм FA-10 S перо лезвием </td></tr><tr><td> Боросиликатного стекла Пастера Пипетируйте (с резиновой грушей) </td><td> Рыболов </td><td> 13-678-20A </td><td> Для передачи ломтиками: Совет разрывается и тепло-полированные для увеличения открытия </td></tr><tr><td> 35 мм Polysterine блюдо культуры </td><td> Гранулирование </td><td> 430588 </td><td> Используется для сбора ломтиками после вскрытия </td></tr></tbody></table> Таблица 2. Инструменты и материалы для вскрытия <table border="1"><tbody><tr><td> Оборудование / Материалы </td><td> Компания </td><td> Комментарии (необязательно) </td></tr><tr><td> Холдинг камеры </td><td> На заказ </td><td></td></tr><tr><td> Р-97 Горизонтальное Внесите Puller </td><td> Саттер машиностроительный завод </td><td></td></tr><tr><td> Таблица Виброизоляция </td><td> Технические Manufacturing Corporation (TMC) </td><td></td></tr><tr><td> Экранированная камера </td><td> На заказ </td><td></td></tr><tr><td> Pyrex Аспиратор бутылки с нижней пистолет (Product # 1220-1L) </td><td> Гранулирование </td><td></td></tr><tr><td> Гравитационные contolled набор IV с регулятором (Product # 2C8891) </td><td> Бакстер </td><td></td></tr><tr><td> Центральная линия Вакуумные </td><td></td><td> Доступный в самых современных лабораториях </td></tr><tr><td> 95% O 2 / 5% CO 2 газовая смесь </td><td> Шотландецт-Гросс Ко </td><td></td></tr><tr><td> TygonTM Лаборатории трубы Для O 2 / CO 2 доставке </td><td> Fisher Scientific </td><td> Не токсичен, неокисляющих, поставляется в различных размеров. </td></tr><tr><td> Затмение E600FN микроскоп </td><td> Nikon </td><td> с 10х и 40х целей, недалеко дальним красным фильтром и GFP, DS-Red2 фильтры </td></tr><tr><td> Прохладный оснастку ES Цифровая камера </td><td> Фотометрические </td><td> Прохладный оснастку ES Цифровая камера </td></tr><tr><td> X-Cite Флуоресцентный осветитель </td><td> EXFO </td><td> X-Cite Флуоресцентный осветитель </td></tr><tr><td> Микроскоп платформы </td><td> Сиския </td><td> Custom собран </td></tr><tr><td> RC-22 погружные записи камеры (продукт # 64-0228) </td><td> Warner Instruments (WI) </td><td> Требуется P-1 платформы и стадии адаптер (продукт # 64-0277 от Warner) </td></tr><tr><td> TC2BIP 2/3Ch Регулятор температуры </td><td> Сотовые Microcontrols </td><td> TC2BIP 2/3Ch Регулятор температуры </td></tr><tr><td> 4 оси Руководство Миниатюрный манипулятор </td><td> Сиския </td><td></td></tr><tr><td> Платиновый Iridium Wire (0,002 дюйма) (Пункт # PTT0203) </td><td> WPI </td><td></td></tr><tr><td> A365 Стимул изолятор </td><td> WPI </td><td> A365 Стимул изолятор </td></tr><tr><td> Multiclamp 700B Усилитель </td><td> Axon инструменты </td><td></td></tr><tr><td> DIGIDATA 1322A / D конвертер </td><td> Axon инструменты </td><td></td></tr><tr><td> PClamp программного обеспечения </td><td> Axon инструменты </td><td></td></tr><tr><td> Персональный компьютер (Pentium 4) </td><td> Лощина </td><td></td></tr></tbody></table> Таблица 3. Электрофизиологии оборудования и материалов

preparation of acute hippocampal slices from rats and transgenic mice for the study of synaptic alterations during aging and amyloid pathology

Гиппокампа грызунов подготовки срез, пожалуй, наиболее широко используемым инструментом для исследования млекопитающих синаптической функции и пластичности. Гиппокампе может быть извлечен быстро и легко от крыс и мышей и ломтиками остаются жизнеспособными в течение нескольких часов в кислородом искусственной спинномозговой жидкости. Кроме того, основные методы electrophysisologic легки в применении к исследованию синаптической функции в срезах гиппокампа и представили некоторые из лучших биомаркеров для когнитивных нарушений. Гиппокампа ломтик особенно популярен для изучения механизмов синаптической пластичности, участвующих в процессах обучения и памяти. Изменения в индукции длительной потенциации и депрессии (LTP и LTD) синаптической эффективности в срезах гиппокампа (или их отсутствие) часто используется для описания неврологического фенотип когнитивно-нарушенной животных и / или оценить механизм действия ноотропных соединений. В этой статье описываются процедуры мы используем для подготовки срезах гиппокампа крыс и трансгенных мышей для изучения синаптические изменения, связанные с старение мозга и болезнь Альцгеймера (БА) 1-3. Использование старых крыс и мышей AD модель может представить уникальный набор проблем для исследователей привыкли использовать младший крыс и / или мышей в своих исследованиях. Возраст крысы толще черепа и жесткой соединительной ткани, чем молодые крысы и мыши, которые могут задержать извлечения головного мозга и / или рассечение и, следовательно, отрицать или преувеличивать реальные возрастные различия в синаптической функции и пластичности. Старение и амилоида патология может также усугубить повреждение гиппокампа, полученных во время вскрытия процедуру, снова усложняет любые выводы из физиологической оценки. Здесь мы рассмотрим шаги, предпринятые во время вскрытия процедуру, чтобы минимизировать эти проблемы. Примеры синаптических ответов, приобретенных в &quot;здоровой&quot; и &quot;нездоровый&quot; ломтики от крыс и мышей предоставляются, а также представительства синаптической пластичности экспериментов. Возможное влияние других методологических факторов на синаптическую функцию в этих моделях на животных (например, записи компонентов решения, стимулирование параметров) также обсуждаются. Хотя основное внимание в этой статье, на использование старых крыс и трансгенных мышей, новичкам, чтобы нарезать физиологии должны найти достаточно подробно здесь, чтобы начать на своих собственных исследований, с использованием различных грызунов моделей.

Watch this Scientific Journal Video about Preparation of Acute Hippocampal Slices from Rats and Transgenic Mice for the Study of Synaptic Alterations during Aging and Amyloid Pathology at JoVE.com

Preparation of Acute Hippocampal Slices from Rats and Transgenic Mice for the Study of Synaptic Alterations during Aging and Amyloid Pathology

В этой статье описываются процедуры подготовки срезах гиппокампа крыс и трансгенных мышей для изучения синаптических изменений, связанных со старением мозга и возрастных нейродегенеративных заболеваний, таких как болезнь Альцгеймера.

Подготовка острого срезах гиппокампа крыс и трансгенных мышей для изучения Synaptic Изменения в процессе старения и амилоида патологии

The rodent hippocampal slice preparation is perhaps the most broadly used tool for investigating mammalian synaptic function and plasticity. The ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Preparation of Oligomeric &beta;-amyloid1-42 and Induction of Synaptic Plasticity Impairment on Hippocampal Slices

Preparation of Oligomeric ÃƒÅ½Ã‚Â²-amyloid1-42 and Induction of Synaptic Plasticity Impairment on Hippocampal Slices

Подготовка Олигомерные β-амилоида 1-42 И индукция Synaptic Обесценение Пластичность на срезах гиппокампа

Impairment of synaptic connections is likely to underlie the subtle amnesic changes occurring at the early stages of Alzheimer s Disease (AD). ...

Vibrodissociation of Neurons from Rodent Brain Slices to Study Synaptic Transmission and Image Presynaptic Terminals

Vibrodissociation нейронов из кусочков мозга грызунов по изучению синаптической передачи изображения и пресинаптические терминалы

Mechanical dissociation of neurons from the central nervous system has the advantage that presynaptic boutons remain attached to the isolated neuron of ...

Preparation of Acute Subventricular Zone Slices for Calcium Imaging

Подготовка Острый субвентрикулярной фрагменты зона для кальция изображений

The subventricular zone (SVZ) is one of the two neurogenic zones in the postnatal brain. The SVZ contains densely packed cells, including neural ...

Dual Electrophysiological Recordings of Synaptically-evoked Astroglial and Neuronal Responses in Acute Hippocampal Slices

Двойной Электрофизиологические Записи синаптически-вызванных астроглиального и нейрональных ответов, при остром срезов гиппокампа

Astrocytes form together with neurons tripartite synapses, where they integrate and modulate neuronal activity. Indeed, astrocytes sense neuronal inputs ...

Stereotaxic Infusion of Oligomeric Amyloid-beta into the Mouse Hippocampus

Стереотаксическая Настой олигомерных бета-амилоида в гиппокампе мыши

Alzheimer&#8217;s disease is a neurodegenerative disease affecting the aging population. A key neuropathological feature of the disease is the ...

Investigation of Synaptic Tagging/Capture and Cross-capture using Acute Hippocampal Slices from Rodents

Исследование Synaptic Tagging / Захват и кросс-захвата с помощью острой срезах гиппокампа от грызунов

Synaptic tagging and capture (STC) and cross-tagging are two important mechanisms at cellular level that explain how synapse-specificity and associativity ...

Preparation of Acute Brain Slices Using an Optimized N-Methyl-D-glucamine Protective Recovery Method

Preparation of Acute Brain Slices Using an Optimized N-Methyl-D-glucamine Protective Recovery Method

Подготовка фрагментов острого мозга, с помощью оптимизированного N-метил-D-glucamine защитные восстановления метод

This protocol is a practical guide to the N-methyl-D-glucamine (NMDG) protective recovery method of brain slice preparation. Numerous recent studies have ...

Recording Synaptic Plasticity in Acute Hippocampal Slices Maintained in a Small-volume Recycling-, Perfusion-, and Submersion-type Chamber System

Запись синаптической пластичности в острой гиппокампа ломтики в малообъемной рециркуляции-, перфузии и погружения типа камерная система

Even though experiments on brain slices have been in use since 1951, problems remain that reduce the probability of achieving a stable and successful ...

Single Synapse Indicators of Glutamate Release and Uptake in Acute Brain Slices from Normal and Huntington Mice

Одноместный Synapse Показатели глюкамата релиз и поглощение в острый мозг фрагменты из нормальных и Хантингтон мышей

Synapses are highly compartmentalized functional units that operate independently on each other. In Huntington&#39;s disease (HD) and other ...

Preparation of Acute Human Hippocampal Slices for Electrophysiological Recordings

Подготовка острых человеческих гиппокампа для электрофизиологических записей

Epilepsy affects about 1% of the world population and leads to a severe decrease in quality of life due to ongoing seizures as well as high risk for ...