Name: preparation of acute hippocampal slices from rats and transgenic mice for the study of synaptic alterations during aging and amyloid pathology
Uploaded: 2011-03-23T14:15:00
Duration: 14 min 57 s
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El trabajo apoyado por el NIH subvención AG027297, un premio de la médula espinal y la confianza Kentucky Head Injury Research, y un regalo de la Fundación Kleberg.

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	<li>Norris, C. M., Halpain, S., Foster, T. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alterations+in+the+balance+of+protein+kinase/phosphatase+activities+parallel+reduced+synaptic+strength+during+aging.">Alterations in the balance of protein kinase/phosphatase activities parallel reduced synaptic strength during aging.</a> J Neurophysiol. 80, 1567-1570 (1998).</li><li>Norris, C. M., Korol, D. L., Foster, T. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Increased+susceptibility+to+induction+of+long-term+depression+and+long-term+potentiation+reversal+during+aging.">Increased susceptibility to induction of long-term depression and long-term potentiation reversal during aging.</a> J Neurosci. 16, 5382-5392 (1996).</li><li>Norris, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hippocampal+'zipper'+slice+studies+reveal+a+necessary+role+for+calcineurin+in+the+increased+activity+of+L-type+Ca(2+)+channels+with+aging.">Hippocampal 'zipper' slice studies reveal a necessary role for calcineurin in the increased activity of L-type Ca(2+) channels with aging.</a> Neurobiol Aging. 31, 328-338 (2010).</li><li>Burke, S. N., Barnes, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Senescent+synapses+and+hippocampal+circuit+dynamics.">Senescent synapses and hippocampal circuit dynamics.</a> Trends Neurosci. 33, 153-161 (2010).</li><li>Foster, T. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Calcium+homeostasis+and+modulation+of+synaptic+plasticity+in+the+aged+brain.">Calcium homeostasis and modulation of synaptic plasticity in the aged brain.</a> Aging Cell. 6, 319-325 (2007).</li><li>Foster, T. C., Norris, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Age-associated+changes+in+Ca(2+)-dependent+processes:+relation+to+hippocampal+synaptic+plasticity.">Age-associated changes in Ca(2+)-dependent processes: relation to hippocampal synaptic plasticity.</a> Hippocampus. 7, 602-612 (1997).</li><li>Thibault, O., Gant, J. C., Landfield, P. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Expansion+of+the+calcium+hypothesis+of+brain+aging+and+Alzheimer's+disease:+minding+the+store.">Expansion of the calcium hypothesis of brain aging and Alzheimer's disease: minding the store.</a> Aging Cell. 6, 307-317 (2007).</li><li>Demuro, A., Parker, I., Stutzmann, G. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Calcium+signaling+and+amyloid+toxicity+in+Alzheimer+disease.">Calcium signaling and amyloid toxicity in Alzheimer disease.</a> J Biol Chem. 285, 12463-12468 (2010).</li><li>Green, K. N., LaFerla, F. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Linking+calcium+to+Abeta+and+Alzheimer's+disease.">Linking calcium to Abeta and Alzheimer's disease.</a> Neuron. 59, 190-194 (2008).</li><li>Kumar, A., Thinschmidt, J. S., Foster, T. C., King, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aging+effects+on+the+limits+and+stability+of+long-term+synaptic+potentiation+and+depression+in+rat+hippocampal+area+CA1.">Aging effects on the limits and stability of long-term synaptic potentiation and depression in rat hippocampal area CA1.</a> J Neurophysiol. 98, 594-601 (2007).</li><li>Norris, C. M., Halpain, S., Foster, T. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reversal+of+age-related+alterations+in+synaptic+plasticity+by+blockade+of+L-type+Ca2++channels.">Reversal of age-related alterations in synaptic plasticity by blockade of L-type Ca2+ channels.</a> J Neurosci. 18, 3171-3179 (1998).</li><li>Norris, C. M., Scheff, S. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recovery+of+afferent+function+and+synaptic+strength+in+hippocampal+CA1+following+traumatic+brain+injury.">Recovery of afferent function and synaptic strength in hippocampal CA1 following traumatic brain injury.</a> J Neurotrauma. 26, 2269-2278 (2009).</li><li>Sama, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interleukin-1beta-dependent+signaling+between+astrocytes+and+neurons+depends+critically+on+astrocytic+calcineurin/NFAT+activity.">Interleukin-1beta-dependent signaling between astrocytes and neurons depends critically on astrocytic calcineurin/NFAT activity.</a> J Biol Chem. 283, 21953-21964 (2008).</li><li>Ye, H., Jalini, S., Mylvaganam, S., Carlen, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activation+of+large-conductance+Ca(2+)-activated+K(+)+channels+depresses+basal+synaptic+transmission+in+the+hippocampal+CA1+area+in+APP+(swe/ind)+TgCRND8+mice.">Activation of large-conductance Ca(2+)-activated K(+) channels depresses basal synaptic transmission in the hippocampal CA1 area in APP (swe/ind) TgCRND8 mice.</a> Neurobiol Aging. 31, 591-604 (2010).</li><li>Bear, M. F., Malenka, R. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synaptic+plasticity:+LTP+and+LTD.">Synaptic plasticity: LTP and LTD.</a> Curr Opin Neurobiol. 4, 389-399 (1994).</li><li>Foster, T. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Involvement+of+hippocampal+synaptic+plasticity+in+age-related+memory+decline.">Involvement of hippocampal synaptic plasticity in age-related memory decline.</a> Brain Res Brain Res Rev. 30, 236-249 (1999).</li><li>Foster, T. C., Kumar, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Susceptibility+to+induction+of+long-term+depression+is+associated+with+impaired+memory+in+aged+Fischer+344+rats.">Susceptibility to induction of long-term depression is associated with impaired memory in aged Fischer 344 rats.</a> Neurobiol Learn Mem. 87, 522-535 (2007).</li><li>Hsu, K. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alterations+in+the+balance+of+protein+kinase+and+phosphatase+activities+and+age-related+impairments+of+synaptic+transmission+and+long-term+potentiation.">Alterations in the balance of protein kinase and phosphatase activities and age-related impairments of synaptic transmission and long-term potentiation.</a> Hippocampus. 12, 787-802 (2002).</li><li>Vouimba, R. M., Foy, M. R., Foy, J. G., Thompson, R. 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M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cognitive+decline+in+Alzheimer's+disease+is+associated+with+selective+changes+in+calcineurin/NFAT+signaling.">Cognitive decline in Alzheimer's disease is associated with selective changes in calcineurin/NFAT signaling.</a> J Neurosci. 29, 12957-12969 (2009).</li><li>Anantharaman, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Beta-amyloid+mediated+nitration+of+manganese+superoxide+dismutase:+implication+for+oxidative+stress+in+a+APPNLH/NLH+X+PS-1P264L/P264L+double+knock-in+mouse+model+of+Alzheimer's+disease.">Beta-amyloid mediated nitration of manganese superoxide dismutase: implication for oxidative stress in a APPNLH/NLH X PS-1P264L/P264L double knock-in mouse model of Alzheimer's disease.</a> Am J Pathol. 168, 1608-1618 (2006).</li><li>Gengler, S., Hamilton, A., Holscher, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synaptic+plasticity+in+the+hippocampus+of+a+APP/PS1+mouse+model+of+Alzheimer's+disease+is+impaired+in+old+but+not+young+mice.">Synaptic plasticity in the hippocampus of a APP/PS1 mouse model of Alzheimer's disease is impaired in old but not young mice.</a> PLoS One. 5, e9764-e9764 (2010).</li><li>Stringer, J. L., Lothman, E. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+effects+of+extracellular+calcium+concentrations+on+hippocampal+pyramidal+cell+responses.">In vitro effects of extracellular calcium concentrations on hippocampal pyramidal cell responses.</a> Exp Neurol. 101, 132-146 (1988).</li><li>Landfield, P. W., Pitler, T. A., Applegate, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effects+of+high+Mg2+-to-Ca2++ratios+on+frequency+potentiation+in+hippocampal+slices+of+young+and+aged+rats.">The effects of high Mg2+-to-Ca2+ ratios on frequency potentiation in hippocampal slices of young and aged rats.</a> J Neurophysiol. 56, 797-811 (1986).</li><li>Ames, A., Sakanoue, M., Endo, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NA,+K,+CA,+MG,+AND+C1+CONCENTRATIONS+IN+CHOROID+PLEXUS+FLUID+AND+CISTERNAL+FLUID+COMPARED+WITH+PLASMA+ULTRAFILTRATE.">NA, K, CA, MG, AND C1 CONCENTRATIONS IN CHOROID PLEXUS FLUID AND CISTERNAL FLUID COMPARED WITH PLASMA ULTRAFILTRATE.</a> J Neurophysiol. 27, 672-681 (1964).</li><li>Gant, J. C., Sama, M. M., Landfield, P. W., Thibault, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Early+and+simultaneous+emergence+of+multiple+hippocampal+biomarkers+of+aging+is+mediated+by+Ca2+-induced+Ca2++release.">Early and simultaneous emergence of multiple hippocampal biomarkers of aging is mediated by Ca2+-induced Ca2+ release.</a> J Neurosci. 26, 3482-3490 (2006).</li><li>Thibault, O., Hadley, R., Landfield, P. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Elevated+postsynaptic+[Ca2+]i+and+L-type+calcium+channel+activity+in+aged+hippocampal+neurons:+relationship+to+impaired+synaptic+plasticity.">Elevated postsynaptic [Ca2+]i and L-type calcium channel activity in aged hippocampal neurons: relationship to impaired synaptic plasticity.</a> J Neurosci. 21, 9744-9756 (2001).</li><li>Thibault, O., Landfield, P. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Increase+in+single+L-type+calcium+channels+in+hippocampal+neurons+during+aging.">Increase in single L-type calcium channels in hippocampal neurons during aging.</a> Science. 272, 1017-1020 (1996).</li><li>Stutzmann, G. E., Caccamo, A., LaFerla, F. M., Parker, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dysregulated+IP3+signaling+in+cortical+neurons+of+knock-in+mice+expressing+an+Alzheimer's-linked+mutation+in+presenilin1+results+in+exaggerated+Ca2++signals+and+altered+membrane+excitability.">Dysregulated IP3 signaling in cortical neurons of knock-in mice expressing an Alzheimer's-linked mutation in presenilin1 results in exaggerated Ca2+ signals and altered membrane excitability.</a> J Neurosci. 24, 508-513 (2004).</li><li>Stutzmann, G. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enhanced+ryanodine+receptor+recruitment+contributes+to+Ca2++disruptions+in+young,+adult,+and+aged+Alzheimer's+disease+mice.">Enhanced ryanodine receptor recruitment contributes to Ca2+ disruptions in young, adult, and aged Alzheimer's disease mice.</a> J Neurosci. 26, 5180-5189 (2006).</li><li>Lee, H. K., Min, S. S., Gallagher, M., Kirkwood, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NMDA+receptor-independent+long-term+depression+correlates+with+successful+aging+in+rats.">NMDA receptor-independent long-term depression correlates with successful aging in rats.</a> Nat Neurosci. 8, 1657-1659 (2005).</li><li>McNaughton, B. L., Douglas, R. M., Goddard, G. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synaptic+enhancement+in+fascia+dentata:+cooperativity+among+coactive+afferents.">Synaptic enhancement in fascia dentata: cooperativity among coactive afferents.</a> Brain Res. 157, 277-293 (1978).</li></ol>

La producción de este video-artículo fue patrocinado por Leica Microsystems.

Los pasos descritos en este protocolo ayudará a asegurar que la disección del cerebro se llevan a cabo al menos tan rápida y eficientemente en la edad, como en ratas adultas jóvenes. También proporcionan suficiente detalle para los principiantes a crear sus propios estudios de corte en la LTP y LTD. Si una mayor exploración del envejecimiento y los cambios de AD en la función sináptica y la plasticidad es una de sus metas, hay al menos otras dos cuestiones metodológicas, ha aludido más arriba, que merecen mayor consideración. Laboratorios de primera, han mostrado que el Ca 2 +: Mg2 + en relación ACSF grabación puede tener un efecto marcado en la plasticidad sináptica de inducción en rodajas de hipocampo 2,10,24,25. En el LCR de mamíferos, el Ca 2 +: Mg2 + proporción es de aproximadamente una (por ejemplo, ver 26). Sin embargo, ACSF Ca 2 +: Mg2 + ratios más cercano a 2 se utilizan comúnmente en los estudios de corte de la función sináptica y la plasticidad. En los primeros estudios, esta práctica se adaptó probablemente para optimizar la inducción de la LTP, y posteriormente se convirtió en rutina para todos los estudios de plasticidad. Sin embargo, esta práctica puede ser problemático en los estudios de envejecimiento y la EA debido a las diferencias bien caracterizado en la regulación neuronal de Ca 2 +. En concreto, Ca 2 + afluencia y / o Ca 2 + inducida por Ca 2 + de liberación se encuentra elevada en ratas de edad avanzada y / o ratones modelo AD durante la activación neuronal 3,27-31. La inducción de LTD es particularmente sensible a los cambios sutiles en los niveles de ACSF + Ca 2. El protocolo, que utiliza 2 mM Ca 2 + y 2 mM Mg 2 +, suele dar lugar a LTD para la edad, pero no animales adultos jóvenes y 2, mientras que los estudios que utilizan un Ca 2 +: Mg2 relación + más cercano a dos, se ha observado LTD sólida en los adultos en el ausencia de una diferencia de edad 2,10 o en conjunto con la reducción de LTD en ratas de 32 años. Estas observaciones ponen de relieve la necesidad de considerar cuidadosamente ACSF Ca 2 + y Mg 2 + cuando se comparan los niveles de Ca 2 +-dependiente de la plasticidad en los animales adultos mayores y jóvenes. El segundo problema metodológico se refiere a la fuerte dependencia de la LTP en la despolarización postsináptica 33 y posible envejecimiento / genotipo las diferencias en la fuerza sináptica. En un experimento típico de LTP, de base y la intensidad de la estimulación LTP se ajusta para producir una media máxima (o de tres cuartos de máxima) EPSP amplitud. El problema potencial es que las ratas y los ratones de edad por lo general muestran una reducción APP/PS1 fuerza sináptica relación con sus homólogos de tipo menor y / o silvestres, lo que significa que los valores basales EPSP también será menor en las ratas y los ratones de edad APP/PS1. PPSE pequeños se puede traducir en menos de despolarización durante la estimulación LTP, resultando en una menor probabilidad de inducir LTP 33. Debido a este potencial de confundir, es difícil determinar si estos animales presentan un déficit de rendimiento, un déficit de la plasticidad o ambas cosas. Es decir, los mecanismos de inducción de LTP en ratones de edad y / o APP/PS1 puede ser funcionalmente intacto (sin déficit de plasticidad), pero lo suficientemente estimuladas (déficit de rendimiento) en estas condiciones. Esta distinción es fundamental, como mecanismos para el rendimiento y los mecanismos de plasticidad puede responder de manera muy diferente a un determinado tratamiento farmacológico. Tratamos de minimizar el impacto de rendimiento reducido en la inducción de LTP por la normalización de la amplitud de la EPSP al mismo nivel (por ejemplo 1 mV) a través de todos los cortes antes de la estimulación LTP. Otras estrategias pueden ser eficaces también (por ejemplo el uso de la tensión o la pinza de corriente para igualar el potencial de membrana entre los grupos durante la estimulación LTP), y deben ser considerados en la investigación de LTP en estos modelos animales.

<table border="1"><tbody><tr><td> Nombre del reactivo </td><td> Empresa </td><td> Número de catálogo </td></tr><tr><td> NaCl </td><td> Pescador </td><td> BP358-1 </td></tr><tr><td> KCl </td><td> Pescador </td><td> BP366-500 </td></tr><tr><td> KH 2 PO 4 (monobásico) </td><td> Sigma </td><td> P5379-100G </td></tr><tr><td> MgSO4 </td><td> Sigma </td><td> M2643-500G </td></tr><tr><td> CaCl2 (dihidrato) </td><td> Sigma </td><td> C3306-250G </td></tr><tr><td> NaHCO3 </td><td> Pescador </td><td> S233-500 </td></tr><tr><td> C 6 H 12 O 6 (glucosa) </td><td> Pescador </td><td> BP350-1 </td></tr></tbody></table> Reactivos Tabla 1. Requeridas <table border="1"><tbody><tr><td> Nombre del equipo </td><td> Empresa </td><td> Número de catálogo </td><td> Comentarios </td></tr><tr><td> Erlenmeyer Frascos </td><td> Pescador </td><td> FB-500-2000 FB-500-1000 </td><td></td></tr><tr><td> Acuario pelele </td><td></td><td></td><td> Se utiliza para oxigenar los medios de comunicación. Disponible en la mayoría de las tiendas de mascotas </td></tr><tr><td> 50 ml vaso de vidrio </td><td> Pescador </td><td> 02-540g </td><td> Para storarge cerebro en ACSF </td></tr><tr><td> Parafilm </td><td> Pescador </td><td> 13-374-10 </td><td></td></tr><tr><td> Guillotina de Pequeños Animales </td><td> World Precision Instruments (IPM) </td><td> DCAP-M </td><td></td></tr><tr><td> Una toalla de papel plana </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> # 11 pluma quirúrgica hoja </td><td> Pescador </td><td> 08 a 916-5B </td><td></td></tr><tr><td> Bibi hueso tijeras </td><td> Herramientas de Bellas Ciencia (FST) </td><td> 16044-10 </td><td></td></tr><tr><td> Lempert Pinzas </td><td> Roboz </td><td> RS-8,321 </td><td> Se utiliza para las ratas </td></tr><tr><td> Friedman-Pearson Pinzas </td><td> FST </td><td> 16020-14 </td><td> El uso de ratones o ratas </td></tr><tr><td> Hipocampo herramienta </td><td> FST </td><td> 10099-15 </td><td></td></tr><tr><td> Cuchara </td><td></td><td></td><td> Una cucharilla de plástico va a hacer </td></tr><tr><td> Espátula </td><td> Pescador </td><td> 21-401-25A </td><td> Espátula </td></tr><tr><td> Quirúrgico tijeras iris </td><td> FST </td><td> 14058-09 </td><td></td></tr><tr><td> pipetas de plástico de transferencia </td><td> Pescador </td><td> 13-711-43 </td><td></td></tr><tr><td> 110 mm de papel de filtro Whatman </td><td> Pescador </td><td> 09-805E </td><td> Cat Whatman. 1001-110 </td></tr><tr><td> Vidrio una caja de petri </td><td> Pescador </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Leica VT1000P Manual vibración micrótomo </td><td> Vibratome </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 0,1 mm FA-10 Pluma S blade </td><td> Ted Pella </td><td> 121-9 </td><td> 0,1 mm FA-10 Pluma S blade </td></tr><tr><td> Pipeta Pasteur de vidrio de borosilicato (con perilla de goma) </td><td> Pescador </td><td> 13 a 678-20A </td><td> Para la transferencia de sectores: Consejo se interrumpe y el calor pulido para mayor apertura </td></tr><tr><td> 35 mm plato Cultura Polysterine </td><td> Corning </td><td> 430588 </td><td> Se utiliza para recoger trozos después de la disección </td></tr></tbody></table> Tabla 2. Herramientas y materiales para la disección <table border="1"><tbody><tr><td> Equipos / Materiales </td><td> Empresa </td><td> Comentarios (opcional) </td></tr><tr><td> Cámara de retención </td><td> Hecha a la medida </td><td></td></tr><tr><td> P-97 Extractor horizontal con una pipeta </td><td> Sutter Instrument Co. </td><td></td></tr><tr><td> Vibraciones mesa aislamiento </td><td> Técnica Manufacturing Corporation (TMC) </td><td></td></tr><tr><td> Jaula de Faraday </td><td> Hecha a la medida </td><td></td></tr><tr><td> Pyrex Aspirador Botella con brazo lateral inferior (Product # 1220-1L) </td><td> Corning </td><td></td></tr><tr><td> Gravedad controló conjunto con el regulador IV (Producto # 2C8891) </td><td> Baxter </td><td></td></tr><tr><td> Línea de aspiración central </td><td></td><td> Disponible en la mayoría de los modernos laboratorios </td></tr><tr><td> 95% O 2 / 5% CO 2 mezcla de gases </td><td> Escocést-bruto Co. </td><td></td></tr><tr><td> TygonTM Laboratorio de tubos De O 2 / CO 2 de entrega </td><td> Fisher Scientific </td><td> No es tóxico, no oxidante, viene en una variedad de tamaños. </td></tr><tr><td> Eclipse E600FN microscopio </td><td> Nikon </td><td> con los objetivos de 10x y 40x, cerca de infrarrojo de filtro, y las buenas prácticas agrarias, DS-Rojo2 filtros </td></tr><tr><td> Ajustar Cool ES la cámara digital </td><td> Fotometría </td><td> Ajustar Cool ES la cámara digital </td></tr><tr><td> X-Cite iluminador fluorescente </td><td> EXFO </td><td> X-Cite iluminador fluorescente </td></tr><tr><td> Microscopio Plataforma </td><td> Siskiyou </td><td> Costumbre montado </td></tr><tr><td> RC-22 sumergibles grabación de la cámara (Producto # 64-0228) </td><td> Warner Instruments (WI) </td><td> Requiere P-1 adaptador de la plataforma y el escenario (Producto # 64-0277 de Warner) </td></tr><tr><td> TC2BIP 2/3Ch controlador de temperatura </td><td> Microcontrols celular </td><td> TC2BIP 2/3Ch controlador de temperatura </td></tr><tr><td> 4 Manual del Eje en miniatura manipulador </td><td> Siskiyou </td><td></td></tr><tr><td> De alambre de platino iridio (0,002 in) (Artículo # PTT0203) </td><td> WPI </td><td></td></tr><tr><td> A365 estímulo aislador </td><td> WPI </td><td> A365 estímulo aislador </td></tr><tr><td> MultiClamp amplificador 700b </td><td> Axon Instruments </td><td></td></tr><tr><td> Digidata 1322A convertidor A / D </td><td> Axon Instruments </td><td></td></tr><tr><td> PCLAMP software </td><td> Axon Instruments </td><td></td></tr><tr><td> Ordenador personal (Pentium 4) </td><td> Dell </td><td></td></tr></tbody></table> Tabla 3. Electrofisiología equipos y materiales

preparation of acute hippocampal slices from rats and transgenic mice for the study of synaptic alterations during aging and amyloid pathology

La preparación de roedores rebanada hipocampo es quizás la herramienta más ampliamente utilizada para la investigación de la función sináptica y la plasticidad de mamíferos. El hipocampo se pueden extraer de forma rápida y fácil de ratas y ratones y las rodajas de permanecer viables durante horas en el líquido cefalorraquídeo artificial oxigenada. Por otra parte, las técnicas básicas de electrophysisologic se aplican fácilmente a la investigación de la función sináptica en rodajas de hipocampo y han proporcionado algunos de los mejores biomarcadores para el deterioro cognitivo. El corte del hipocampo es especialmente popular para el estudio de los mecanismos de plasticidad sináptica involucrados en el aprendizaje y la memoria. Los cambios en la inducción de la potenciación a largo plazo y la depresión (LTP y LTD) de la eficacia sináptica en rodajas de hipocampo (o falta de ella) se utilizan con frecuencia para describir el fenotipo neurológico de los animales con deficiencias cognitivas y / o para evaluar el mecanismo de acción de compuestos nootrópicos. En este artículo se describen los procedimientos que utilizamos para la preparación de rodajas de hipocampo de ratas y ratones transgénicos para el estudio de las alteraciones sinápticas del cerebro asociada con el envejecimiento y la enfermedad de Alzheimer (EA) 3.1. El uso de ratas y ratones de edad AD modelo puede presentar una serie de desafíos para los investigadores acostumbrados a usar las ratas más jóvenes y / o ratones en sus investigaciones. Ratas de edad avanzada tienen más grueso y más resistente cráneos del tejido conectivo que los más jóvenes ratas y ratones, lo que puede retrasar la extracción del cerebro y / o la disección y, en consecuencia negar o exagerar las diferencias reales con la edad en la función sináptica y la plasticidad. El envejecimiento y la patología amiloide también pueden exacerbar el daño del hipocampo sostenido durante el proceso de disección, una vez más que complica cualquier inferencias extraídas de la evaluación fisiológica. En este caso, hablamos de las medidas adoptadas durante el procedimiento de disección para minimizar estos problemas. Ejemplos de las respuestas sinápticas adquiridos en &quot;saludable&quot; y &quot;poco saludables&quot; rebanadas de ratas y ratones se proporcionan, así como representante de los experimentos de plasticidad sináptica. El posible impacto de otros factores metodológicos en la función sináptica en estos modelos animales (por ejemplo, componentes de la solución de grabación, los parámetros de estimulación) también se discuten. Aunque el foco de este artículo es sobre el uso de las ratas viejas y en ratones transgénicos, los novatos para cortar la fisiología debe encontrar suficiente detalle aquí para empezar a trabajar en sus propios estudios, usando una variedad de modelos de roedores.

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Preparation of Acute Hippocampal Slices from Rats and Transgenic Mice for the Study of Synaptic Alterations during Aging and Amyloid Pathology

En este artículo se describen los procedimientos para la preparación de rodajas de hipocampo de ratas y ratones transgénicos para el estudio de las alteraciones sinápticas del cerebro asociadas con el envejecimiento y relacionadas con la edad las enfermedades neurodegenerativas, tales como la enfermedad de Alzheimer.

Preparación de la aguda rodajas de hipocampo de ratas y ratones transgénicos para el estudio de las alteraciones sinápticas durante el envejecimiento y la patología amiloide

The rodent hippocampal slice preparation is perhaps the most broadly used tool for investigating mammalian synaptic function and plasticity. The ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Preparation of Oligomeric &beta;-amyloid1-42 and Induction of Synaptic Plasticity Impairment on Hippocampal Slices

Preparation of Oligomeric ÃƒÅ½Ã‚Â²-amyloid1-42 and Induction of Synaptic Plasticity Impairment on Hippocampal Slices

Preparación de oligómeros β-amiloide 1-42 Y la inducción del deterioro de plasticidad sináptica en rodajas de hipocampo

Impairment of synaptic connections is likely to underlie the subtle amnesic changes occurring at the early stages of Alzheimer s Disease (AD). ...

Investigación

Neurociencias

Vibrodissociation of Neurons from Rodent Brain Slices to Study Synaptic Transmission and Image Presynaptic Terminals

Vibrodissociation de las neuronas del cerebro de roedores Rodajas para el Estudio de la transmisión sináptica y la imagen terminales presinápticos

Mechanical dissociation of neurons from the central nervous system has the advantage that presynaptic boutons remain attached to the isolated neuron of ...

Preparation of Acute Subventricular Zone Slices for Calcium Imaging

Preparación de agudos Slices zona subventricular for Imaging Calcio

The subventricular zone (SVZ) is one of the two neurogenic zones in the postnatal brain. The SVZ contains densely packed cells, including neural ...

Dual Electrophysiological Recordings of Synaptically-evoked Astroglial and Neuronal Responses in Acute Hippocampal Slices

Dos registros electrofisiológicos de sinápticamente respuestas evocadas neuronal y astroglial en agudas rodajas de hipocampo

Astrocytes form together with neurons tripartite synapses, where they integrate and modulate neuronal activity. Indeed, astrocytes sense neuronal inputs ...

Stereotaxic Infusion of Oligomeric Amyloid-beta into the Mouse Hippocampus

Infusión estereotáxica de Oligomeric beta-amiloide en el hipocampo del ratón

Alzheimer&#8217;s disease is a neurodegenerative disease affecting the aging population. A key neuropathological feature of the disease is the ...

Investigation of Synaptic Tagging/Capture and Cross-capture using Acute Hippocampal Slices from Rodents

Investigación de sináptica Tagging / Captura y Cruz de captura utilizando aguda hipocampo rebanadas de Roedores

Synaptic tagging and capture (STC) and cross-tagging are two important mechanisms at cellular level that explain how synapse-specificity and associativity ...

Preparation of Acute Brain Slices Using an Optimized N-Methyl-D-glucamine Protective Recovery Method

Preparation of Acute Brain Slices Using an Optimized N-Methyl-D-glucamine Protective Recovery Method

Preparación de rebanadas cerebrales agudas mediante un optimizado N-metil-D-glucamine recuperación protección método

This protocol is a practical guide to the N-methyl-D-glucamine (NMDG) protective recovery method of brain slice preparation. Numerous recent studies have ...

Recording Synaptic Plasticity in Acute Hippocampal Slices Maintained in a Small-volume Recycling-, Perfusion-, and Submersion-type Chamber System

Grabación de la plasticidad sináptica en rebanadas Hippocampal agudas mantenidas en un pequeño volumen reciclado - perfusión- y sistema de cámara de tipo inmersión

Even though experiments on brain slices have been in use since 1951, problems remain that reduce the probability of achieving a stable and successful ...

Single Synapse Indicators of Glutamate Release and Uptake in Acute Brain Slices from Normal and Huntington Mice

Indicadores de sinapsis únicas de liberación y aceptación de glutamato en rebanadas cerebrales agudas de ratones normales y Huntington

Synapses are highly compartmentalized functional units that operate independently on each other. In Huntington&#39;s disease (HD) and other ...

Preparation of Acute Human Hippocampal Slices for Electrophysiological Recordings

Preparación de rebanadas agudas de hipocampo humano para grabaciones electrofisiológicas

Epilepsy affects about 1% of the world population and leads to a severe decrease in quality of life due to ongoing seizures as well as high risk for ...