Name: whole-cell recording of calcium release-activated calcium (crac) currents in human t lymphocytes
Uploaded: 2010-12-21T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Whole-Cell Recording of Calcium Release-Activated Calcium CRAC Currents in Human T Lymphocytes at JoVE.com

אנחנו אסירי תודה על המחלקה לפיזיולוגיה ממברנה לביולוגיה, אוניברסיטת קליפורניה דייויס לספק לנו מתקני אווירה מצוינת עבור המחקרים של תעלות יונים.

1. הכנת מנוחה לימפוציטים T האדם <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שימוש RosetteSep קוקטייל האדם T Cell העשרה צפיפות בינונית RosetteSep, לטהר בתאי T דגימות דם אדם על פי הוראות היצרן. אוכלוסיית התאים וכתוצאה מכך אמור להכיל 95% CD3 + T תאים נחים. אנו לטהר לימפוציטים מס...

<ol>
	<li>Parekh, A. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Store-operated+CRAC+channels:+function+in+health+and+disease.">Store-operated CRAC channels: function in health and disease.</a> Nat Rev Drug Discov. 9, 399-410 (2010).</li><li>Feske, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CRAC+channelopathies.">CRAC channelopathies.</a> Pflugers Arch. , (2010).</li><li>Lewis, R. S., Cahalan, . <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mitogen-induced+oscillations+of+cytosolic+Ca2++and+transmembrane+Ca2++current+in+human+leukemic+T+cells.">Mitogen-induced oscillations of cytosolic Ca2+ and transmembrane Ca2+ current in human leukemic T cells.</a> Cell Regul. 1, 99-112 (1989).</li><li>Zweifach, A., Lewis, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+inactivation+of+depletion-activated+calcium+current+(ICRAC)+due+to+local+calcium+feedback.">Rapid inactivation of depletion-activated calcium current (ICRAC) due to local calcium feedback.</a> J Gen Physiol. 105, 209-226 (1995).</li><li>Zweifach, A., Lewis, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Slow+calcium-dependent+inactivation+of+depletion-activated+calcium+current.+Store-dependent+and+-independent+mechanisms.">Slow calcium-dependent inactivation of depletion-activated calcium current. Store-dependent and -independent mechanisms.</a> J Biol Chem. 270, 14445-1451 (1995).</li><li>Zweifach, A., Lewis, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Calcium-dependent+potentiation+of+store-operated+calcium+channels+in+T+lymphocytes.">Calcium-dependent potentiation of store-operated calcium channels in T lymphocytes.</a> J Gen Physiol. 107, 597-610 (1996).</li><li>Prakriya, M., Lewis, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Separation+and+characterization+of+currents+through+store-operated+CRAC+channels+and+Mg2+-inhibited+cation+(MIC)+channels.">Separation and characterization of currents through store-operated CRAC channels and Mg2+-inhibited cation (MIC) channels.</a> J Gen Physiol. 119, 487-507 (2002).</li><li>Fomina, A. F., Fanger, C. M., Kozak, J. A., Cahalan, . <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single+channel+properties+and+regulated+expression+of+Ca(2+)+release-activated+Ca(2+)+(CRAC)+channels+in+human+T+cells.">Single channel properties and regulated expression of Ca(2+) release-activated Ca(2+) (CRAC) channels in human T cells.</a> J Cell Biol. 150, 1435-1444 (2000).</li><li>Sakmann, B., Neher, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Single-Channel Recording. , (1995).</li><li>Neher, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Correction+for+liquid+junction+potentials+in+patch+clamp+experiments.">Correction for liquid junction potentials in patch clamp experiments.</a> Methods Enzymol. 207, 123-1231 (1992).</li></ol>

החקירה של זרמים אלקטרו CRAC ב נחים אדם בתאי T היא משימה מאתגרת כי משרעת אנדוגני הנוכחית CRAC בתאים אלה הוא קטן בשל גודל תאים קטנים (בקוטר מנוחה האדם T התא בטווח של 5-8 מיקרומטר). כאן, אנו מציגים הליך צעד אחר צעד באופן מהימן שיא זרמים CRAC בבני אדם לימפוציטים T מנוחה מבודדים תאים ?...

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>RosetteSep Human T Cell Enrichment Cocktail</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>StemCell Technologies, Vancouver, BC, Canada</td>
<td>15061</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>RosetteSep Density Medium</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>StemCell Technologies </td>
<td>15705</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>RPMI-in 1640 medium w/glutamine/HEPES</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fisher, Waltham, MA</td>
<td>SH3025501</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Fetal Calf Serum</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Omega Scientific, Tarzana, CA</td>
<td>FB-01</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>GlutaMAX-I (100X solution)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen, Carlsbad, CA</td>
<td>35050</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>RPMI 1640 vitamin solution (100X)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma-Aldrich</td>
<td>7256</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>1640 amino acids solution (50X)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma-Aldrich</td>
<td>R7131</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Sodium pyruvate</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma-Aldrich</td>
<td>S8636</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>&beta;-Mercaptoethanol</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma-Aldrich</td>
<td>M7522</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Inositol trisphosphate</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma-Aldrich</td>
<td>19766</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>BAPTA</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma-Aldrich</td>
<td>A4926</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Poly-L-Lysine Hydrobromide</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma-Aldrich</td>
<td>P2636</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Lanthanum Chloride</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma-Aldrich</td>
<td>262072</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Thapsigargin</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Calbiochem</td>
<td>586005</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Sylgard 184 Silicon Elastomer Kit</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Dow Corning, Midland, MI</td>
<td>3097358-1004</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>HIPEC R6101 Semiconductor Protective Coating</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Dow Corning, Midland, MI</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>63-500 Series High-Performance Vibration Isolation Lab Table</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Technical Manufacturing, Peabody, MA</td>
<td>63-540</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>EPC 10 patch clamp amplifier with headstage</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>HEKA Instruments, Bellmore, NY</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Micromanipulator </td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sutter Instrument, Novato, CA </td>
<td>MP-285</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Olympus 1X71 Inverted microscope with 40x oil immersion objective</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Olympus America, Center Valley, PA</td>
<td>1X71</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Windows Computer</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Dell </td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Pulse software</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>HEKA Instruments</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Origin Scientific Graphing and Analysis Software</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>OriginLab, Northampton, MA</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Patch pipette puller</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sutter Instrument</td>
<td>P-97</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Borosilicate glass with filament (O.D.: 1.5mm and I.D.: 1.10mm</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sutter Instrument</td>
<td>BF150-110-7.5</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Narashige's Microforge</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Tritech Research, Los Angeles, CA</td>
<td>MF-830</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Silicon O-rings </td>
<td>&nbsp;</td>
<td>McMASTER-CARR, Santa Fe Springs, CA</td>
<td>111 S70</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Coverslips 25 mm </td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fisher Scientific </td>
<td>12-545-102 25 mm 25CIR.-1</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

whole-cell recording of calcium release-activated calcium (crac) currents in human t lymphocytes

ב לימפוציטים מסוג T, דלדול של Ca 2 + מ תאיים Ca 2 + חנות מוביל ההפעלה של plasmalemmal Ca 2 ערוצים +, שנקרא שחרור המופעל סידן סידן (CRAC) ערוצים. ערוצי CRAC לשחק תפקיד חשוב בוויסות של התפשטות תאים T ו ביטוי גנים. חריגה פונקציה CRAC ערוץ בתאי T נקשר חמורה כשל חיסוני ומחלות אוטואימוניות וכן בשילוב 1, 2. לימוד פונקציה ערוץ CRAC בבני אדם בתאי T עשויה לחשוף המנגנונים המולקולריים חדש המסדיר התגובות החיסוניות נורמלי לפענח את הגורמים מחלות אנושיות בנושא. הקלטות של זרמים אלקטרו קרום לספק הערכה מדויקת ביותר של נכסים ערוץ פונקציונלי ורגולציה שלהם. הערכה של זרמים אלקטרו CRAC ערוץ Jurkat בתאי T, לוקמיה האדם T שורת תאים, בוצעה לראשונה יותר מאשר לפני 20 שנה 3, לעומת זאת, מדידות CRAC הנוכחי נורמלי בתאי T אנושיים נותר משימה מאתגרת. הקשיים ברישום זרמי CRAC ערוץ נורמלי בתאי T הן מורכב על ידי העובדה דם הנגזרות לימפוציטים מסוג T הם הרבה יותר קטנים בגודל מאשר תאים Jurkat T, ולכן אנדוגני כל תא זרמים CRAC נמוכים מאוד משרעת. הנה, אנחנו נותנים הליך צעד אחר צעד שאנחנו משתמשים באופן שגרתי להקליט את Ca 2 + או Na + זרמים דרך ערוצים CRAC ב נחים אדם בתאי T מבודדים מהדם ההיקפי של מתנדבים בריאים. השיטה המתוארת כאן אומצה מהנהלים המשמש הקלטה הזרמים CRAC בתאי T Jurkat והופעל אדם בתאי T 4-8.

Watch this Scientific Journal Video about Whole-Cell Recording of Calcium Release-Activated Calcium CRAC Currents in Human T Lymphocytes at JoVE.com

Whole-Cell Recording of Calcium Release-Activated Calcium CRAC Currents in Human T Lymphocytes

אנו מספקים פרוטוקול צעד אחר צעד עבור הקלטת כל תא תיקון מהדק של סידן סידן שחרור פעילה (CRAC) זרמים היקפי mononuclear תאים שמקורם בדם אנושי לימפוציטים-T.

Whole Cell-הקלטה של ​​סידן סידן שחרור פעילה (CRAC) זרמים האדם לימפוציטים-T

In T lymphocytes, depletion of Ca2+ from the intracellular Ca2+ store leads to activation of plasmalemmal Ca2+ channels, called Calcium Release-Activated ...

Research

JoVE Journal

Biology

Whole-Cell Recording of Calcium Release-Activated Calcium (CRAC) Currents in Human T Lymphocytes

Loading Drosophila Nerve Terminals with Calcium Indicators

טוען תסיסנית מסופי עצב עם אינדיקטורים סידן

Calcium plays many roles in the nervous system but none more impressive than as the trigger for neurotransmitter release, and none more profound than as ...

In Vivo 2-Photon Calcium Imaging in Layer 2/3 of Mice

In vivo 2-Photon סידן הדמיה ב Layer 2 / 3 של עכברים

To understand network dynamics of microcircuits in the neocortex, it is essential to simultaneously record the activity of a large number of neurons .  ...

Whole-cell Recordings of Light Evoked Excitatory Synaptic Currents in the Retinal Slice

שלמות התא הקלטות של אור עורר זרמים Synaptic מעוררים פורסים את רשתית

We use the whole-cell patch clamp technique to study the synaptic circuitry that underlies visual information processing in the retina. In this video, we ...

Calcium Imaging of Cortical Neurons using Fura-2 AM

סידן הדמיה של נוירונים קליפתיים באמצעות Fura, 02:00

Calcium imaging is a common technique that is useful for measuring calcium signals in cultured cells. Calcium imaging techniques take advantage of calcium ...

Measuring Near Plasma Membrane and Global Intracellular Calcium Dynamics in Astrocytes

מדידת הקרוב ממברנה פלזמה ו Global Dynamics סידן תאיים בתוך האסטרוציטים

The brain contains glial cells.  Astrocytes, a type of glial cell, have long been known to provide a passive supportive role to neurons. However, ...

Monitoring Dynamic Changes In Mitochondrial Calcium Levels During Apoptosis Using A Genetically Encoded Calcium Sensor

ניטור שינויים דינמיים רמות הסידן מיטוכונדריאלי במהלך אפופטוזיס באמצעות חיישן סידן מקודד גנטית

Dynamic changes in intracellular calcium concentration in response to various stimuli regulates many cellular processes such as proliferation, ...

Measuring Fast Calcium Fluxes in Cardiomyocytes

מדידת Fluxes סידן מהיר ב cardiomyocytes

Cardiomyocytes have multiple Ca2+ fluxes of varying duration that work together to optimize function 1,2. Changes in Ca2+ activity in response to ...

Assessment of Calcium Sparks in Intact Skeletal Muscle Fibers

הערכה של סידן ניצוצות בסיבי שריר שלד שלמים

Maintaining homeostatic Ca2+ signaling is a fundamental physiological process in living cells. Ca2+ sparks are the elementary units of Ca2+ signaling in ...

Cytosolic Calcium Measurements in Renal Epithelial Cells by Flow Cytometry

מדידות סידן cytosolic בתאי האפיתל כליות על ידי cytometry הזרימה

A variety of cellular processes, both physiological and pathophysiological, require or are governed by calcium, including exocytosis, mitochondrial ...

Real-time In Vivo Recording of Arabidopsis Calcium Signals During Insect Feeding Using a Fluorescent Biosensor

Real-time In Vivo Recording of Arabidopsis Calcium Signals During Insect Feeding Using a Fluorescent Biosensor

בזמן אמת In Vivo הקלטה של תודרנית סידן אותות שהאכילה חרקים באמצעות ביוסנסור פלורסנט

Calcium ions are predicted to be key signaling entities during biotic interactions, with calcium signaling forming an established part of the plant ...

Whole Cell-הקלטה של ​​סידן סידן שחרור פעילה (CRAC) זרמים האדם לימפוציטים-T

Whole Cell-הקלטה של סידן סידן שחרור פעילה (CRAC) זרמים האדם לימפוציטים-T