Name: isolation of brain and spinal cord mononuclear cells using percoll gradients
Uploaded: 2011-02-02T17:00:00
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यह काम राष्ट्रीय मल्टीपल स्केलेरोसिस सोसायटी (टीए / ३०२१ - A1 एईसी टी) और सैन एंटोनियो में टेक्सास विश्वविद्यालय द्वारा समर्थित किया गया.

अभिकर्मकों की तैयारी 10X HBSS के एक भाग के साथ Ca बिना percoll के नौ भागों मिश्रण से तैयार शेयर isotonic percoll (एसआईपी), मस्तिष्क 4 प्रति मिलीलीटर, + + और मिलीग्राम + +. 1X HBSS में 70% से कम पीएं बिना तैयार Ca + + और मिल...

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	<li>Sedgwick, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+direct+characterization+of+resident+microglial+cells+from+the+normal+and+inflamed+central+nervous+system.">Isolation and direct characterization of resident microglial cells from the normal and inflamed central nervous system.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 88, 7438-7442 (1991).</li><li>Ponomarev, E. D., Shriver, L. P., Maresz, K., Dittel, B. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microglial+cell+activation+and+proliferation+precedes+the+onset+of+CNS+autoimmunity.">Microglial cell activation and proliferation precedes the onset of CNS autoimmunity.</a> J. Neurosci. Res. 81, 374-389 (2005).</li><li>Ford, A. L., Goodsall, A. L., Hickey, W. F., Sedgwick, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Normal+adult+ramified+microglia+separated+from+other+central+nervous+system+macrophages+by+flow+cytometric+sorting.+Phenotypic+differences+defined+and+direct+ex+vivo+antigen+presentation+to+myelin+basic+protein-reactive+CD4++T+cells+compared.">Normal adult ramified microglia separated from other central nervous system macrophages by flow cytometric sorting. Phenotypic differences defined and direct ex vivo antigen presentation to myelin basic protein-reactive CD4+ T cells compared.</a> J Immunol. 154, 4309-4321 (1995).</li><li>Cardona, A. E., Huang, D., Sasse, M. E., Ransohoff, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+murine+microglial+cells+for+RNA+analysis+or+flow+cytometry.">Isolation of murine microglial cells for RNA analysis or flow cytometry.</a> Nat. Protoc. 1, 1947-1951 (2006).</li><li>Juedes, A. E., Ruddle, N. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Resident+and+infiltrating+central+nervous+system+APCs+regulate+the+emergence+and+resolution+of+experimental+autoimmune+encephalomyelitis.">Resident and infiltrating central nervous system APCs regulate the emergence and resolution of experimental autoimmune encephalomyelitis.</a> J. Immunol. 166, 5168-5175 (2001).</li><li>Prinz, M., Priller, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tickets+to+the+brain:+Role+of+CCR2+and+CX(3)CR1+in+myeloid+cell+entry+in+the+CNS.">Tickets to the brain: Role of CCR2 and CX(3)CR1 in myeloid cell entry in the CNS.</a> J Neuroimmunol. , (2010).</li><li>Mildner, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microglia+in+the+adult+brain+arise+from+Ly-6ChiCCR2++monocytes+only+under+defined+host+conditions.">Microglia in the adult brain arise from Ly-6ChiCCR2+ monocytes only under defined host conditions.</a> Nat. Neurosci. 10, 1544-1553 (2007).</li><li>Djukic, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Circulating+monocytes+engraft+in+the+brain,+differentiate+into+microglia+and+contribute+to+the+pathology+following+meningitis+in+mice.">Circulating monocytes engraft in the brain, differentiate into microglia and contribute to the pathology following meningitis in mice.</a> Brain. 129, 2394-2403 (2006).</li></ol>

सामान्य और सूजन माउस ऊतकों से सीएनएस leukocytes में सेल सतह मार्करों का विश्लेषण कई 1-3 दशकों के लिए उपयोग किया गया है. अलगाव प्रोटोकॉल घनत्व centrifugation 4 द्वारा microglia और leukocytes की जुदाई में आधारित हैं. यहाँ हम सीए?...

ऊतक homogenization और gradients <ul><li> Percoll (Amersham) </li><li> 10X हैंक्स कैल्शियम और मैग्नीशियम के बिना बैलेंस्ड नमक समाधान (Gibco) </li><li> RPMI 1640 मध्यम, phenol के लाल के बिना (Gibco) </li><li> सात मिलीलीटर या 15 मिलीलीटर Dounce ऊतक Grinders (VWR) </li></ul> प्रवाह cytometry <ul><li> सेल धुंधला बफर (Biolegend) </li><li> शुद्ध चूहा CD16/CD32 विरोधी माउस (माउस बी.डी. एफसी ब्लॉक), बी.डी. Pharmingen </li><li> Hemacytometer (फिशर) </li><li> विरोधी CD45 - माउस (क्लोन 30-F11), सीडी 4 (क्लोन RM4 5), CD19 (6D5 क्लोन), BioLegend </li><li> 10X फास्फेट खारा, कैल्शियम और मैग्नीशियम के बिना, buffered (थर्मो वैज्ञानिक) </li><li> Paraformaldehyde (सिग्मा Aldrich) </li><li> प्रवाह cytometry विश्लेषण एक LSR II (बी बायोसाइंसेज) के साथ प्रदर्शन </li></ul>

isolation of brain and spinal cord mononuclear cells using percoll gradients

प्रतिरक्षा कोशिकाओं है कि संक्रमण, आघात, autoimmunity, या neurodegeneration के दौरान केंद्रीय तंत्रिका तंत्र (CNS) घुसपैठ के अलगाव, अक्सर उनके phenotype और effector कार्यों को परिभाषित करने की आवश्यकता है. Histochemical दृष्टिकोण घुसपैठ कोशिकाओं के स्थान का निर्धारण करने के लिए और जुड़े विकृति सीएनएस विश्लेषण में महत्वपूर्ण भूमिका निभाई हैं. हालांकि, में स्वस्थानी histochemistry और immunofluorescent धुंधला तकनीक एंटीबॉडी कि एक ही समय में इस्तेमाल किया जा सकता है एक विशेष ऊतकों में प्रतिरक्षा सेल उपप्रकारों विशेषताएँ की संख्या द्वारा सीमित हैं. इसलिए, प्रवाह cytometry द्वारा प्रतिरक्षा phenotyping के साथ संयोजन के रूप में histological दृष्टिकोण को पूरी तरह से स्थानीय सीएनएस घुसपैठ की संरचना विशेषताएँ महत्वपूर्ण हैं. इस प्रोटोकॉल discontinous percoll gradients से अधिक सेलुलर निलंबन सीएनएस की जुदाई पर आधारित है. वर्तमान लेख के लिए एक तेजी से कुशलता से मस्तिष्क और रीढ़ की हड्डी के ऊतकों है कि प्रभावी ढंग से विभिन्न प्रवाह cytometry द्वारा एक एकल नमूने में प्रतिरक्षा सेल आबादी की पहचान के लिए उपयोग किया जा सकता से mononuclear कोशिकाओं को अलग प्रोटोकॉल का वर्णन करता है.

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Isolation of Brain and Spinal Cord Mononuclear Cells Using Percoll Gradients

वर्तमान लेख के लिए एक तेजी से कुशलता से मस्तिष्क और रीढ़ की हड्डी के ऊतकों है कि प्रभावी ढंग से प्रवाह cytometric विश्लेषण के लिए उपयोग किया जा सकता से mononuclear कोशिकाओं को अलग प्रोटोकॉल का वर्णन करता है.

मस्तिष्क और स्पाइनल कॉर्ड mononuclear कोशिकाओं के अलगाव Percoll gradients का उपयोग

Isolation of immune cells that infiltrate the central nervous system (CNS) during infection, trauma, autoimmunity or neurodegeneration, is often required ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Isolation of Brain-infiltrating Leukocytes

ब्रेन - घुसपैठ leukocytes के अलगाव

We describe a method for preparing brain infiltrating leukocytes (BILs) from mice. We demonstrate how to infect mice with Theiler's murine ...

Isolation of Precursor B-cell Subsets from Umbilical Cord Blood

अग्रदूत बी सेल सबसेट के गर्भनाल रक्त से अलगाव

Umbilical cord blood is highly enriched for hematopoietic progenitor cells at different lineage commitment stages. We have developed a protocol for ...

Isolation of Myeloid Dendritic Cells and Epithelial Cells from Human Thymus

मानव थाइमस से माइलॉयड वृक्ष के समान कोशिकाओं और उपकला कोशिकाओं का अलगाव

In this protocol we provide a method to isolate dendritic cells (DC) and epithelial cells (TEC) from the human thymus. DC and TEC are the major antigen ...

Isolation and Flow Cytometric Analysis of Immune Cells from the Ischemic Mouse Brain

अलगाव और इस्केमिक माउस मस्तिष्क से प्रतिरक्षा कोशिकाओं के प्रवाह cytometric विश्लेषण

Ischemic stroke initiates a robust inflammatory response that starts in the intravascular compartment and involves rapid activation of brain resident ...

Isolation and Flow Cytometric Analysis of Glioma-infiltrating Peripheral Blood Mononuclear Cells

अलगाव और Glioma-घुसपैठ परिधीय रक्त कोशिकाओं mononuclear के प्रवाह cytometric विश्लेषण

Our laboratory has recently demonstrated that natural killer (NK) cells are capable of eradicating orthotopically implanted mouse GL26 and rat CNS-1 ...

Isolation of Lamina Propria Mononuclear Cells from Murine Colon Using Collagenase E

Murine Colon से Lamina Propria मोनोन्यूक्लियर सेल के अलगाव Collagenase ई का उपयोग

The intestine is the home to the largest number of immune cells in the body. The small and large intestinal immune systems police exposure to exogenous ...

Isolation of Tonsillar Mononuclear Cells to Study Ex Vivo Innate Immune Responses in a Human Mucosal Lymphoid Tissue

एक मानव म्यूकोसल लिम्फोइड ऊतक में पूर्व वीवो जन्मजात प्रतिरक्षा प्रतिक्रियाओं का अध्ययन करने के लिए टॉन्सिलर मोनोन्यूक्लियर कोशिकाओं का अलगाव

Studying isolated cells from mucosa-associated lymphoid tissues (MALT) allows understanding of immune cells response in pathologies involving mucosal ...

Flotation-Based T Cell Isolation, Activation, and Expansion from Human Peripheral Blood Mononuclear Cell Samples Using Microbubbles

माइक्रोबबल का उपयोग करके मानव परिधीय रक्त मोनोन्यूक्लियर सेल नमूनों से प्लवनशीलता-आधारित टी सेल अलगाव, सक्रियण और विस्तार

The process of isolating T cells from peripheral blood mononuclear&#160;cells (PBMCs) to establish ex vivo cultures is crucial for research, clinical ...

PBMC Collection and Cryostorage for Mitochondrial Bioenergetics Analysis

Cryopreservation and Bioenergetic Evaluation of Human Peripheral Blood Mononuclear Cells

Preservation of Bioenergetic Parameters in Peripheral Blood Mononuclear Cells After Cryopreservation (Video) | JoVE

क्रायोप्रिजर्वेशन और मानव परिधीय रक्त मोनोन्यूक्लियर कोशिकाओं का बायोएनेरजेटिक मूल्यांकन

The physiological functions of eukaryotic cells rely on energy mainly provided by mitochondria. Mitochondrial dysfunction is linked to metabolic diseases ...

Histological Staining of Spinal Cord for Assessing EAE Disease Severity

Scoring Central Nervous System Inflammation, Demyelination, and Axon Injury in Experimental Autoimmune Encephalomyelitis

Unveiling the Pathway Linking Obesity to Autoimmune Inflammation in Multiple Sclerosis (Video) | JoVE

स्कोरिंग केंद्रीय तंत्रिका तंत्र सूजन, demyelination, और प्रायोगिक autoimmune encephalomyelitis में अक्षतंतु चोट

Experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE) is a common immune-based model of multiple sclerosis (MS). This disease can be induced in rodents by ...