Name: isolation of brain and spinal cord mononuclear cells using percoll gradients
Uploaded: 2011-02-02T17:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Isolation of Brain and Spinal Cord Mononuclear Cells Using Percoll Gradients at JoVE.com

Работа выполнена при поддержке Национального общества рассеянного склероза (TA 3021-A1 / T для AEC) и Техасского университета в Сан-Антонио.

Подготовка реагентов Подготовка акции изотонический Перколла (SIP), 4 мл на мозг, путем смешивания 9 частей Перколла с одной частью 10X HBSS без Ca + + и Mg + +. Подготовка SIP на 70% в 1X HBSS без Ca + + и Mg + +, 2 мл на мозг обойтись в 15 мл полипропилен конической трубе. <p class="jove_con...

<ol>
	<li>Sedgwick, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+direct+characterization+of+resident+microglial+cells+from+the+normal+and+inflamed+central+nervous+system.">Isolation and direct characterization of resident microglial cells from the normal and inflamed central nervous system.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 88, 7438-7442 (1991).</li><li>Ponomarev, E. D., Shriver, L. P., Maresz, K., Dittel, B. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microglial+cell+activation+and+proliferation+precedes+the+onset+of+CNS+autoimmunity.">Microglial cell activation and proliferation precedes the onset of CNS autoimmunity.</a> J. Neurosci. Res. 81, 374-389 (2005).</li><li>Ford, A. L., Goodsall, A. L., Hickey, W. F., Sedgwick, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Normal+adult+ramified+microglia+separated+from+other+central+nervous+system+macrophages+by+flow+cytometric+sorting.+Phenotypic+differences+defined+and+direct+ex+vivo+antigen+presentation+to+myelin+basic+protein-reactive+CD4++T+cells+compared.">Normal adult ramified microglia separated from other central nervous system macrophages by flow cytometric sorting. Phenotypic differences defined and direct ex vivo antigen presentation to myelin basic protein-reactive CD4+ T cells compared.</a> J Immunol. 154, 4309-4321 (1995).</li><li>Cardona, A. E., Huang, D., Sasse, M. E., Ransohoff, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+murine+microglial+cells+for+RNA+analysis+or+flow+cytometry.">Isolation of murine microglial cells for RNA analysis or flow cytometry.</a> Nat. Protoc. 1, 1947-1951 (2006).</li><li>Juedes, A. E., Ruddle, N. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Resident+and+infiltrating+central+nervous+system+APCs+regulate+the+emergence+and+resolution+of+experimental+autoimmune+encephalomyelitis.">Resident and infiltrating central nervous system APCs regulate the emergence and resolution of experimental autoimmune encephalomyelitis.</a> J. Immunol. 166, 5168-5175 (2001).</li><li>Prinz, M., Priller, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tickets+to+the+brain:+Role+of+CCR2+and+CX(3)CR1+in+myeloid+cell+entry+in+the+CNS.">Tickets to the brain: Role of CCR2 and CX(3)CR1 in myeloid cell entry in the CNS.</a> J Neuroimmunol. , (2010).</li><li>Mildner, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microglia+in+the+adult+brain+arise+from+Ly-6ChiCCR2++monocytes+only+under+defined+host+conditions.">Microglia in the adult brain arise from Ly-6ChiCCR2+ monocytes only under defined host conditions.</a> Nat. Neurosci. 10, 1544-1553 (2007).</li><li>Djukic, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Circulating+monocytes+engraft+in+the+brain,+differentiate+into+microglia+and+contribute+to+the+pathology+following+meningitis+in+mice.">Circulating monocytes engraft in the brain, differentiate into microglia and contribute to the pathology following meningitis in mice.</a> Brain. 129, 2394-2403 (2006).</li></ol>

Анализ поверхности клеток маркеры в ЦНС лейкоцитов из нормальных и воспаленных тканях мышей был использован в течение нескольких десятилетий 1-3. Изоляция протоколы основаны на разделении микроглии и лейкоцитов по плотности 4 центрифугирования. Здесь мы опишем быстрый и эф...

Гомогенизации тканей и градиенты <ul><li> Перколла (Amersham) </li><li> Сбалансированный Соль 10X Хэнкса решение, без кальция и магния (Gibco) </li><li> Средний RPMI 1640, без фенола красного (Gibco) </li><li> 7-мл или 15 мл Dounce тканей Измельчители (VWR) </li></ul> Проточная цитометрия <ul><li> Сотовые Окрашивание Buffer (Biolegend) </li><li> Очищенная Крыса антимышиным CD16/CD32 (мышь BD Fc Block), BD Pharmingen </li><li> Hemacytometer (Fisher) </li><li> Анти-CD45 мыши (клон 30-F11), CD4 (клон RM4-5), CD19 (клон 6D5), BioLegend </li><li> 10 раз фосфатным буферным солевым раствором, без кальция и магния (Thermo Scientific) </li><li> Параформальдегид (Sigma Aldrich) </li><li> Анализ проточной цитометрии осуществляется с LSR II (BD Biosciences) </li></ul>

isolation of brain and spinal cord mononuclear cells using percoll gradients

Выделение иммунные клетки, которые проникают в центральную нервную систему (ЦНС), во время инфекции, травмы, аутоиммунные заболевания или нейродегенерации, часто требуется, чтобы определить их фенотип и эффекторные функции. Гистохимические подходы играют важную роль для определения расположения проникновения клеток и исследованы соответствующие патологии ЦНС. Тем не менее, на месте гистохимии и иммунофлуоресцентного методы окраски ограничено количество антител, которые могут быть использованы за один раз, чтобы характеризовать иммунную подтипов ячейку в определенной ткани. Таким образом, гистологические подходов в сочетании с иммунной фенотипирование методом проточной цитометрии имеют решающее значение для полного описания состава местной инфильтрационной ЦНС. Этот протокол основан на разделении ЦНС сотовой надстройки над discontinous Перколла градиентов. Данная статья описывает быстрый протокол эффективно изолировать мононуклеарных клеток из головного и спинного мозга ткани, которые могут быть эффективно использованы для идентификации различных иммунных клеточных популяций в одном образце с помощью проточной цитометрии.

Watch this Scientific Journal Video about Isolation of Brain and Spinal Cord Mononuclear Cells Using Percoll Gradients at JoVE.com

Isolation of Brain and Spinal Cord Mononuclear Cells Using Percoll Gradients

Данная статья описывает быстрый протокол эффективно изолировать мононуклеарных клеток из головного и спинного мозга ткани, которые могут быть эффективно использованы для проточной цитометрии анализа.

Выделение головного и спинного мозга одноядерных клеток Использование Перколла Градиенты

Isolation of immune cells that infiltrate the central nervous system (CNS) during infection, trauma, autoimmunity or neurodegeneration, is often required ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Isolation of Brain-infiltrating Leukocytes

Выделение Брейн-Лейкоциты проникают

We describe a method for preparing brain infiltrating leukocytes (BILs) from mice. We demonstrate how to infect mice with Theiler's murine ...

Isolation of Precursor B-cell Subsets from Umbilical Cord Blood

Выделение предшественника В-клеточных подмножеств из пуповинной крови

Umbilical cord blood is highly enriched for hematopoietic progenitor cells at different lineage commitment stages. We have developed a protocol for ...

Isolation of Myeloid Dendritic Cells and Epithelial Cells from Human Thymus

Изоляция миелоидных дендритных клеток и эпителиальных клеток из человеческого тимуса

In this protocol we provide a method to isolate dendritic cells (DC) and epithelial cells (TEC) from the human thymus. DC and TEC are the major antigen ...

Isolation and Flow Cytometric Analysis of Immune Cells from the Ischemic Mouse Brain

Выделение и проточной цитометрии анализ иммунных клеток из мозга ишемического Mouse

Ischemic stroke initiates a robust inflammatory response that starts in the intravascular compartment and involves rapid activation of brain resident ...

Isolation and Flow Cytometric Analysis of Glioma-infiltrating Peripheral Blood Mononuclear Cells

Выделение и проточной цитометрии анализ глиомы инфильтрирующие мононуклеарных клеток периферической крови

Our laboratory has recently demonstrated that natural killer (NK) cells are capable of eradicating orthotopically implanted mouse GL26 and rat CNS-1 ...

Isolation of Lamina Propria Mononuclear Cells from Murine Colon Using Collagenase E

Изоляция Ламина Проприа моноядерных клеток из Курина толстой с использованием коллагеназа E

The intestine is the home to the largest number of immune cells in the body. The small and large intestinal immune systems police exposure to exogenous ...

Isolation of Tonsillar Mononuclear Cells to Study Ex Vivo Innate Immune Responses in a Human Mucosal Lymphoid Tissue

Изоляция миндалевидных моноядерных клеток для изучения Ex Vivo Врожденные иммунные реакции в человеческой мукозальной лимфоидной ткани

Studying isolated cells from mucosa-associated lymphoid tissues (MALT) allows understanding of immune cells response in pathologies involving mucosal ...

Flotation-Based T Cell Isolation, Activation, and Expansion from Human Peripheral Blood Mononuclear Cell Samples Using Microbubbles

Изоляция, активация и расширение Т-клеток на основе флотации из образцов мононуклеарных клеток периферической крови человека с использованием микропузырьков

The process of isolating T cells from peripheral blood mononuclear&#160;cells (PBMCs) to establish ex vivo cultures is crucial for research, clinical ...

PBMC Collection and Cryostorage for Mitochondrial Bioenergetics Analysis

Cryopreservation and Bioenergetic Evaluation of Human Peripheral Blood Mononuclear Cells

Preservation of Bioenergetic Parameters in Peripheral Blood Mononuclear Cells After Cryopreservation (Video) | JoVE

Криоконсервация и биоэнергетическая оценка мононуклеарных клеток периферической крови человека

The physiological functions of eukaryotic cells rely on energy mainly provided by mitochondria. Mitochondrial dysfunction is linked to metabolic diseases ...

Histological Staining of Spinal Cord for Assessing EAE Disease Severity

Scoring Central Nervous System Inflammation, Demyelination, and Axon Injury in Experimental Autoimmune Encephalomyelitis

Unveiling the Pathway Linking Obesity to Autoimmune Inflammation in Multiple Sclerosis (Video) | JoVE

Оценка воспаления, демиелинизации и повреждения аксонов центральной нервной системы при экспериментальном аутоиммунном энцефаломиелите

Experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE) is a common immune-based model of multiple sclerosis (MS). This disease can be induced in rodents by ...