Name: isolation of brain and spinal cord mononuclear cells using percoll gradients
Uploaded: 2011-02-02T17:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Isolation of Brain and Spinal Cord Mononuclear Cells Using Percoll Gradients at JoVE.com

Bu çalışma, Ulusal Multipl Skleroz Derneği (TA AEC 3021-A1 / T) ve University of Texas at San Antonio tarafından desteklenmiştir.

Reaktiflerin hazırlanması Ca olmadan bir bölümünü 10X HBSS Percoll 9 parça karıştırılarak stok izotonik Percoll (SIP), beyin başına 4 ml, hazırlama + + ve Mg + +. 1X HBSS% 70 olmadan SIP hazırlayın Ca + + ve Mg + +, 2 ml, 15 ml polipropilen konik tüp boşaltılan beyin başına. Not: Percoll oda sıcaklığında kullanılması gerektiğini tavsiye edilir, soğuk kullanılması halinde, hücreler gelme eğilimindedirler ...

<ol>
	<li>Sedgwick, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+direct+characterization+of+resident+microglial+cells+from+the+normal+and+inflamed+central+nervous+system.">Isolation and direct characterization of resident microglial cells from the normal and inflamed central nervous system.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 88, 7438-7442 (1991).</li><li>Ponomarev, E. D., Shriver, L. P., Maresz, K., Dittel, B. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microglial+cell+activation+and+proliferation+precedes+the+onset+of+CNS+autoimmunity.">Microglial cell activation and proliferation precedes the onset of CNS autoimmunity.</a> J. Neurosci. Res. 81, 374-389 (2005).</li><li>Ford, A. L., Goodsall, A. L., Hickey, W. F., Sedgwick, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Normal+adult+ramified+microglia+separated+from+other+central+nervous+system+macrophages+by+flow+cytometric+sorting.+Phenotypic+differences+defined+and+direct+ex+vivo+antigen+presentation+to+myelin+basic+protein-reactive+CD4++T+cells+compared.">Normal adult ramified microglia separated from other central nervous system macrophages by flow cytometric sorting. Phenotypic differences defined and direct ex vivo antigen presentation to myelin basic protein-reactive CD4+ T cells compared.</a> J Immunol. 154, 4309-4321 (1995).</li><li>Cardona, A. E., Huang, D., Sasse, M. E., Ransohoff, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+murine+microglial+cells+for+RNA+analysis+or+flow+cytometry.">Isolation of murine microglial cells for RNA analysis or flow cytometry.</a> Nat. Protoc. 1, 1947-1951 (2006).</li><li>Juedes, A. E., Ruddle, N. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Resident+and+infiltrating+central+nervous+system+APCs+regulate+the+emergence+and+resolution+of+experimental+autoimmune+encephalomyelitis.">Resident and infiltrating central nervous system APCs regulate the emergence and resolution of experimental autoimmune encephalomyelitis.</a> J. Immunol. 166, 5168-5175 (2001).</li><li>Prinz, M., Priller, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tickets+to+the+brain:+Role+of+CCR2+and+CX(3)CR1+in+myeloid+cell+entry+in+the+CNS.">Tickets to the brain: Role of CCR2 and CX(3)CR1 in myeloid cell entry in the CNS.</a> J Neuroimmunol. , (2010).</li><li>Mildner, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microglia+in+the+adult+brain+arise+from+Ly-6ChiCCR2++monocytes+only+under+defined+host+conditions.">Microglia in the adult brain arise from Ly-6ChiCCR2+ monocytes only under defined host conditions.</a> Nat. Neurosci. 10, 1544-1553 (2007).</li><li>Djukic, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Circulating+monocytes+engraft+in+the+brain,+differentiate+into+microglia+and+contribute+to+the+pathology+following+meningitis+in+mice.">Circulating monocytes engraft in the brain, differentiate into microglia and contribute to the pathology following meningitis in mice.</a> Brain. 129, 2394-2403 (2006).</li></ol>

1-3 birkaç on yıl için, normal ve iltihaplı fare dokulardan MSS lökosit hücre yüzey belirteçlerinin analizi kullanılmıştır . İzolasyon protokolleri yoğunluğu santrifüj 4 mikroglia ve lökositlerin ayrılık dayanır. Burada izole MSS lökosit süreksiz Percoll gradyanlar kullanarak hızlı ve etkin bir yöntem açıklanmaktadır. , CD4, CD8, CD11b, CD19, vb gibi çeşitli antikorlar ile boyanarak hücre izolasyonu sonra, as-ama-CD45 sınırlı değil, belirli bir patoloji indüksiyo...

Doku homojenizasyon ve Degradeler <ul><li> Percoll (Amersham) </li><li> Kalsiyum ve Magnezyum olmadan 10X Hanks &#39;Dengeli Tuz Çözeltisi (Gibco) </li><li> Fenol kırmızısı RPMI Orta olmadan 1640, (Gibco) </li><li> 7-ml veya 15 ml Dounce Doku Değirmenleri (VWR) </li></ul> Flow sitometri <ul><li> Hücre Boyama Tampon (Biolegend) </li><li> Saf Rat Anti-CD16/CD32 Fare (Mouse BD Fc Blok), BD Pharmingen </li><li> Hemasitometre (Fisher) </li><li> Anti-fare CD45 (klon 30-F11), CD4 (klon RM4-5), CD19 (klon 6D5), BioLegend </li><li> Kalsiyum ve Magnezyum olmadan 10X Fosfat Tamponlu Salin (Thermo Scientific) </li><li> Paraformaldehit (Sigma Aldrich) </li><li> Flow sitometri analizi ile yapılan bir LSR II (BD Biosciences) </li></ul>

isolation of brain and spinal cord mononuclear cells using percoll gradients

İzolasyon, enfeksiyon, travma, otoimmünite veya nörodejenerasyon sırasında santral sinir sistemi (MSS) sızmak bağışıklık hücreleri, sık sık fenotip ve efektör fonksiyonları tanımlamak için gereklidir. Histokimyasal yaklaşımlar infiltre hücrelerin yerini belirlemek ve patoloji ilişkili MSS analiz etmek için enstrümantal. Ancak, in-situ histokimyası ve immunofluorescent boyama teknikleri belirli bir doku immün hücre alt tiplerinin karakterize etmek için bir kez kullanılabilir antikor sayısı ile sınırlıdır. Bu nedenle, bağışıklık fenotipleme flow sitometri ile birlikte histolojik yaklaşımlar tamamen yerel MSS infiltrasyon kompozisyon karakterize etmek için kritik öneme sahiptir. Bu protokol, süreksiz Percoll gradyanları üzerinde MSS hücresel süspansiyonlar ayrılması dayanmaktadır. Mevcut makalede, verimli, flow sitometri ile tek bir örnek, çeşitli bağışıklık hücre popülasyonlarının belirlenmesi için etkin bir şekilde kullanılabilir beyin ve omurilik dokularında mononükleer hücreleri izole etmek için hızlı bir protokol tanımlamaktadır.

Watch this Scientific Journal Video about Isolation of Brain and Spinal Cord Mononuclear Cells Using Percoll Gradients at JoVE.com

Isolation of Brain and Spinal Cord Mononuclear Cells Using Percoll Gradients

Mevcut makalede, verimli, etkin bir şekilde akışını sitometrik analizler için kullanılabilir beyin ve omurilik dokularında mononükleer hücreleri izole etmek için hızlı bir protokol tanımlamaktadır.

Beyin ve Omurilik Mononükleer Hücreleri İzolasyon Percoll Degradeler

Isolation of immune cells that infiltrate the central nervous system (CNS) during infection, trauma, autoimmunity or neurodegeneration, is often required ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Isolation of Brain-infiltrating Leukocytes

Beyin-infiltre lökositler izolasyonu

We describe a method for preparing brain infiltrating leukocytes (BILs) from mice. We demonstrate how to infect mice with Theiler's murine ...

Isolation of Precursor B-cell Subsets from Umbilical Cord Blood

Kordon Kanı gelen Prekürsör B-hücreli altkümeleri İzolasyonu

Umbilical cord blood is highly enriched for hematopoietic progenitor cells at different lineage commitment stages. We have developed a protocol for ...

Isolation of Myeloid Dendritic Cells and Epithelial Cells from Human Thymus

İnsan Thymus ile myeloid dendritik hücreleri ve epitel hücreleri İzolasyonu

In this protocol we provide a method to isolate dendritic cells (DC) and epithelial cells (TEC) from the human thymus. DC and TEC are the major antigen ...

Isolation and Flow Cytometric Analysis of Immune Cells from the Ischemic Mouse Brain

İskemik Fare Beyin gelen Bağışıklık Hücreleri İzolasyon ve Akım Sitometrisi Analizi

Ischemic stroke initiates a robust inflammatory response that starts in the intravascular compartment and involves rapid activation of brain resident ...

Isolation and Flow Cytometric Analysis of Glioma-infiltrating Peripheral Blood Mononuclear Cells

İzolasyon ve Glioma-sızmakta periferik kan mononükleer hücrelerinin Akışı Sitometrik Analizi

Our laboratory has recently demonstrated that natural killer (NK) cells are capable of eradicating orthotopically implanted mouse GL26 and rat CNS-1 ...

Isolation of Lamina Propria Mononuclear Cells from Murine Colon Using Collagenase E

Lamina Propria Mononükleer Hücrelerin Murine Kolondan Kollajenaz E Kullanarak İzolasyon

The intestine is the home to the largest number of immune cells in the body. The small and large intestinal immune systems police exposure to exogenous ...

Isolation of Tonsillar Mononuclear Cells to Study Ex Vivo Innate Immune Responses in a Human Mucosal Lymphoid Tissue

Bademcikler Mononükleer Hücrelerin İzolasyon Ex Vivo Doğuştan Gelen Bağışıklık Yanıtları Bir İnsan Mukozal Lenfoid Doku Çalışma

Studying isolated cells from mucosa-associated lymphoid tissues (MALT) allows understanding of immune cells response in pathologies involving mucosal ...

Flotation-Based T Cell Isolation, Activation, and Expansion from Human Peripheral Blood Mononuclear Cell Samples Using Microbubbles

Flotasyon Bazlı T Hücresi İzolasyonu, Aktivasyonu ve Mikrokabarcıklar Kullanılarak İnsan Periferik Kan Mononükleer Hücre Örneklerinden Genişleme

The process of isolating T cells from peripheral blood mononuclear&#160;cells (PBMCs) to establish ex vivo cultures is crucial for research, clinical ...

PBMC Collection and Cryostorage for Mitochondrial Bioenergetics Analysis

Cryopreservation and Bioenergetic Evaluation of Human Peripheral Blood Mononuclear Cells

Preservation of Bioenergetic Parameters in Peripheral Blood Mononuclear Cells After Cryopreservation (Video) | JoVE

İnsan Periferik Kan Mononükleer Hücrelerinin Kriyoprezervasyonu ve Biyoenerjetik Değerlendirmesi

The physiological functions of eukaryotic cells rely on energy mainly provided by mitochondria. Mitochondrial dysfunction is linked to metabolic diseases ...

Histological Staining of Spinal Cord for Assessing EAE Disease Severity

Scoring Central Nervous System Inflammation, Demyelination, and Axon Injury in Experimental Autoimmune Encephalomyelitis

Unveiling the Pathway Linking Obesity to Autoimmune Inflammation in Multiple Sclerosis (Video) | JoVE

Deneysel Otoimmün Ensefalomiyelitte Merkezi Sinir Sistemi İnflamasyonu, Demiyelinizasyon ve Akson Hasarının Skorlanması

Experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE) is a common immune-based model of multiple sclerosis (MS). This disease can be induced in rodents by ...