Name: production of chick embryo extract for the cultivation of murine neural crest stem cells
Uploaded: 2010-11-27T17:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Production of Chick Embryo Extract for the Cultivation of Murine Neural Crest Stem Cells at JoVE.com

Stöd och råd av Markus Pajtler och Robert Bohrer var ovärderliga för visualisering av detta protokoll.

Författarna hävdar att experiment på djur har utförts i enlighet med Europeiska gemenskapernas direktiv (86/609/EEG) i enlighet med riktlinjerna av NIH angående skötsel och användning av djur för försöksändamål förfaranden och de regler som anges av Institutional Animal Skötsel och användning kommittén (IACUC) vid universitetet i Duisburg-Essen (Tyskland). Del 1: Installera (visas inte på Video) FÖRBEREDA material och lösningar (innan man tar äg...

<ol>
	<li>Bronner-Fraser, M., Fraser, S. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+lineage+analysis+reveals+multipotency+of+some+avian+neural+crest+cells.">Cell lineage analysis reveals multipotency of some avian neural crest cells.</a> Nature. 335, 161-164 (1988).</li><li>Stemple, D. L., Anderson, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+a+stem+cell+for+neurons+and+glia+from+the+mammalian+neural+crest.">Isolation of a stem cell for neurons and glia from the mammalian neural crest.</a> Cell. 71, 973-985 (1992).</li><li>Rao, M. S., Anderson, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immortalization+and+controlled+in+vitro+differentiation+of+murine+multipotent+neural+crest+stem+cells.">Immortalization and controlled in vitro differentiation of murine multipotent neural crest stem cells.</a> J Neurobiol. 32, 722-746 (1997).</li><li>Paratore, C., Goerich, D. E., Suter, U., Wegner, M., Sommer, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Survival+and+glial+fate+acquisition+of+neural+crest+cells+are+regulated+by+an+interplay+between+the+transcription+factor+Sox10+and+extrinsic+combinatorial+signaling.">Survival and glial fate acquisition of neural crest cells are regulated by an interplay between the transcription factor Sox10 and extrinsic combinatorial signaling.</a> Cell. 128, 3949-3961 (2001).</li><li>Kim, J., Lo, L., Dormand, E., Anderson, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=SOX10+maintains+multipotency+and+inhibits+neuronal+differentiation+of+neural+crest+stem+cells.">SOX10 maintains multipotency and inhibits neuronal differentiation of neural crest stem cells.</a> Neuron. 38, 17-31 (2003).</li><li>Anderson, D. J., Groves, A., Lo, L., Ma, Q., Rao, M., Shah, N. M., Sommer, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+lineage+determination+and+the+control+of+neuronal+identity+in+the+neural+crest.">Cell lineage determination and the control of neuronal identity in the neural crest.</a> Review Cold Spring Harb Symp Quant Biol. 62, 493-504 (1997).</li><li>Dorsky, R. I., Moon, R. T., Raible, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Environmental+signals+and+cell+fate+specification+in+premigratory+neural+crest.">Environmental signals and cell fate specification in premigratory neural crest.</a> Review Bioessays. 22, 708-716 (2000).</li><li>Sieber-Blum, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Factors+controlling+lineage+specification+in+the+neural+crest.">Factors controlling lineage specification in the neural crest.</a> Int Rev Cytol. 197, 1-33 (2000).</li><li>Dupin, E., Real, C., Ledouarin, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+neural+crest+stem+cells:+control+of+neural+crest+cell+fate+and+plasticity+by+endothelin-3.">The neural crest stem cells: control of neural crest cell fate and plasticity by endothelin-3.</a> Int Rev Cytol. 73, 533-545 (2001).</li><li>Maurer, J., Fuchs, S., J&#228;ger, R., Kurz, B., Sommer, L., Schorle, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Establishment+and+controlled+differentiation+of+neural+crest+stem+cell+lines+using+conditional+transgenesis.">Establishment and controlled differentiation of neural crest stem cell lines using conditional transgenesis.</a> Differentiation. 75, 890-891 (2007).</li><li>Wu, Y. Y., Mujtaba, T., Rao, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+stem+and+precursor+cells+from+fetal+tissue.">Isolation of stem and precursor cells from fetal tissue.</a> Methods Mol Biol. 198, 29-40 (2002).</li></ol>

Detta protokoll är baserad på modifieringar av förfaranden som har beskrivits tidigare 10,11. Förutom tidigare publikationer visar vi här den enskilde olika stegen i processen utvidgats. Detta stöder försöksledaren med viktiga detaljer säkerställa korrekta förfarandet och pålitliga resultat. Vidare, eftersom dissektion processen är en viktig del av CEE utvinning vi beskriver förfarandet för att ta embryon ur gulan säck i varje detalj. Det finns flera viktiga punkter att notera som diskuteras n...

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>11 days incubated chicken eggs</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>S&ouml;rries-Trockels Vermehrungszucht GmbH &amp; Co.KG</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Alcoholic disinfection spray</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sch&uuml;lke &amp; Mayr GmbH</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>DMEMGlutamax</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>GIBCO Invitrogen</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Syringe sterile (60 ml)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>BD Biosciences</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Tubes sterile (50; 15 ml)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Greiner Bio-One GmbH</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Pipet tips sterile</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Starlab GmbH</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Hyaluronidase typeIV-S</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma-Aldrich</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Milipore stericups sterile (0.45; 0.22 &mu;l)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fisher Scientific AG</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Pipettes sterile (25; 10; 5 ml)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Greiner Bio-One GmbH</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Centrifuge L5-50</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Rotor type Ti-45</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

production of chick embryo extract for the cultivation of murine neural crest stem cells

Den neurallist beror på neuro-ektoderm under fosterutvecklingen och kvarstår bara tillfälligt. Tidiga experiment säkras redan pluripotenta stamceller som en integrerad del av neural crest 1. Fenotypiskt är neurallist stamceller (NCSC) definieras genom att samtidigt uttrycka p75 (låg-affina nervtillväxtfaktor receptorn, LNGFR) och SOX10 under sin migration från neural crest 2,3,4,5. Dessa stamceller kan differentiera till glatta muskelceller, chromaffin celler, nervceller och gliaceller, liksom melanocyter, brosk och ben 6,7,8,9. Att odla NCSC in vitro, en speciell neural crest stamceller medium (NCSCM) krävs 10. Den mest komplexa delen av NCSCM är beredningen av kycklingembryo extrakt (CEE) som representerar en viktig källa till tillväxt faktorer för NCSC liksom för andra typer av neurala explants. Andra NCSCM ingredienser bredvid CEE finns kommersiellt tillgängliga. Producera CCE använda laboratorieutrustning standardutrustning är det av stor vikt att veta om de utmanande uppgifter som isolering, maceration, centrifugering och filtrering. I detta protokoll beskriver vi exakt tekniker för att producera en maximal mängd av ren och hög kvalitet CEE.

Watch this Scientific Journal Video about Production of Chick Embryo Extract for the Cultivation of Murine Neural Crest Stem Cells at JoVE.com

Production of Chick Embryo Extract for the Cultivation of Murine Neural Crest Stem Cells

Att odla neurala celler crest stamceller (NCSC) in vitro, är ett speciellt medium (NCSCM) krävs. Viktig del av NCSCM är kycklingembryo extrakt (CEE). Vi beskriver här exakta tekniker för att producera en maximal mängd av ren och hög kvalitet CEE, däribland detaljer isolering, maceration, centrifugering och filtrering.

Produktion av Chick Embryo Extract för odling av murina neurala celler Crest Stem

The neural crest arises from the neuro-ectoderm during embryogenesis and persists only temporarily. Early experiments already proofed pluripotent ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Isolation and Culture of Neural Crest Stem Cells from Human Hair Follicles

Isolering och odling av neurala celler Crest härrör från mänskliga hårsäckar

Hair follicles undergo lifelong growth and hair cycle is a well-controlled process involving stem cell proliferation and quiescence. Hair bulge is a ...

Isolation and Culture of Neural Crest Cells from Embryonic Murine Neural Tube

Isolering och odling av neurallistceller från embryonala Murine Neural Tube

The embryonic neural crest (NC) is a multipotent progenitor population that originates at the dorsal aspect of the neural tube, undergoes an epithelial to ...

Electroporation of the Hindbrain to Trace Axonal Trajectories and Synaptic Targets in the Chick Embryo

Elektroporering av hindbrain att spåra axonal Trajectories och Synaptic Mål i Chick Embryo

Electroporation of  the chick embryonic neural tube has many advantages such as being quick and efficient  for the expression of foreign genes into ...

Growing Neural Stem Cells from Conventional and Nonconventional Regions of the Adult Rodent Brain

Växande neurala stamceller från konventionella och icke-konventionella Regioner av vuxen Gnagare Brain

Recent work demonstrates that central nervous system (CNS) regeneration and tumorigenesis involves populations of stem cells (SCs) resident within the ...

Feeder-free Derivation of Neural Crest Progenitor Cells from Human Pluripotent Stem Cells

Feeder fria Härledning av neurallisten progenitorceller från Human pluripotenta stamceller

Human pluripotent stem cells (hPSCs) have great potential for studying human embryonic development, for modeling human diseases in the dish and as a ...

Enumeration of Neural Stem Cells Using Clonal Assays

Räkning av neurala stamceller Använda Klon Analyser

Neural stem cells (NSCs) have the ability to self-renew and generate the three major neural lineages &#8212; astrocytes, neurons and oligodendrocytes. ...

Development of a Refined Protocol for Trans-scleral Subretinal Transplantation of Human Retinal Pigment Epithelial Cells into Rat Eyes

Utveckling av ett raffinerat protokoll för Trans-skleral Subretinal Transplantation av mänskliga Retinal Pigment epitelceller i råtta ögon

Degenerative retinal diseases such as age-related macular degeneration (AMD) are the leading cause of irreversible vision loss worldwide. AMD is ...

Isolation and Culture of Embryonic Mouse Neural Stem Cells

Isolering och kultur av embryonala mus neurala stamceller

Neural stem cells (NSCs) are multipotent and can give rise to the three major cell types of the central nervous system (CNS). In vitro culture and ...

Identifying Cell Surface Markers of Primary Neural Stem and Progenitor Cells by Metabolic Labeling of Sialoglycan

Identifiera cell ytan markörer av primära neurala stamceller och stamceller genom metabolisk märkning av Sialoglycan

Neural stem and progenitor cells (NSPCs) are the cellular basis for the complex structures and functions of the brain. They are located in specialized ...

The Detection of 5-Hydroxymethylcytosine in Neural Stem Cells and Brains of Mice

Detektion av 5-Hydroximetylcytosin i neurala stamceller och hjärnor av möss

Multiple&#160;DNA modifications have been identified in the mammalian genome. Of that, 5-methylcytosine and 5-hydroxymethylcytosine-mediated epigenetic ...